母细胞性浆样树突细胞肿瘤13例临床病理学特征

目的:分析母细胞性浆样树突细胞肿瘤(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm,BPDCN)的临床病理学特征。方法:收集2013年1月至2022年3月北京大学第一医院确诊的BPDCN患者的病历资料共13例,回顾性分析患者的临床表现、组织病理学特征、免疫表型及其预后。结果:13例患者男性11例,女性2例,中位年龄62岁(5~78岁)。13例中单器官受累5例,均为皮肤受累;多器官受累8例(皮肤/脑/乳腺+骨髓受累3例,皮肤+骨髓+淋巴结受累3例,皮肤+骨髓+淋巴结+脾受累2例)。组织病理学分析以中等至大型幼稚母细胞一致性增生浸润为特征,浸润皮肤真皮全层,骨髓病变以弥漫性浸润为主,淋巴结受累时淋巴结结构完全破坏,脾累及者主要侵犯脾红髓。免疫组织化学染色显示,13例均不同程度阳性表达CD4、CD56、CD123(13/13),9例均表达TCL1(9/9);部分表达CD68(KP1)(8/13)、TdT(7/12),CD117(2/6),显示高Ki-67增殖指数(40%~80%);不表达CD20、CD3、CD34、MPO、CD30;EBER原位杂交阴性(0/9)。明确诊断后6例接受化疗,其中1例辅以放疗,2例接受后续骨髓移植;另有2例仅维持治疗;随访中位时间14个月(6~36个月),5例死于疾病进展(6~18个月),3例存活(7~36个月),5例失访。结论:BPDCN是罕见的恶性淋巴造血系肿瘤类型,侵袭性强,临床预后较差。诊断需结合临床特征、组织病理学、免疫组织化学表型,并注意与其他母细胞形态或CD4+CD56+淋巴造血系肿瘤相鉴别。

KG_1及其诱导的树突样细胞中DC-SIGN的表达

目的了解在KG1诱导来源的树突样细胞(Dendritic-like cells, DLCs)中DC特异性C型凝集样受体DC-SIGN的表达.方法采用佛波酯(PMA)和离子霉素(Ionomycin)诱导KG1细胞为DLCs,采用Western免疫印迹、RT-PCR和流式细胞仪检测KG1和KG1来源的DLCs不同诱导时期DC-SIGN的表达.结果形态学方法确定成功诱导了KG1来源的DLCs,KG1细胞和其来源的DLCs均有DC-SIGN的表达,且当KG1诱导为DLCs细胞后DC-SIGN表达增强,尤其在DLCs的早期成熟阶段(诱导12～24 h).结论 KG1细胞和其来源的DLCs上均有DC-SIGN的表达,且在诱导为DLCs后DC-SIGN的表达增强,为进一步研究DC-SIGN介导的抗原呈递途径奠定了基础.

PD-1联合Rd方案治疗母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤1例

母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm,BPDCN)是一种罕见的血液系统恶性肿瘤,因浆细胞样树突状细胞异常克隆而发病~([1])。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将其归为组织细胞/树突细胞肿瘤类~([2])。BPDCN临床表现多样,包括皮肤损害、血细胞减少、骨髓和淋巴结或器官受累,易发生漏诊误诊。目前关于BPDCN的治疗尚无标准方案。现报道浙江中医药大学附属第一医院收治的1例合并梅毒的BPDCN高龄患者应用程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)联合来那度胺/地塞米松(lenalidomide/dexamethasone,Rd)方案治疗取得的效果,并进行相关文献复习,以期提高临床医生对该病的认识。

组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1抑制骨髓来源树突状细胞的抗原提呈功能及炎性细胞因子的分泌

目的研究组蛋白H2A去泛素化酶Myb样SWIRM和MPN结构域1(MYSM1)对骨髓来源树突状细胞(BMDC)吞噬、抗原提呈、炎性细胞因子mRNA水平的影响。方法分离小鼠的骨髓细胞,在体外联合粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导骨髓细胞分化为DC,利用小干涉RNA(siRNA)下调MYSM1的表达,采用免疫荧光微球实验检测BMDC的吞噬功能、流式细胞术检测BMDC的抗原提呈功能、实时定量PCR检测BMDC的IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达变化,探讨MYSM1下调后DC在固有免疫应答中的作用。结果下调MYSM1的表达后,BMDC的吞噬功能无显著变化,抗原提呈功能增强,IL-6、TNF-α的表达增强。结论 MYSM1在固有免疫应答中可以抑制BMDC的抗原提呈功能及炎性细胞因子分泌能力。

