不同杀虫剂选育对家蝇抗药性水平及kdr基因频率的影响

采用杀虫剂（溴氰菊酯和甲基嘧啶磷）筛选及不接触药物自然衰退的方法，研究了家蝇Musca domestica氯氟氰菊酯高抗品系（Cyh—R）对杀虫剂的抗性变化，探讨蝇类抗药性治理的方法。用点滴法测定氯氟氰菊酯对不同家蝇品系的毒力，比较抗药性的变化，结合特异性等位基因PCR扩增（PASA）技术检测了不同家蝇品系的kdr基因频率，探讨kdr基因频率与抗性水平之间的关系。结果表明：甲基嘧啶磷筛选后，氯氟氰菊酯对第2～8代Cyh—R品系的LD50呈递减趋势，从F0的2．8434μg／蝇降为F8的0．4404μg／蝇，但第8—18代Cyh—R品系的LD5u呈逐代递增趋势；溴氰菊酯筛选后，氯氟氰菊酯对Cyh—R品系第2～16代的LD50呈上升趋势，从F0的2．8434μg／蝇升至F16的24．3249μg／蝇；表明了施用有机磷杀虫剂可降低其对氯氟氰菊酯的抗药性，而施用拟除虫菊酯药剂则有助于其对氯氟氰菊酯抗药性的增长；不使用任何杀虫剂也能降低其对氯氟氰菊酯的抗药性，但下降速率低于甲基嘧啶磷。PASA技术检测表明Cyh—R品系的kdr抗性基因频率为88．8％，不经过任何药剂筛选其kdr抗性基因频率下降程度最大，达到69．7％；甲基嘧啶磷筛选后其结果降为78．8％，而经溴氰菊酯筛选后kdr抗性基因频率则明显升高，达到98．9％。通过对kdr抗性基因频率和抗性水平进行相关和回归分析表明kdr抗性基因频率与家蝇对氯氟氰菊酯的LD50呈对数关系，即LD50值高的品系其kdr抗性基因频率相应的也较高。建议在家蝇防治中考虑轮换用药。

重庆市中华按蚊溴氰菊酯抗性与kdr基因突变的关系

摘要中华按蚊是我国的主要传疟媒介之一。近年来我国不同地区的蚊虫抗药性监测数据显示，多种媒介蚊虫对拟除虫菊酯杀虫剂产生了不同程度的抗药性。为了解重庆市中华按蚊对拟除虫菊酯杀虫剂抗性水平及其与kdr基因突变的关系，我们于2011年7～9月采用WHO标准区分剂量法对重庆市璧山县和秀山县的中华按蚊做了抗药性生物测定，通过测序检测了钠离子通道IIS6节段kdr基因突变。生物测定结果显示璧山县种群死亡率为32．72％，秀山县种群为12．62％，比1992和2001年抗性水平（死亡率分别为80．72％、76．92％）明显提高。测序得到325bp的kdr片段，在L1014位点有‘兀＇．I＇、TGT突变。突变统计显示，璧山县种群基因突变频率为7．23％，秀山县种群为68．60％，两个群体的基因突变与抗药性的关联未达显著水平，表明这两个中华按蚊种群L1014位点的rI’rI＇T和TGT突变与抗药性表型间无关联。中华按蚊抗药性分子机理需要进一步扩大研究种群，检测其他突变位点以及相关代谢酶的活性。

KDR基因遗传多态性与高血压患者生化指标相关性研究

目的研究KDR基因遗传多态性与高血压患者生化指标的相关性。方法选择100例原发性高血压患者为观察组,另选择同期体检的100例非高血压体检者为对照组。采取两组对象外周血,建立KDR基因SNP飞行时间质谱检测方法,检测KDR基因遗传的多态性。并采用全自动生化仪测定观察组患者的血清指标。结果两组对象KDR的SNP基因型和等位基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),具有群体代表性。观察组患者的SNP-604基因型分布频率明显高于对照组,SNP-1719基因型分布频率明显低于对照组(P<0.05);在等位基因频率上,观察组患者的RR等位基因频率明显高于对照组,SS等位基因频率明显低于对照组(P<0.05)。同时,SNP-604基因型43例患者的平均FBG、TC、LDL-c、UA、NADPH指标水平明显高于SNP-1192基因型和SNP-1719基因型患者(P<0.05)。结论 KDR基因遗传多态性与高血压患者生化指标密切相关,通过对患者KDR基因遗传多态性的分析有助于制定个体化高血压治疗方案,提高高血压的临床诊治水平。

