常用抗肿瘤药物对KBV200耐药细胞株增殖抑制作用及苦参碱的耐药逆转研究

目的探讨5种常用抗肿瘤药长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、环磷酰胺对KBV200耐药细胞株的增殖抑制作用及苦参碱的耐药逆转作用。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象,采用MTT法观察5种抗肿瘤药物对其增殖抑制作用;并采用MTT法观察苦参碱对KBV200耐药细胞株的耐药逆转作用。结果长春新碱、平阳霉素、环磷酰胺对KBV200耐药细胞株的增殖抑制作用差,而阿霉素和顺铂对KBV200耐药细胞株的抑制作用好;当苦参碱浓度大于200μg/m l时对KBV200耐药细胞株具有直接抑制作用;苦参碱逆转KBV200耐药细胞株对长春新碱、阿霉素耐药的作用较强,逆转KBV200耐药细胞株对平阳霉素、顺铂、环磷酰胺的耐药作用较弱。结论KBV200耐药细胞株对长春新碱、平阳霉素、环磷酰胺3种药物有不同程度耐药;苦参碱能逆转KBV200耐药细胞株对长春新碱、阿霉素的耐药。

苦参碱与3种抗肿瘤药物联合作用对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响

目的：探讨苦参碱分别与3种常用抗肿瘤药物长春新碱（VCR）、阿霉素（ADM）、顺铂（DDP）合用对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响。方法：将培养后的KBV耐药细胞分为对照组、抗肿瘤药物组及其与苦参碱合用组，采用流式细胞仪检测、分析各组细胞周期的变化及凋亡情况。结果：与抗肿瘤药物单用组比较，苦参碱与VCR、ADM合用组细胞处于不同周期的细胞比例及凋亡数均无明显变化；苦参碱与DDP合用组G0～G1期细胞数下降、G2～M期细胞数升高。结论：推测苦参碱逆转KBV200细胞对VCR和ADM的耐药作用可能与细胞周期及凋亡无关；苦参碱能轻度增强DDP的细胞毒作用。

茯苓乙醇提取物的分离纯化及抗KBV200细胞多药耐药活性

目的对茯苓的乙醇提取物进行分离纯化,并对所得的单体化合物进行抗KBV200细胞多药耐药活性的检测。方法采用薄层色谱、柱色谱、葡聚糖凝胶分离、高效液相色谱等方法及波谱技术对茯苓的乙醇提取物进行分离纯化和结构鉴定;利用MTT法检测各化合物对KBV200细胞多药耐药性的逆转作用。结果从茯苓乙醇提取物中分离并鉴定出8个三萜类化合物。在浓度为12.5 mg/L时,8个化合物对KBV200的多药耐药性均有一定的逆转作用,其中化合物3(去氢土莫酸)的逆转作用最强,其逆转倍数为12.6。结论茯苓中的三萜类化合物具有逆转KBV200细胞多药耐药性的作用。

苦参碱与6种抗肿瘤药联用对KBV200耐药细胞株P-糖蛋白表达的研究

目的探讨6种常用抗肿瘤药物长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、5-Fu、环磷酰胺等与苦参碱联合对KBV200耐药细胞株P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象,通过流式细胞仪(FCM)检测6种抗肿瘤药物作用于KBV200耐药细胞株后P-pg表达以及分别联合苦参碱后对P-pg表达的影响。结果苦参碱分别联合长春新碱、阿霉素作用后,KBV200耐药细胞株P-pg表达水平下降。结论苦参碱分别与长春新碱和阿霉素联合作用后,可使KBV200耐药细胞株P-pg的表达水平下降,从而逆转其耐药性。