CD11b激动剂leukadherin-1通过阻断NF-κB p65通路抑制小鼠骨髓来源树突状细胞TLR7和TLR9活化

目的研究整合素CD11b激动剂白细胞黏附素1(LA1)对小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)中Toll样受体7(TLR7)和TLR9通路活化的影响,并探索其调控机制。方法成功诱导BMDC,用CCK-8法和异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染法筛选出对BMDC活性和凋亡都无影响的LA1浓度。LA1预处理BMDC 2 h后,用TLR7激动剂R837和TLR9激动剂CpG1826刺激BMDC,收集细胞用流式细胞术检测BMDC表面标志CD40、CD86和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)的表达;收集细胞培养上清,用ELISA检测白细胞介素6(IL-6)、IL-12p40和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;用Western blot法检测BMDC中核因子κB p65(NF-κB p65)的磷酸化水平。结果LA1浓度低于20μmol/L时对BMDC活力和凋亡无影响;LA1预处理显著抑制BMDC中R837和CpG1826诱导的CD40、CD86和MHC-Ⅱ的表达;LA1预处理显著抑制BMDC培养上清中R837和CpG1826诱导的IL-6、IL-12p40和TNF-α的含量;进一步研究发现,LA1预处理显著抑制BMDC中R837和CpG1826激活的NF-κB p65磷酸化水平。结论CD11b激动剂LA1可显著抑制BMDC中TLR7和TLR9通路的活化,且通过NF-κB p65信号通路发挥作用。

MRP8、MRP14及MRP8/14促进体外培养的小鼠骨髓来源树突状细胞的表型成熟

目的探讨髓样相关蛋白8(MRP8)、MRP14及其异二聚体MRP8/14对小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)表型成熟的影响。方法体外培养及纯化小鼠BMDC,分为对照组、1μg/m L MRP14处理组、1μg/m L MRP8处理组、1μg/m L MRP8/14处理组。采用流式细胞术检测刺激后BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达情况。结果 MRP14、MRP8及MRP8/14均能促进BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86表达,MRP14、MRP8均能促进BMDC表面共刺激分子MHCⅡ表达,且MRP14和MRP8/14促进BMDC表达CD80、CD86的能力强于MRP8。结论 MRP14、MRP8及MRP8/14通过增加BMDC表面共刺激分子的表达而促进BMDC的表型成熟,且MRP8、MRP14及MRP8/14三者促进DC表达各种共刺激分子的能力不同。

内吗啡肽-1对高糖诱导的人外周血树突状细胞成熟和TLR4表达的影响(英文)

目的:探讨内吗啡肽-1(EM-1)对高糖诱导的人外周血来源树突状细胞(PBDC)成熟表型、细胞因子分泌、T细胞增殖和TLR4表达的影响,探讨EM-1对DC免疫功能的调节机制。方法:本研究外周血样品取自18-20岁学生志愿者,将外周血单个核细胞(PBMNC)诱导成未成熟的树突状细胞(imDC)。使用高浓度葡萄糖作为刺激因素,EM-1作为干预因素,将实验分为正常葡萄糖(NG)、高糖(HG)、加入EM-1的高葡萄糖(EM)、加入EM-1和纳洛酮的高葡萄糖(Nal)共5组。应用流式细胞术检测PBDC表型变化,ELISA检测PBDC与自体淋巴细胞共培养分泌的细胞因子的变化,CFSE法检测T淋巴细胞的增殖情况,RT-PCR法检测PBDC表面TLR4的表达。结果:与HG组比较,EM组PBDC表面分子CD86、CCR7和CD36表达上调(P<0.01),而CD83的表达无统计学意义。EM组PBDC分泌的IL-12,IL-10和PBDCs刺激的T淋巴细胞增殖指数均下降。与EM组比较,Nal组CD86,CCR7,CD36表达降低(P<0.01),而CD83表达几乎没有变化(P>0.05)。Nal组T淋巴细胞增殖指数极显著升高(P<0.01)。HG组TLR4灰度比值高于NG组,EM组明显低于HG组(P<0.01)。结果表明,高葡萄糖可以促进PBDC TLR4的表达,而EM-1抑制TLR4的表达。结论:EM-1上调高糖诱导的PBDC表面分子CD86,CCR7和CD36的表达,抑制高糖诱导的P BDC成熟。分泌的炎性细胞因子IL-12和IL-10抑制来自PBDC的T淋巴细胞的增殖,而纳洛酮抑制EM-1的作用。EM-1抑制高糖诱导的PBDC表面TLR4的表达。