KDR基因和Sema3基因在再障和正常人骨髓基质细胞中的表达

目的 :了解激酶插入区域受体 (kinaseinsertdomainreceptor,KDR)基因和脑信号蛋白Ⅲ(Semaphorin3,Sema3)基因在再生障碍性贫血 (AA)和正常人的骨髓基质细胞 (BMSC)和骨髓造血细胞中的表达情况。方法 :收集 9例AA和 33例正常骨髓标本 ,分离单个核细胞 (MNC)后体外长期培养扩增BMSC ,并收集悬浮细胞 (骨髓细胞 )。RT -PCR -ELISA检测KDR基因和Sema3基因在BM SC和造血细胞中的表达 ,分析表达率 ,并以管家基因 β2 微球蛋白 (β2 M)为内参照进行半定量分析。结果 :KDR基因在正常对照BMSC中的表达率 (97 0 % )明显高于对应的骨髓细胞 (70 8% ,P =0 0 0 7)。KDR基因在AA的BMSC和骨髓细胞中的表达率和表达水平与正常对照比较均无显著差异。Sema3基因在正常BMSC中的表达水平明显低于其对应的骨髓细胞 (P =0 0 35 )。Sema3基因在AA的BMSC和骨髓细胞中的表达率和表达水平与正常对照组比较均无显著差异。KDR基因和Sema3基因的表达水平在正常造血细胞中呈显著正直线相关 (r =0 70 3,P =0 0 0 2 )。结论 :KDR基因在BMSC中的高表达提示其可能在维持造血微环境中有重要作用。Sema3基因在造血细胞中的高表达状态提示其可能具有维持造血细胞生存的作用。

肺癌组织中KDR基因的表达及其临床意义探讨

目的 :研究KDR (kinasedomain containingreceptor)在肺癌中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组化方法 (LSAB法 ) ,检测 114例肺癌组织、癌旁组织 ,3 0例肺良性病变组织中的KDR表达水平。结果 :肺癌组织 ( 86 3 7± 10 90 )中KDR表达水平显著高于肺癌旁组织 ( 4 5 15±2 1 97)和肺良性病变组织 ( 2 0 0 2±11 60 ) ,P <0 0 1,肺癌旁组织显著高于肺良性组织 ,P <0 0 5 ;KDR表达水平与肺癌原发肿瘤大小、淋巴结转移状态 ,P TNM分期和细胞分化程度均有密切关系 ,P <0 0 1,KDR高表达组患者 5年生存率( 2 1 19% )显著低于低表达组 ( 5 2 74% ) ,P <0 0 5。结论 :KDR参与肺癌的发生、发展、转移 。

KDR基因遗传多态性与高血压患者生化指标相关性研究

目的探讨KDR基因遗传多态性与高血压生化指标间的相关性。方法纳入原发性高血压患者与健康体检者各60例,行对比分析。采集所有对象外周血,检测KDR基因遗传多态性,同时监测患者生化指标。结果高血压患者KDR基因多表现为SNP-604,健康患者多表现为SNP-1719,组间差异有统计学意义(P<0.05);SNP-604基因型患者FBG、TC、LDL-c、UA、NADPH水平明显高于其他类型患者(P<0.05)。结论 KDR基因遗传多态性可能影响高血压患者生化指标,对其行临床检测有助于拟定更合理的血压控制方案。

沉默KDR基因乳腺癌MCF-7细胞的生物学特征改变

背景:随着基因工程以及肿瘤生物分子学等新兴学科的发展壮大,基因治疗肿瘤成为一种新的治疗模式。目的:探讨KDR基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力和侵袭能力的影响。方法:设计针对KDR基因的小分子干扰RNA(siR NA)序列,转染人乳腺癌MCF-7细胞,应用RT-PCR及Western blot法检测沉默KDR基因后MCF-7细胞KDR mR NA及蛋白的表达;应用流式细胞仪、CCK-8增殖实验、小室侵袭实验检测沉默KDR基因后乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期、增殖能力、侵袭能力的变化。结果与结论:KDR基因沉默48 h后,乳腺癌MCF-7细胞KDR mR NA及蛋白表达明显降低;乳腺癌MCF-7细胞停滞在G0/G1周期,S期的细胞数目减低,细胞增殖得到显著抑制,穿过滤膜的细胞数量明显减少。上述结果表明沉默KDR基因后乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭能力得到明显抑制,说明KDR基因沉默可能成为新的有效治疗乳腺癌的靶点。

