Kv4钾通道及其相互作用蛋白KChIP2与心律失常

心肌细胞动作电位复极化异常与心律失常的发生有密切关系。Ito电流是参与心肌细胞动作电位复极化的重要离子流。Kv4.2或Kv4.3是形成Ito通道孔洞的亚基,而Kv4钾通道相互作用蛋白KChIP2则协助在胞质合成的Kv4.2或Kv4.3向细胞膜转运。Kv4钾通道及KChIP2在心肌细胞的表达、分布和功能的变化对心肌细胞Ito电流有重要影响。

COS-7细胞株中KCNE2与KChIP2c共表达对Kv4.2电流复活的影响

目的探讨当钾通道相互作用蛋白(KChIP2)和KCNE2共表达时对电压依赖性钾通道Kv4.2电流复活的影响。方法采用COS-7株细胞表达系统模拟生理条件,将Kv4.2、KChIP2c和KCNE2 cDNA以3∶1∶1的分子比同时转染至COS-7株细胞,用膜片钳的方法记录全细胞电流,用免疫组化聚焦实验和免疫荧光成像证实细胞表达cDNAs编码的蛋白质。结果 KChIP2c加速了Kv4.2的复活,KCNE2与KChIP2c共表达进一步加速了电流的复活,导致了在Kv4.2电流恢复中的"超射"峰电流,一种人类瞬间外向电流(Ito)特有的现象。结论 Kv4.2与KChIP2c和KCNE2的共表达可产生与人类天然Ito相似的电流,提示KChIP2c和KCNE2同时参与构成心肌细胞Ito的电生理特性。

人心房肌KChlP2和SK2基因表达检测及方法研究

目的检测人心房肌KChIP2和SK2基因表达,并构建相应质粒标准品,为进一步研究基因功能奠定基础。方法提取人心房肌组织总RNA,采用RT-PCR方法获取KChIP2、SK2、GAPDH、β-actin目的片段,与pMD-18Tvector连接成重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α中,通过PCR和测序鉴定。提取含目的基因的质粒作为标准品。采用Taqman探针法与SYBR Green I法分别检测人心房肌SK2与KChIP2基因表达和构建标准曲线。结果人心房肌存在KChIP2和SK2基因表达,质粒标准品经过PCR鉴定并测序,与Pubmed数据库完全一致,标准曲线线性关系好,相关系数R2>0.99。结论成功检测人心房肌KChIP2和SK2基因表达,构建的质粒标准品能用于后续实验。