KB-R7943改善大鼠心肌缺血-再灌注损伤室性心律失常的作用

目的研究Na +_Ca2+交换抑制剂KB -R7943(2_[2_[4_(4_Nitrobenzyloxy)phenyl]cthyl]isoth ioureamethanesulphonate)对大鼠心肌缺血 -再灌注损伤致室性心律失常的抑制作用。方法制备大鼠离体左右心房 ,研究KB -R7943对其心肌收缩力及心率的影响 ;采用离体血管平滑肌张力记录法研究KB -R7943对大鼠胸主动脉血管平滑肌张力作用的影响 ;利用大鼠离体和在体心肌缺血 -再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)致心律失常模型研究KB -R7943的抗心律失常作用。结果KB -R7943对大鼠心肌收缩力、心率及血管平滑肌张力作用的影响均较弱。但它可有效地降低大鼠离体和在体心肌I/R后室早、室速、室颤的发生率和持续时间。结论KB -R7943有较强的抗I/R性心律失常作用 。

新型阻断剂KB-R7943对心室肌细胞Na^+/Ca^(2+)交换电流的影响

目的观察Na+/Ca2+交换蛋白的新型阻断剂KB-R7943对小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)的影响。方法采用打孔膜片钳全细胞技术,记录急性分离的单个小鼠心室肌细胞INa/Ca,观察KB-R7943对INa/Ca的作用。结果细胞外灌流含钙溶液,可引导记录出INa/Ca。该电流能够被5mmolL-1Ni2+阻断;且能被KB-R7943所抑制。KB-R7943对INa/Ca的抑制作用呈剂量依赖性,尤以外向电流敏感。在+50mV,0.3、1μmolL-1的KB-R7943对INa/Ca的抑制率分别达到(63±5)%和(98±1)%(P<0.01)。结论小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换的外向电流能够被KB-R7943抑制,且该抑制作用呈剂量依赖性,提示该药物能够抑制Na+/Ca2+交换蛋白的逆向转运活动,在预防和减轻细胞内的Ca2+超载中可能具有重要作用。

KB-R7943对心力衰竭家兔哇巴因诱发心律失常的抑制作用

目的 探讨钠-钙交换体抑制剂KB-R7943对哇巴因诱发心衰家兔心律失常的影响.方法 40只成年家兔随机分为5组：假手术组、心衰对照组、哇巴因组、哇巴因合并KB-R7943（1μmol/L）组和哇巴因合并KB-R7943（5μmol/L）组.心衰组、哇巴因组、哇巴因合并KB-R7943（1 μmol/L）组和哇巴因合并K.B-R7943（5 μmol/L）组使用主动脉瓣关闭不全联合腹主动脉缩窄的方法建立心衰模型.建模8周后超声检测心功能,并利用Langendorff离体心脏灌流方法检测家兔各项离体心功能指标.灌流哇巴因（5μmol/L,4ml）诱发家兔心衰心脏产生心律失常,观察KB-R7943对离体心衰家兔心律失常的影响.结果 ①超声结果显示,与假手术组相比,心衰对照组家兔左室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（％FS）均明显降低（P＜0.05）.②离体条件下,心衰对照组家兔离体心脏左室发展压（LVDP）、心率（HR）、室内压最大上升速率（＋dp/dtmax）、室内压最大下降速率（-dp/dtmax）较假手术组均明显下降（P＜0.05）.③哇巴因组1h内总心律失常（TT）、室速（VT）、室颤（VF）持续时间较心衰对照组明显增加（P＜0.05）.④与哇巴因组比较,哇巴因联合应用KB-R7943组1h内TT、VT、VF持续时间明显减短（P＜0.05）;与1 μmol/L KB-R7943相比,5μmol/L KB-R7943可使哇巴因诱发TT和VT时间进一步缩短（P＜0.05）.结论 钠-钙交换体抑制剂KB-R7943可抑制哇巴因诱发心衰家兔心律失常的持续时间,且较高浓度（5 μmol/L）KB-R7943对哇巴因诱发心衰家兔心律失常的抑制作用更强.