大黄素体外逆转口腔鳞癌耐药细胞株KBV200的机制初步探讨

目的初步探讨大黄素(EM)体外逆转口腔鳞癌耐药细胞株KBV200的机制。方法用MTT法测定EM对KBV200细胞的逆转作用及量效关系。Western blot法、免疫细胞化学法分别检测单用长春新碱(VCR)和EM联合VCR处理KBV200后,细胞中耐药相关蛋白P-gp、肺耐药相关蛋白(LRP)的量,GST-π、TOPO-Ⅱ的活性,以及肿瘤细胞凋亡蛋白P53、Bcl-2/Bax比值的变化。结果0.7、1.0和1.4μg/ml的EM及5.0μg/ml维拉帕米(VRP)分别联合VCR对KBV200的逆转倍数依次为1.44、2.87、1.76和1.83倍。与单用VCR组相比,EM联合VCR组上调P53的表达(P<0.01),增强TOPO-Ⅱ的活性(P<0.01),下调P-gp的表达(P<0.01);下调LRP的表达量及Bcl-2/Bax比值(P<0.01)。结论EM有逆转人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药性的作用,其机制可能与提高肿瘤细胞内药物的累积量,促进肿瘤细胞的凋亡有关。

苦参碱与8种抗肿瘤药联合对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响

目的探讨8种常用抗肿瘤药物长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、5一氟尿嘧啶、环磷酰胺、阿糖胞酐，三尖杉酯与苦参碱联合对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象，通过流式细胞仪（FCM）检测8种抗肿瘤药物分别联合苦参碱对KBV200细胞株细胞周期的影响。结果苦参碱加顺铂组使KBV200耐药细胞株G0～G1期细胞下降，G2～M期细胞升高；苦参碱加阿糖胞酐组使KBV200耐药细胞株G0～G1期细胞升高，G2～M期细胞下降；苦参碱加5-Fu组对KBV200耐药细胞株的凋亡作用加强；苦参碱与长春新碱、阿霉素、三尖杉酯、环磷酰胺、平阳霉素联合个组中，对KBV200耐药细胞株细胞周期及凋亡均无明显变化。结论苦参碱分别与顺铂和阿糖胞酐联合作用后，均可影响KBV200耐药细胞株的细胞周期。

氯化两面针碱对KB及KBV200细胞周期的影响及其机制

目的:研究氯化两面针碱抑制人口腔鳞癌细胞KB及其耐药株KBV200增殖的作用及机制。方法:应用MTT比色法测定氯化两面针碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测氯化两面针碱对细胞周期的影响;RT-PCR技术和免疫细胞化学法检测cdc2和cyclinB1的mRNA水平及其蛋白表达。结果:氯化两面针碱在体外呈浓度依赖性显著抑制KB及KBV200细胞的生长,48hIC50分别为(2.36±0.22)mg/L和(2.43±0.19)mg/L;与对照组相比,经3mg/L氯化两面针碱作用,KB及KBV200G0/G1期、S期细胞明显减少,G2/M期细胞显著增多(P<0.01);cyclinB1的转录与表达降低(P<0.01),而cdc2的转录与表达未见明显变化(P>0.05)。结论:氯化两面针碱有可能通过下调cyclinB1的转录与表达来诱导KB细胞及其耐药株KBV200的G2/M期阻滞,从而抑制其增殖。

抗肿瘤药物与维拉帕米联合对KBV200细胞P-糖蛋白表达的影响研究

目的:探讨6种常用抗肿瘤药物长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、5-Fu、环磷酰胺与维拉帕米联合对KBV200细胞P-糖蛋白表达的影响。方法:以喉癌KBV200细胞株为研究对象,通过流式细胞术检测6种抗肿瘤药物作用KBV200细胞的P-糖蛋白表达以及联合维拉帕米对P-糖蛋白表达的影响。结果:维拉帕米分别与长春新碱、阿霉素、平阳霉素、环磷酰胺联合作用,使KBV200细胞的P-糖蛋白表达下降80.17%、89.69%、19.19%及53.48%。其中维拉帕米与长春新碱、阿霉素作用较强。结论:维拉帕米分别与长春新碱、阿霉素、平阳霉素、环磷酰胺联合作用后,P-糖蛋白的表达水平明显下降,对KBV200细胞耐药性的逆转有一定作用。

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C亚型表达的关系

目的探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药(multidrugresistance,MDR)的关系。方法(1)用Westernblotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布;(2)流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果(1)PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高,而PKCβ、ε无显著变化,PKCγ、ζ则未测出表达;(2)流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高,PKCβ、ε则无显著差别。结论PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中,PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。