济宁市白纹伊蚊kdr基因突变检测

目的 调查济宁市白纹伊蚊对常用杀虫剂溴氰菊酯的抗性表型及击倒抗性相关基因改变。方法 使用世界卫生组织(WHO)标准成蚊接触筒法检测白纹伊蚊成蚊对溴氰菊酯的抗药性。PCR检测kdr基因1 532和1 534位点的突变情况。结果 在电压门控钠离子通道Vgsc基因中发现了I1 532T,F1 534L和F1 534S突变。I1 532T突变等位基因均出现在抗性蚊虫中。相关性研究显示F1 534S突变与溴氰菊酯抗药性表型呈正相关。结论 山东省济宁市蚊虫抗药性水平较高,需要定期进行蚊虫抗药性监测和风险评估。

KDR基因在延黄牛不同部位脂肪组织中相对表达量的研究

试验旨在阐明KDR基因在不同脂肪组织中的表达水平，为延黄牛脂肪沉积规律提供参考。以延黄牛皮下脂肪和腹部脂肪为材料，采用荧光定量PCR技术检测不同部位脂肪组织中KDR基因的相对表达量，通过2^△△Ct法处理不同部位脂肪组织相对表达量数据，SPSS 17.0软件分析表达水平差异显著性。结果表明：KDR基因在腹部脂肪中的表达量显著高于皮下脂肪组织（P〈0．05），研究结果可为进一步探讨不同部位脂肪组织的发育机制奠定基础。

高分辨率熔解曲线分析检测家蝇kdr基因突变

目的探讨kdr基因在家蝇溴氰菊酯抗性增加中的作用。方法首次将高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析与半定量PCR相结合,用于分析家蝇抗性基因kdr扩增和突变情况。对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系家蝇相比,kdr的mRNA表达量在现场品系家蝇中没有显著改变(P>0.05)。使用HRM对kdr进行突变分析,发现所有样本均为同一基因型。经核酸测序,该扩增片段没有突变位点。结论杭州家蝇溴氰菊酯抗性增加与kdr基因无关。

安徽省中北部淡色库蚊对多种杀虫剂抗性及其kdr基因突变研究

目的了解安徽省中北部地区淡色库蚊对多种杀虫剂的抗药性现状及其kdr基因突变情况。方法 2014年6-9月在淮北市、蚌埠市和滁州市3地采集淡色库蚊幼虫,带回实验室饲养至成虫,采用WHO成蚊接触筒药膜滤纸接触法对其进行0.05%溴氰菊酯、5%马拉硫磷、0.1%噁虫威、4%DDT抗性生物测定。以PCR扩增经溴氰菊酯抗性测定的库蚊抗性相关kdr基因并进行测序,统计L1014位点突变情况。结果上述3个地区淡色库蚊对溴氰菊酯、马拉硫磷、噁虫威、DDT 4种杀虫剂都产生了不同程度的抗药性,对DDT产生的抗性较高;虽然3地淡色库蚊接触DDT后的死亡率差异无统计学意义(F=1.027,P>0.05);但接触溴氰菊酯、马拉硫磷、噁虫威后的死亡率差异均有统计学意义(F=23.823、33.955、128.841,P均<0.01)。3地淡色库蚊种群的kdr基因1014位点均存在L1014F、L1014S这2种非同义突变;L1014F突变频率与溴氰菊酯抗性水平呈正相关(r2=0.718,P<0.01)。结论安徽省中北部地区淡色库蚊对溴氰菊酯、马拉硫磷、噁虫威、DDT均产生了较强的抗性,kdr基因L1014F突变频率与溴氰菊酯抗性水平呈正相关;各地区卫生部门需加强对媒介蚊虫抗性的动态监测。

北京台湖地区淡色库蚊对3种常用杀虫剂的抗药性及kdr基因多态性研究

目的了解北京台湖地区淡色库蚊对常用杀虫剂的抗药情况和当地淡色库蚊kdr基因多态性,为该地区淡色库蚊防治提供科学指导。方法采用幼虫浸渍法对氯菊酯、残杀威和毒死蜱进行抗药性生物检测,以等位基因特异性PCR(AS-PCR)为检测方法确定当地淡色库蚊kdr基因型的频率。结果当地淡色库蚊对氯菊酯、残杀威和毒死蜱的抗性系数分别为15.9、4.2和3.6;当地淡色库蚊中kdr基因存在一种突变(L1014F型),突变基因占基因总数的25.7%。结论北京台湖地区的淡色库蚊已对氯菊酯产生较强抗性,建议在以后的防治工作中通过杀虫剂的复配和交替用药达到蚊虫防治目的。