KB-R7943对豚鼠心室肌细胞Na^+-Ca^(2+)交换电流的作用

目的 观察KB R7943对豚鼠心室肌细胞Na+ Ca2 +交换电流 (INa Ca)的内向电流成分和外向电流成分的影响。方法 采用缺血再灌时胞内Na+超载的细胞模型 ,在同时记录内向、外向电流的双向离子条件下 ,用膜片钳全细胞技术 ,记录INa Ca的电流 电压关系曲线。结果 10 -6和 10 -5mol·L-1KB R7943 ,在 + 5 0mV时 ,对INa Ca的抑制率分别是 2 9 4%和 6 1 7% ;在 - 80mV时抑制率分别是 2 2 1%和 5 6 9%。结论 KB R7943对豚鼠心室肌细胞INa Ca有抑制作用 ,但对外向成分和内向成分的抑制不具选择性。

KB-R7943对大鼠离体心脏缺血／再灌注的后适应保护作用

目的研究钠钙交换抑制剂KB-R7943对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的后适应保护作用,探索给药的最佳时机。方法大鼠麻醉后,取心脏,置Langendorff灌流装置上以台氏液灌流,结扎冠状动脉左前降支制备大鼠离体心脏缺血(30min)/再灌注(120min)模型,监测心功能,测定心肌梗死面积。结果KB-R79431μmol·L-1于再灌注开始前1min至再灌注14min给药可改善心功能各项指标,心肌梗死面积较对照组缩小约77%(P<0·01),与钠氢交换抑制剂cariporide 1μmol·L-1及其与KB-R7943联合于再灌注早期给药产生的心肌保护作用差异无显著性。同浓度KB-R7943于再灌注全程灌流也具有一定的心肌保护作用,再灌注后期给药则对心肌缺血/再灌注损伤无保护作用。结论KB-R7943对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤具有药理性后适应保护作用,最佳给药时机为再灌注早期用药。

SNL大鼠鞘内注射KB-R7943的镇痛作用研究

目的评价SNL大鼠鞘内注射KB-R7943的镇痛作用,并探讨其可能的机制。方法选取成年雄性SD大鼠(180~220 g),建立SNL模型,通过测定机械痛阈选取SNL模型建立成功的大鼠,采用免疫荧光检测其手术侧L4~6脊髓背角钠钙交换蛋白(sodium calcium exchanger,NCX)定位情况;成年雄性SD大鼠进行鞘内置管,置管成功后1周,制作SNL模型,于SNL模型建立的第7天给予鞘内注射不同剂量(5μg、10μg、20μg)KB-R7943以及1%DMSO对照溶剂,通过行为学检测其鞘内注射后引起的机械痛阈和热痛阈变化;记录成年雄性SD大鼠脊髓背角C纤维诱发电位,给予坐骨神经强直电刺激诱发C纤维电位长时程增强(long-term potentiation,LTP),局部脊髓表面给予KB-R7943以及1%DMSO对照溶剂,记录C纤维电位LTP的幅度变化。结果 NCX表达在大鼠L4~6脊髓背角浅层的C纤维投射区内。SNL大鼠在术后第7天给予鞘内注射NCX反向转运抑制剂KB-R7943,KB-R7943注射组大鼠手术侧足底的机械痛阈及热痛阈均高于溶剂组(P<0.05),其抑制作用与剂量呈正相关。大鼠诱发脊髓C纤维电位LTP后,给予局部孵育KB-R7943后可降低C纤维电位幅度,单纯给予溶剂不会影响C纤维电位幅度。结论 SNL大鼠鞘内注射KB-R7943具有剂量依赖性的抗神经病理性疼痛作用,其机制与抑制大鼠脊髓背角内的NCX反向转运功能,并抑制脊髓背角C纤维诱发电位的长时程增强有关。

KB-R7943对豚鼠心室肌细胞振荡式Na^+/Ca^(2+)交换电流的影响

目的观察Na+/Ca2+交换体阻滞剂KB-R7943(KBR)对豚鼠心室肌细胞振荡式Na+/Ca2+交换电流(INCX)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,利用去极化电压脉冲刺激诱发细胞膜产生振荡式电流,在不同的离子环境下,记录KBR对这一电流的影响。结果该振荡式电流的产生与细胞内钙超载引起的肌质网钙释放有关,它的主要成分是Na+/Ca2+交换电流,与细胞膜的阴离子通道无关。KBR对振荡式INCX的抑制作用具有剂量依赖性,对外向和内向振荡电流的抑制率无差异,两者的半数抑制浓度均约为4μmol/L。结论KBR可抑制振荡式INCX,其抑制作用与实验条件下的离子环境有关,与Na+/Ca2+交换体的运转模式无关。