常用抗肿瘤药对喉癌KBV200细胞增殖抑制作用的研究

目的 研究喉癌多药耐药细胞株的耐药谱 ,为实现临床化学治疗个体化提供实验依据。方法 以喉癌KBV2 0 0耐药细胞株为研究对象 ,采用MTT法检测临床常用 8种抗肿瘤药物对该细胞株的抑制作用。结果 长春新碱、阿霉素、平阳霉素、环磷酰胺、阿糖胞苷对KBV2 0 0细胞的抑制作用差 ,三尖杉酯、5 Fu及顺铂对KBV2 0 0细胞的抑制作用好。结论 KBV2 0 0细胞对长春新碱、阿霉素、平阳霉素、环磷酰胺、阿糖胞苷

干扰素对KBv200细胞多药耐药性逆转的研究

目的 :探讨不同浓度的干扰素 (IFN α)对人口腔表皮癌细胞株KB及多药耐药细胞株KBv2 0 0的影响。方法 :以MTT法测定梯度浓度的干扰素及长春新碱 (VCR)的细胞毒性变化。以流式细胞仪测定IFN α作用后肿瘤细胞对罗丹明蓄积作用的变化及P 膜糖蛋白 (Pgp)的变化。用RT PCR法检测多药耐药基因 (mdr 1)mRNA。 结果 :高浓度IFN α(10 0 0 0IU/ml)能明显抑制KB/KBv2 0 0细胞的增殖作用。低浓度IFN α(10 0 0IU/ml)能增强VCR对耐药细胞KBv2 0 0的杀伤作用 ,增加KBv2 0 0细胞对罗丹明的蓄积 ,下调Pgp和mdr 1mRNA表达 ,对敏感细胞KB无作用。 结论 :IFN α对KBv2 0 0细胞的多药耐药性有明显的逆转作用 ,且在一定浓度范围内有剂量依赖性 ,其机制是通过下调Pgp和mdr 1mRNA表达逆转多药耐药性。

粉防己碱对喉癌耐药细胞株KBV200耐药逆转作用的研究

目的:研究天然有效成分粉防己碱(Tetrandrine,TET)对喉癌耐药细胞株KBV200的耐药逆转作用。方法:本研究以喉癌耐药细胞株KBV200为研究对象,采用粉防己碱逆转KBV200对常用抗肿瘤药物阿霉素的多药耐药作用,以经典逆转剂维拉帕米(Verapamil,VRP)为对照组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定其对实验细胞的增殖抑制率。结果:低毒剂量的粉防己碱能逆转实验细胞株对阿霉素的多药耐药(Multidrug resistance,MDR)作用,逆转指数为22.96;维拉帕米逆转指数为9.31。结论:低毒浓度的天然药物粉防己碱能逆转喉癌耐药细胞株KBV200对阿霉素的耐药作用,其逆转效果优于经典逆转剂维拉帕米。

蛋白激酶C-α与KBV200细胞多药耐药相关性的初步研究

目的 探讨蛋白激酶C -α(PKC)与KBV 2 0 0肿瘤细胞多药耐药 (MDR )的关系及其机制。方法 应用3 2 P掺入法检测 2株细胞的PKC活性 ;用Westernblot法检测PKC -α在耐药株KBV 2 0 0及敏感株KB的表达及亚细胞分布 ;流式细胞仪检测PKC -α的荧光强度。结果 KBV 2 0 0细胞的PKC活性较KB细胞明显升高 ,且膜组分PKC活性所占总活性的百分率升高 ;PKC-α亚型的表达选择性升高 ;流式细胞仪检测发现KBV 2 0 0细胞的PKC -α的荧光强度 ( 5 .3 4± 0 .5 6)显著高于KB细胞PKC -α的荧光强度 ( 2 .0 7± 0 .2 1) ,P <0 .0 1。结论 PKC -α与KBV 2 0 0细胞株的MDR表型关系密切 ,PKC -α可能在KBV 2 0 0细胞的MDR表型中起重要作用。