TaqManMGB探针实时荧光定量PCR用于中华按蚊kdr基因突变检测的研究

目的建立一种用于中华按蚊杀虫剂抗性相关kdr基因突变检测的实时荧光定量PCR方法。方法根据中华按蚊kdr基因序列及其L1014位点常见的突变类型设计一对引物和三条TaqMan MGB探针,对TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR反应体系和条件进行了优化,选择经测序鉴定后的6种中华按蚊kdr基因常见类型对该方法进行验证,并用该方法对50个实验室和113个现场中华按蚊样本进行检测。结果实时荧光定量PCR方法能对中华按蚊kdr基因6种不同的基因型进行检测,单管法可判断kdr基因L1014是否发生突变,双管法可对具体突变类型进一步鉴别。经检测,50个实验室样本均为野生型纯合体,而113个现场样本中,仅12个样本为野生型纯合体,其余101个样本均发生了L1014F或L1014C突变,突变频率为87.61%。结论TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR可用于中华按蚊kdr基因L1014位点突变的检测。

淡色库蚊kdr等位基因突变及抗药性检测方法的研究

目的了解山东省不同地区的淡色库蚊成蚊对溴氰菊酯的抗药性水平及其kdr等位基因的突变与抗药性水平间的关联情况,并探索建立蚊虫抗药性的现场检测方法。方法采用PCR和AS-PCR技术,使用特异性引物克隆不同地区野生淡色库蚊成蚊kdr基因序列,并进行基因测序。利用线性回归分析判断其突变情况与抗药性的关联情况。结果成功克隆出kdr等位基因,通过基因序列分析发现在淡色库蚊钠通道第II结构域S6节段1014位点上存在2种突变,即L1014F:TTA突变为TTT,相应的亮氨酸(L)被苯丙氨酸(F)取代,L1014S:TTA突变为TCA,相应的亮氨酸(L)被丝氨酸(S)取代。Kdr基因L1014F突变和L1014S突变与淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性表型呈正相关。蚊虫抗药性检测的结果显示PCR技术优于AS-PCR技术。结论淡色库蚊kdr基因突变与溴氰菊酯抗药性表型呈正相关,PCR和AS-PCR技术都可以应用于蚊虫抗药性的现场检测。

山东省济宁市白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性与kdr等位基因突变观察

目的了解山东省济宁市白纹伊蚊现场群体对溴氰菊酯的抗药性,并检测击倒抗性(kdr)等位基因突变情况,为kdr突变作为杀虫剂抗性检测的生物标记提供理论依据。方法WHO成蚊接触筒法测定白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)基因部分片段,测序后检测kdr等位基因突变情况。结果WHO成蚊接触筒检测济宁白纹伊蚊雌蚊死亡率为44.58%,在VGSC基因1534氨基酸位点检测到3种等位基因类型:野生型TTC(F1534)(71.43%)和突变型TCC(F1534S)(13.69%)、TTG(F1534L)(14.88%);检测到5种等位基因型:野生型纯合子TTC/TTC,突变型纯合子TCC/TCC、TTG/TTG,以及野生/突变型杂合子TTC/TTG、TTC/TCC。结论济宁市白纹伊蚊对溴氰菊酯已产生抗药性,并监测到其1534氨基酸位点上存在2种kdr等位基因点突变,可能与杀虫剂的长期选择压力有关。

家蝇kdr等位基因频率与溴氰菊酯剂量相关性研究

在实验室条件下对家蝇(Musca domestica)种群施加不同剂量的溴氰菊酯,检测不同剂量组家蝇在溴氰菊酯作用下kdr等位基因的突变状况。结果显示,家蝇实验室种群的kdr等位基因频率从第1代(G1)的3.33%上升到第9代(G9)的91.67%。家蝇种群kdr等位基因频率与种群接受的溴氰菊酯累积剂量之间呈显著的正相关(R=0.98,P<0.01)。这为利用蝇类kdr等位基因频率从宏观上监测自然环境中溴氰菊酯的使用及污染状况提供了依据。