KB-R7943对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用

目的研究KB-R7943对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。方法将30只体重Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组和实验组,每组10只。模型组大鼠麻醉后取出心脏,悬挂于Langendorff灌流装置上进行主动脉逆行灌流,制备大鼠离体心脏缺血30 min、再灌注120 min模型;对照组进行150 min正常灌流;实验组在模型组基础上灌注1μmol·L^(-1)KB-R7943。测定各组心肌梗死面积,检测超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量,用免疫组化法进行PKCδ的测定,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定NCX及SERCA2a mRNA的表达。结果模型组和实验组心肌梗死面积分别为(31. 60±0. 08)%,(14. 00±0. 10)%,差异有统计学意义(P <0. 01)。模型组和实验组SOD含量分别为(4. 43±2. 07),(5. 09±3. 72) U·mL^(-1),MDA含量分别为(0. 70±0. 14),(0. 47±0. 15) nmol·mL^(-1),差异均有统计学意义(均P <0. 01)。对照组、模型组和实验组PKCδ分别为0. 24±0. 02,0. 30±0. 01,0. 38±0. 02,实验组与模型组比较,差异有统计学意义(P <0. 01)。对照组、模型组和实验组NCX mRNA表达分别为0. 24±0. 06,0. 46±0. 07,0. 28±0. 06,SERCA2a mRNA分别为0. 49±0. 05,0. 15±0. 05,0. 30±0. 05,实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。结论 KB-R7943对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用。

KB-R7943与缺血后适应在高脂饮食大鼠心肌缺血再灌注损伤中保护作用

目的探讨选择性Na^+/Ca^(2+)交换抑制剂KB-R7943及缺血后适应在高脂条件下对心肌缺血再灌注损伤的作用。方法 48只大鼠鼠心脏给予完全缺血30 min,之后再灌注120 min。其中,正常饮食喂养大鼠12只作为对照组(C组)。高胆固醇饮食喂养大鼠,缺血后加以处理:12只不干预(高胆固醇对照组,HC组);12只给予KB-R7943(KB-R组);12只给予缺血后3个循环的再灌注和再缺血,每个循环10 s(IPO组)。观察各组大鼠心脏功能,氯化三苯四氮唑染色测量心肌梗死范围、Caspase-3活性及TUNEL染色测定评价凋亡程度。结果血流动力学结果显示,KB-R组和IPO组的心脏功能较HC组有明显提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。TTC染色显示,KB组梗死程度最少,IPO组梗死程度低于高脂对照组。IPO组TUNEL阳性心肌细胞低于高脂对照组,KB-R7943组TUNEL阳性心肌细胞明显低于高脂对照组,且与IPO组有组间差异。KB及IPO组Caspase-3活性与高脂对照组比较降低,IPO组与KB组有组间差异。结论 KB-R7943减少高脂大鼠缺血心肌坏死及细胞的凋亡,从而减轻缺血再灌注损伤。高脂条件下与IPO相比,KB-R7943缺血后处理更具有心肌保护作用。

尼可地尔合用KB-R7943对缺血再灌注损伤离体大鼠心脏的保护作用

目的研究ATP敏感性钾通道开放药尼可地尔合用钠钙交换阻滞药KB-R7943对缺血再灌注损伤离体大鼠心脏的作用。方法离体大鼠心脏通过改良Langendorff装置灌流,减少灌流量造成缺血45 min后再灌注2 h建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,分模型组、尼可地尔组、KB-R7943组、尼可地尔+KB-R7943组,每组10只。TTC染色观察心肌梗死面积,比色法检测冠脉灌流液中过氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,电镜观察心肌超微结构。结果与模型组比较,尼可地尔组和KBR7943组的心肌梗死面积均减小、冠脉灌流液中SOD活性升高、MDA含量下降(P<0.05);与模型组相比,尼可地尔+KB-R7943组的心肌梗死面积、冠脉灌流液中SOD活性和MDA含量改变均非常显著(P<0.01),心肌超微结构损伤减轻,均较尼可地尔组和KB-R7943组有显著改善(P<0.05)。结论尼可地尔合用KB-R7943可显著缩小心肌梗死面积,提高冠脉灌流液中SOD活性,减少MDA含量,减轻心肌超做结构损伤,对缺血再灌注损伤大鼠心脏有保护作用。

KB-R7943对造影剂诱导NRK52E细胞凋亡及p38MAPK信号通路的影响

目的探讨经钠钙离子交换体介导的细胞内钙超载及p38MAPK信号通路是否参与了造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤及反向模式钠钙离子交换体抑制剂KB—R7943对造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡及p38MAPK信号通路的影响。方法鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）被分成6组：A正常对照组；B造影剂组；C甘露醇组；DCCB（1×10^-5mol／L）；EKB—R7943（1×10^-5mol／L）；FKB—R7943（1×10^-6mol／L）。造影剂作用1h后，细胞损伤采用LDH检测，细胞形态变化及细胞凋亡分别由倒置显微镜和流式细胞仪检测；细胞内钙通过Fluo-4染色共聚焦微镜测定；钠钙离子交换体mRNA表达采用RT—PCR测定；p38蛋白的表达采用Westernblot测定。结果造影剂作用1h后，细胞损伤、细胞凋亡、细胞内钙明显增加，显著高于相同渗透压甘露醇组；p-p38表达30min时增加、60min时下降。KB—R7943显著降低细胞损伤、细胞凋亡、细胞内钙水平、抑制p—p38的高表达述并显示出剂量效应；钠钙离子交换体mRNA表达没有变化。结论经反向模式钠钙离子交换体导致的细胞内钙超载诱导了造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡及p-p38蛋白的高表达；KB—R7943以呈剂量方式降低造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡及p—p38蛋白的表达。