KBv200裸鼠移植瘤模型的建立及其耐药特性的探讨

目的 建立一种人多药抗药性 (MDR)细胞株的裸鼠移植瘤模型并探讨其MDR特性 ,为筛选MDR逆转剂进行体内逆转MDR的研究提供模型。方法 按SPF级动物常规饲养裸鼠 ,鼠腋窝皮下接种 1× 10 7个细胞 ,观察成瘤率及生长特性 ,并比较裸鼠体内细胞与原代细胞耐药特性。细胞毒测定采用MTT法。P糖蛋白 (Pgp)的测定采用流式细胞仪法。结果 KBv2 0 0裸鼠移植瘤的成瘤率为 10 0 % ;在本研究的饲养条件下 ,19d瘤重可达 1 0～ 2 5 g ,平均 (2 1±0 4) g。原代及裸鼠体内KBv2 0 0对长春新碱 (VCR)的IC50分别为 1 479和 1 472 μmol·L-1,两者比较差异无显著性(P >0 0 5 )。原代及裸鼠体内KBv2 0 0的Pgp的表达率分别为 92 1%、91 9% ,二者差异无显著性 ;二者荧光强度亦未见明显改变 ,即Pgp表达量未见改变。 结论 以KBv2 0 0细胞所建立的裸鼠移植瘤模型 ,成瘤率高 ,在实验期间 15～ 2 0d内仍保持其MDR的特性 ,可提供做为MDR研究的体内模型。

Screening of Common Traditional Chinese Drugs for Reversing Multidrug Resistance of KBV200 In Vitro

The ethanolic extracts of 100 common traditional Chinese drugs, which are widely used in many prescriptions in treatment of cancer in China, were screened for MDR of KBV200 cell line in vitro with MTT method. The result showed 9 extracts having MDR reversal activity. They were the extracts of Fructus Lagenariae Sicerariae, Radix Glycyrrhizae, Poria, Herba Andrographitis, Radix Sophorae Tonkinensis, Caulis Mahoniae, Folium Artemisiae Argyi, Rhizoma Curcumae, Fructus Cnidii. Other 5 extracts showed cytotoxic on KBV200 cell line. $$$$

棘霉素对KBV200细胞作用的初步研究

目的初步研究棘霉素(echinomycin)对KBV200细胞(耐长春新碱的口腔癌细胞)的作用及其作用机制。方法采用MTT法及流式细胞仪分别检测KBV200细胞的增殖和凋亡;用同位素掺入、Western blot、RT-PCR等方法分别检测鞘氨醇激酶、P-糖蛋白、缺氧诱导因子的表达。结果棘霉素可诱导KBV200细胞的凋亡,流式结果出现DNA亚二倍体凋亡峰;棘霉素对鞘氨醇激酶、P-糖蛋白、缺氧诱导因子的表达有不同程度的抑制作用。结论棘霉素对KBV200细胞有细胞毒作用,其作用机制与抑制鞘氨醇激酶、P-糖蛋白、缺氧诱导因子的表达有关。

蛋白激酶C活性、表达及亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药相关性的研究(英文)

目的研究多药耐药肿瘤细胞PKC活性、PKC亚型的表达和亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药的关系。方法MTT法检测敏感株KB和耐药株KBV200细胞的耐药性;32P掺入法测定PKC的活性;Westernblot法检测KBV200及其亲本KB细胞株PKC亚型的表达和亚细胞分布。结果长春新碱(VCR)和阿霉素(ADR)对KBV200细胞的IC50值分别高于KB细胞(P<0.01);耐药指数(RI)分别为65.03和19.8。KBV200细胞的膜组分、浆组分的PKC活性均较KB细胞高,KBV200细胞的总PKC活性是KB细胞的2.12倍。Westernblot结果发现KBV200和KB细胞膜组分及浆组分均有PKCα的表达,且KBV200细胞的表达较KB明显增强。PMA可升高KBV200细胞的PKC总活性和膜组分PKC活性,降低浆组分PKC活性、表达(P<0.01);PMA可升高VCR、ADR对KBV200细胞的IC50值(P<0.01)。SP可降低PKC活性;SP预孵育使PKCα膜组分和浆组分的表达均降低,可降低VCR、ADR对KBV200细胞的IC50值(P<0.01)。结论KBV200细胞的PKC活性、表达、亚细胞分布与KB细胞有明显差别,这种差别可能与KBV200耐药性的变化密切相关,在PKC亚型中,PKCα的表达明显高于其他亚型,且高于亲本株,提示KBV200细胞中PKCα与多药耐药相关。