细胞外pH值对KCNQ2/3钾离子通道的调节

目的 研究细胞外pH值改变对KCNQ2 /3钾离子通道的调节。方法 用体外转录法将KCNQ2 /3钾离子通道的mRNA,微注射于爪蟾卵母细胞中,表达KCNQ2 /3电流。用双电极电压钳方法 (TEVC)观察细胞外pH值对KCNQ2 /3通道的调节。结果 细胞外pH减小,抑制KCNQ2 /3电流,影响激活电压,而且这种调节有一定的电压和浓度依赖性。在阈电压附近 -60mV、pH 6 8时对KCNQ2 /3通道的影响最明显。pH值改变还会调节通道开放时程,影响通道激活时间常数。结论 在维持神经细胞静息电位、调节神经兴奋性方面起重要作用的KCNQ2 /3通道,受细胞外pH值调节,这种调节作用可能在神经细胞生理性兴奋和病理性变化中如:惊厥、癫痫、休克有重要意义。

不同浓度氯普鲁卡因对HEK2936细胞KCNQ2/Q3通道电流的影响

目的 评价不同浓度氯普鲁卡因对人胚胎肾细胞（HEK2936细胞）KCNQ2/Q3通道电流的影响.方法 以HEK293细胞作为表达体系,用脂质体交KCNQ2/3钾离子通道基因和绿色荧光蛋白转染至HEK293细胞,使细胞表达KCNQ2/Q3通道.第一部分：采用随机数字表法,将转染后的HEK293细胞分为4组（n=11）：对照组、1、10和100 mmol/L氯普鲁卡因组,记录不同钳制电压（-40、0、40 mV）下HEK293细胞KCNQ2/Q3通道电流,作用时间为1 min.第二部分：采用随机数字表法,将转染后的HEK293细胞分为2组（n=5）：对照组（C组）和10 mmol/L氯普鲁卡因组（L组）,记录不同钳制电压（-80 ～ 30 mV）下HEK293细胞KCNQ2/Q3通道电流,作用时间为1 min.采用单指数方程对通道激活段和去活段进行拟合,计算KCNQ2/Q3通道激活时间常数和去活时间常数.不同激活电压下所获去活尾电流统一标准化后经Boltzmann方程拟合,得到KCNQ2/Q3通道电流-激活电压关系曲线（即通道Ⅰ-Ⅴ曲线）.结果 第一部分：钳制电压-40、0和40 mV时,1、10和100 mmol/L氯普鲁卡因组HEK293细胞KCNQ2/Q3通道电流抑制率高于对照组（P＜0.05或0.01）.第二部分：与对照组比较,钳制电压0 mV时10 mmol/L氯普鲁卡因组KCNQ2/Q3通道激活时间常数延长,钳制电压-80 mV时KC-NQ2/Q3通道去活时间常数缩短,KCNQ2/Q3通道半数激活电压升高,向去极化移动,Ⅰ-Ⅴ曲线斜率减小（P＜0.05）.结论 氯普鲁卡因呈浓度依赖性抑制HEK2936细胞KCNQ2/Q3通道电流；氯普鲁卡因可延迟KCNQ2/Q3通道开放,提前关闭,使KCNQ2/Q3通道活性降低.

瑞替加滨对布比卡因和氯普鲁卡因致小鼠惊厥半数有效剂量的影响

目的通过探讨KCNQ2／3通道开放剂瑞替加滨对布比卡因和氯普鲁卡因致小鼠惊厥的半数有效剂量（ED50）的影响，研究KCNQ2／3通道与局麻药神经毒性的关系。方法清洁级雌性昆明种小鼠，体重20～30g。实验I采用随机数字表法将60只小鼠随机分为2组（n=30）：对照组（C组）和瑞替加滨组（R组），2组随机分为3个亚组，分别为不同剂量氯普鲁卡因组（C＋L1组、C＋L2组、C＋L3组和R＋L1组、R＋L2组和R＋L3组，n=10）。C组和R组腹腔注射0．9％生理盐水0．005ml／g或瑞替加滨20mg／kg，20min后腹腔注射氯普鲁卡因。C＋L1组、C＋L2组、C＋L3组氯普鲁卡因剂量分别为150．0、172．5、198．4mg／kg；R＋L1组、R＋L2组和R＋L3组氯普鲁卡因剂量分别为198．4、228．2、262．4mg／kg。实验Ⅱ采用随机数字表法将80只昆明小鼠随机分为2组（n=40）：对照组（C组）和瑞替加滨组（R组）。2组随机分为4个亚组，分别为不同剂量布比卡因组（C＋B1组、C＋B2组、C＋B3组、C＋B4组和R＋B1组、R＋B2组、R＋B3组、R＋B4组，n=10）。C组和R组腹腔注射0．9％生理盐水0．005ml／g或瑞替加滨20mg／kg，20min后腹腔注射布比卡因。C＋B1组、C＋B2组、C＋B3组、C＋B4组布比卡因剂量分别为37．8、43．5、50．0、57．5mg／kg；R＋B1组、R＋B2组、R＋B3组、R＋B4组布比卡因剂量分别为50．0、57．5、66．1、76．0mg／kg。采用Probit法计算布比卡因和氯普鲁卡因致小鼠惊厥的ED50及其95％可信区间。结果C组氯普鲁卡因致小鼠惊厥的ED50及其95％可信区间为165．3（155．8g／kg-175．0）mg／kg，布比卡因致小鼠惊厥的ED50及其95％可信区间为ED50为41．1（36．7～44．5）mg／kg。R组氯普鲁卡因致小鼠惊厥的ED50及其95％可信区间为212．4（200．2～224．3）mg／kg，布比卡因致小鼠惊厥的ED50及其95％可信区间为51．5（45．1～56．0）mg／kg。与C组比较，R组氯普鲁卡因和布比卡因致小鼠惊厥的ED50升高（P〈0．01）。结论KCNQ2／3通道开放剂瑞替加滨可明显提高氯普鲁卡因和布比卡因的致惊厥的ED50,降低氯普鲁卡因和布比卡因的致惊厥作用，提示局麻药的中枢神经毒性与其对KCNQ2／3通道抑制有关。