KDM5B基因在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌耐药能力的影响

目的:检测组蛋白去甲基化转移酶KDM5B(JARID1B/PLU-1)在正常卵巢、卵巢癌组织及细胞株中的表达,以及其对卵巢癌细胞株耐药能力的影响。方法:RT-q PCR法检测KDM5B在36例卵巢癌、15例正常卵巢、6例术后化疗耐药复发患者组织及卵巢上皮细胞株IOSE和5株卵巢癌细胞中的表达情况;构建p MSCVpuro-KDM5B过表达质粒和p GIPZ-sh1、p GIPZ-sh2干扰质粒,并筛选得到稳定过表达的SKOV3和稳定干扰的Caov3细胞株,RT-q PCR和Western blot法鉴定调控效果;用浓度梯度递增的顺铂处理SKOV3过表达和Caov3干扰细胞株,CCK-8法检测顺铂半抑制浓度(IC50)变化。结果:RTq PCR结果示,正常卵巢组织中KDM5B相对表达量(1.950±0.3003)低于卵巢癌组织(4.924±0.2989),差异有统计学意义(t=5.909,P<0.0001)。KDM5B表达量与卵巢癌患者的FIGO分期、病理分级、转移和耐药发生明显相关,与患者年龄、CA125水平不相关。6例复发患者中,5例KDM5B表达明显升高(P<0.001)。KDM5B的mRNA和蛋白水平在卵巢上皮性细胞株IOSE中最低,在卵巢癌细胞株SKOV3、HO-8910、ES-2、A2780、Caov3中表达逐渐增加。RT-q PCR结果示,SKOV3过表达组的KDM5B表达量为对照组的27.4倍,Caov3干扰sh1和sh2组分别为对照组的0.38和0.41倍,Western blot也显示过表达和干扰有效。用浓度梯度递增的顺铂处理Caov3细胞株,KDM5B表达量随顺铂浓度增加而逐渐升高;检测SKOV3细胞株KDM5B过表达组IC50为3.666(95%CI为3.067~4.382)μg/ml高于对照组[1.676(95%CI为1.553~1.810)μg/ml],Caov3细胞株干扰sh1组和sh2组分别为3.359(95%CI为2.875~3.925)μg/ml、2.881(95%CI为2.49~3.324)μg/ml,均低于对照组[6.972(95%CI为6.182~7.864)]。结论:组蛋白去甲基化转移酶KDM5B在卵巢癌中表达升高,并且具有促进卵巢癌细胞株耐药的作用。

B族维生素上调KDM5家族减轻PM2.5诱发孕鼠抑郁样行为的作用及机制

目的:探讨孕期B族维生素(VitB)干预是否改善了PM2.5暴露所致的孕鼠抑郁样行为及可能的表观遗传学机制。方法:采用气管雾化的方式建立孕期PM2.5损伤模型,同步进行B族维生素干预。将孕鼠随机分为PBS对照组、PM2.5暴露组和VitB干预组。采用旷场实验分析孕鼠抑郁样行为的变化;分离孕鼠大脑皮层,采用NeuN免疫荧光染色及高尔基染色检测神经元的损伤情况,Western blot检测突触蛋白的表达变化;采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光双标染色检测孕鼠大脑皮层KDM5家族的表达变化和分布情况,及组蛋白H3K4的甲基化水平。结果:B族维生素干预能明显改善PM2.5暴露所致孕鼠的抑郁程度,中央区活动时间显著延长(P<0.05),中央区活动距离和旷场运动总距离增多(P<0.05);B族维生素干预能缓解PM2.5导致的孕鼠大脑皮层神经元损伤,树突形态的复杂性得到保护,突触相关蛋白——突触小泡蛋白、生长相关蛋白43和突触后致密蛋白95水平显著回升(P<0.05);大脑皮层KDM5A、KDM5B和KDM5C的mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.05),组蛋白H3K4me3的蛋白水平明显得到纠正;大脑皮层KDM5A^(+)/NeuN^(+)、KDM5B^(+)/NeuN^(+)和KDM5C^(+)/NeuN^(+)双阳性神经元明显增多,大脑皮层椎体神经元恢复至正常。结论:孕期给予B族维生素干预,可以通过上调KDM5纠正大脑皮层组蛋白的甲基化水平,从而减轻PM2.5造成的神经元损伤及孕鼠抑郁样行为。

Jarid1b对食管鳞癌KYSE-150细胞增殖及分化的影响

目的研究去甲基化酶Jarid1b对食管鳞癌细胞增殖及分化的影响,为食管鳞癌治疗提供新的靶点。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)以及Western-blot方法检测低分化食管鳞癌细胞系KYSE-150和高分化食管鳞癌细胞系TE-1中去甲基化酶Jarid1b、细胞角蛋白10(CK10)、细胞角蛋白13(CK13)的表达。采用慢病毒转染的方式获得能够在药物诱导时过表达Jarid1b的KYSE-150稳转细胞系,应用CCK8细胞毒性实验检测过表达Jarid1b对该细胞系增殖能力的影响;采用RT-qPCR和Western-blot方法检测过表达Jarid1b后细胞系CK10和CK13表达量的变化。结果 RT-qPCR检测结果表明,和低分化KYSE-150细胞系相比,高分化TE-1细胞系中CK10和CK13高表达(t=22.07、38.44,P<0.05);Western-blot检测结果表明,和KYSE-150细胞系相比,TE-1细胞系中Jarid1b的蛋白表达水平明显增高。CCK8实验结果显示,与未诱导的KYSE-150细胞系相比,诱导KYSE-150细胞系过表达Jarid1b24、48h后,该细胞的增殖能力明显下降(t=10.94、16.71,P<0.05)。RT-qPCR和Western-blot方法检测结果表明,诱导KYSE-150细胞系过表达Jarid1b以后,与未诱导的KYSE-150细胞系相比CK10和CK13的表达明显增高(t=9.706、5.23,P<0.05)。结论去甲基化酶Jarid1b过表达可以抑制低分化食管鳞癌细胞KYSE-150的增殖并促进其分化。