增强Na^+-Ca^(2+)交换对大鼠心脏的正性变力作用及对哇巴因效应的加强(英文)

本文采用大鼠乳头肌张力测定及离体心脏灌流技术,研究大鼠心肌Na+-Ca2+交换对乳头肌及离体灌流心肌变力性的影响。采用大鼠特异性Na+-Ca2+交换激动剂E-4031能剂量依赖性地增加大鼠乳头肌的发展张力(P<0.05,n=6)及离体心脏的心泵功能(P<0.05,n=4);特异性Na+-Ca2+交换抑制剂KB-R7943具有相反的效应,并可完全消除E-4031引起的正性变力作用。哇巴因(ouabain,0.5μmol/L)与E-4031(3μmol/L)联合使用,可使乳头肌发展张力由单独使用哇巴因时的0.25±0.03 g升高至0.29±0.04g(P<0.05,n=6);联合用药对大鼠离体心脏心泵功能的影响也强于哇巴因单独作用的效果。本研究结果证实,E-4031通过增强心肌Na+-Ca2+交换,对大鼠乳头肌和离体心脏产生正性变力作用;与哇巴因合用时,它们的正性变力作用有相加作用。

NCX1在肝癌中的表达、调控Ca^(2+)浓度及其对肝癌细胞增殖和迁移的影响

背景与目的:钠钙交换体亚型1(Na^+-Ca^(2+) exchanger isoform 1,NCX1)可通过对细胞Ca2+平衡的调节参与癌症的发生,但是否参与肝癌的发生、发展及其作用机制的研究鲜见报道。该研究旨在探讨NCX1在肝癌中的表达变化,对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法:运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测NCX1 m RNA及蛋白在人正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株HepG2、人正常肝组织和原发性肝细胞癌患者癌组织中的表达。采用共聚焦显微镜技术观察NCX1在细胞外无钠溶液刺激活化后,对正常肝细胞LO2及肝癌细胞HepG2中钙离子浓度的调控。采用MTT法、细胞划痕实验检测NCXl特异性的阻断剂KB-R7943对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移的影响。结果:在肝癌细胞株HepG2和肝细胞癌组织中,NCX1 m RNA和蛋白质的表达均高于正常肝细胞株LO2和正常肝组织(P<0.05)。共聚焦显微镜实验发现,细胞外无钠溶液可以激活细胞内钙升高,正常肝细胞LO2及肝癌细胞HepG2细胞内钙离子浓度均增高,但肝癌细胞HepG2细胞内钙离子增高的幅值明显高于LO2细胞(P<0.05),NCXl特异性阻断剂KB-R7943可以显著阻断胞外无钠诱导的细胞内钙离子升高(P<0.05)。KB-R7943可以显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖及迁移(P<0.05)。结论:原发性肝癌中NCX1的表达量上调,NCX1的活化可以调节细胞内钙变化,抑制NCX1的活性可以进一步抑制肝癌细胞的增殖和迁移。这提示NCX1可能在原发性肝癌的发生、发展中起了重要的作用。

钠钙交换在早期小鼠胚胎心肌细胞自律性和动作电位中的作用

本文旨在研究钠钙交换体(sodium calcium exchanger,NCX)在胚胎早期发育阶段心肌细胞动作电位(action potential,AP)产生过程中的作用。酶解法获得C57小鼠胚胎发育早期的单个心肌细胞后,用全细胞膜片钳技术记录NCX特异性阻断剂KB-R7943(5μmol/L)和SEA0400(1μmol/L)给药前后心肌细胞AP变化。结果显示,KB-R7943和SEA0400对起搏细胞样心肌细胞的AP均具有显著的负性变时作用,但只对部分心室细胞样心肌细胞产生这种作用。KB-R7943对心室细胞样心肌细胞的负性变时作用伴有动作电位时程(action potential duration,APD)缩短;而SEA0400的这种负性变时作用则与舒张期自动去极化速度(velocity of diastolic depolarization,Vdd)降低相关。从胚胎龄9.5天(embryonic day 9.5,E9.5)到E10.5,KB-R7943和SEA0400对心室细胞样胚胎心肌细胞AP负性变时作用逐渐消失。以上结果提示,在胚胎早期的短期发育过程中,NCX在胚胎心肌细胞自律性和AP形成中可能发生发育依赖性变化,表明NCX在不同条件/状态的心肌细胞中具有不同的功能。