海口市白纹伊蚊对菊酯类杀虫剂的抗药性及击倒抗性基因突变分析

目的了解海口市白纹伊蚊对溴氰菊酯和氯菊酯的抗药性,并检测其击倒抗性(kdr)基因突变型,阐明抗性表型与kdr基因突变的关系。方法在海口新埠岛、龙塘镇、石山镇、白沙门和花卉市场采集白纹伊蚊幼虫,应用浸渍法测定其对溴氰菊酯和氯菊酯杀虫剂的敏感性,以抗性倍数确定抗性级别。对应生物测定的样品扩增和分析白纹伊蚊的kdr基因部分片段,采用χ2检验比较抗性表型与kdr突变基因型的差异性。结果海口白纹伊蚊花卉市场和白沙门群体对溴氰菊酯和氯菊酯均产生抗性,花卉市场群体对溴氰菊酯的抗性倍数高达436.36,为高度抗性。龙塘镇和石山镇群体对氯菊酯均为敏感,对溴氰菊酯的抗性为低度(9.09)或中度(18.18)。新埠岛群体对溴氰菊酯和氯菊酯均为敏感。在对应检测的317只白纹伊蚊的kdr基因中,发现1 534位点存在点突变,检测到2种突变等位基因(TGC/C、TCC/S)。5种基因型和频率分别为野生型TTC/TTC(62.15%)、野生/突变型杂合子TTC/TGC(0.63%)和TTC/TCC(16.09%)、突变型纯合子TCC/TCC(20.82%)以及突变型杂合子TGC/TCC(0.32%)。χ2检验结果显示,接触菊酯类杀虫剂后敏感表型与抗性表型个体中,kdr基因型间的差异有统计学意义(P<0.05),在抗性表型群体中的kdr突变型基因型的频率(42.94%)大于敏感表型个体(31.97%)。结论海口市白纹伊蚊多个群体对溴氰菊酯和氯菊酯同时存在抗性,抗性表型与kdr突变基因型密切相关。本研究首次记录了kdr新的等位基因TCC/S。

中华按蚊对菊酯类杀虫剂的抗性及kdr突变

目的了解江苏省洪泽湖地区疟疾媒介中华按蚊对菊酯类杀虫剂的抗性状况及钠离子通道部分位点突变情况。方法 2012-2013年8-9月,沿洪泽湖周边采集淮安、洪泽、泗洪、盱眙、泗阳等地区中华按蚊成蚊样本,圆球法检测击倒中时间(KT50)。多重PCR法检测钠离子通道1014位点kdr基因突变情况。结果 5个地区采集的按蚊均为中华按蚊,中华按蚊成蚊对氯菊酯、高效氯氰菊酯、溴氰菊酯3种杀虫剂的平均KT50分别为16.92、16.53、22.98 min,抗性倍数为4.61、5.45和4.60,均为抗性种群。部分kdr基因发生突变,存在L1014C和L1014F两种突变类型,7种基因型(TTG/TTG,TTG/TTT,TTG/TTC,TTG/TTG,TTT/TTT,TTT/TTC,TGT/TGT)主要突变类型为TTT(或TTC),突变频率为72%~87%,其次为TGT突变12%~21%,敏感的TTG较少。结论该地区中华按蚊对3种菊酯类杀虫剂产生一定的抗性,钠离子通道kdr基因L1014位点出现高频率的突变,突变类型主要为TTT和TGT,提示该地区中华按蚊成蚊防治需根据抗性监测结果加强抗性治理。

胶质瘤中血管内皮生长因子受体FLT-1和KDR mRNA表达的差异及其与肿瘤病理的关系

目的 探讨胶质瘤中血管内皮生长因子 (VEGF)受体KDR和FLT 1的基因表达水平及其与肿瘤病理的关系。方法 应用逆转录PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT PCR)方法检测 4 3例胶质瘤和 5例正常脑组织标本中KDR和FLT 1的基因表达情况 ,结合凝胶分析仪半定量的检测肿瘤标本中特异性mR NA的含量 ,并与肿瘤的临床病理进行比较。结果 电泳结果 :FLT 1在 6 4 5bp左右可见一明亮的条带 ;而KDR在1 0 0 0bp以上 (1 2 4 1bp)可见一明亮的条带 ,其亮度均随肿瘤级别的升高而升高。FLT 1mRNA的相对含量Ⅰ～Ⅳ级依次为 :0 .6 4± 0 .0 8、0 .86± 0 .1 0、1 .2 3± 0 .0 6、1 .37± 0 .0 6 ;正常脑组织为 0 .34± 0 .0 4。KDRmRNA的相对含量Ⅰ～Ⅳ级依次为 :0 .70± 0 .0 8、0 .92± 0 .1 1、1 .6 2± 0 .36、2 .86± 0 .30 ,正常脑组织为 0 .4 0± 0 .0 7。VEGF两种受体mRNA的相对含量随肿瘤级别的增加而增加 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 0 1 )。结论 两种受体之间的差异明显 ,总的来说 ,KDR要比FLT 1的mRNA含量高 ,而随着胶质瘤恶性程度的增加 ,这种差别明显增大 ,尤其在胶质母细胞瘤中 ,KDR的平均相对mRNA含量是FLT 1的