树突状细胞来源的小胶质细胞在Alzheimer病中的作用

Alzheimer病（AD）是以进行性认知功能下降为临床特点的中枢神经系统退行性疾病,其主要病理特征为老年斑和神经纤维原缠结。针对老年斑的主要成分β淀粉样蛋白（Aβ）的免疫治疗是近十余年来出现的一种从病因上治疗AD的新方法,

HEC-1-B细胞培养上清液对子宫内膜癌树突状细胞成熟的影响

目的探讨子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液对子宫内膜癌患者外周血单核细胞源性树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法梯度离心法分离子宫内膜癌患者外周血单核细胞,在含重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的DCs培养液中培养,使其分化为DCs。实验组将收集的子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液过滤后与DCs共同孵育48 h,对照组不给予任何干预措施。镜下观察DCs形态变化,采用流式细胞术检测DCs表型(CD1α、CD83、CD86)表达,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素10(IL-10)、IL-12含量。结果实验组细胞生长状态较好,具有典型的树枝状突起,数量不等、形态不一;实验组DCs表型CD1α、CD83、CD86分子的表达分别较对照组升高(P<0.01);实验组DCs分泌的细胞因子IL-10水平较对照组降低(P<0.01),IL-12水平较对照组升高(P<0.01)。结论子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液能够在体外诱导子宫内膜癌患者外周血单核细胞源性DCs成熟。

TLR2、IL-10 mRNA的表达及树突状细胞分布在外阴硬化性苔藓中的临床意义

目的:探讨与免疫相关的TLR2、IL-10 mRNA及树突状细胞与外阴硬化性苔藓(VLS)发生和发展的关系。方法:选取VLS石蜡标本50例(早期和进展期各25例),外阴正常皮肤15例。采用免疫组化S-P法检测CD1α在组织中的分布,RT-PCR法检测TLR2和IL-10 mRNA在组织中的表达。结果:CD1α阳性细胞在VLS进展期中明显高于正常外阴皮肤(P<0.05)。TLR2、IL-10的mRNA表达在VLS进展期中明显高于正常外阴皮肤(P<0.05);TLR2、IL-10 mRNA和CD1α表达在早期VLS中略增加,与正常外阴皮肤相比无统计学差异(P>0.05)。结论:VLS的进展期TLR2、IL-10 mRNA及树突状细胞增多,预示局部组织内免疫抑制作用增强。

中华眼镜蛇毒组分诱导人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞凋亡的研究

目的：探讨中华眼镜蛇毒组分（najanajaactravenomcomponent，NNAVC）诱导KG1a细胞凋亡及相关机制。方法：以NNAVC作用人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞，台盼蓝拒染法测定细胞毒性，流式细胞仪测细胞凋亡率，RT—PCR测细胞凋亡相关基因（Bax、Bak、Bcl-2）的表达。结果：NNAVC对KG1a细胞有显著的细胞毒性作用，能诱导KG1a细胞凋亡，促凋亡作用可能与Bcl-2表达下调和Bax表达上调有关。结论：NNAVC通过调节抗／促凋亡分子诱导KG1a细胞凋亡．提示NNAVC具有治疗复发难治性白血病的应用前景。

α黑素细胞刺激素在TREM-1介导的树突状细胞成熟中的调节作用

研究α黑素细胞刺激素(-αMSH)对髓样细胞表达的激发受体1(TREM-1)介导树突状细胞(DC)成熟的调节作用。用TREM-1激动性抗体处理单核细胞,诱导其分化成MoDC,在此过程中加入-αMSH。观察MoDC的细胞形态,以FACS进行表型测定,用混合淋巴细胞反应检测MoDC的抗原提呈功能,并观察-αMSH对MoDC表达TREM-1的影响。结果显示,-αMSH和TREM-1激动性抗体作用MoDC后,多数细胞突起少且钝,α-MSH对TREM-1激动性抗体处理的MoDC高表达MHC II、CD86及CD1a有抑制作用,并降低MoDC刺激同种异体T细胞增殖的能力。-αMSH可下调LPS诱导MoDC表达TREM-1的水平。上述结果表明,α-MSH能抑制TREM-1介导的MoDC成熟。

寻常型银屑病皮损组织中浆细胞样树突状细胞和TLR7/9通路表达的研究

目的探讨浆细胞样树突状细胞(pDC)和TLR7/9通路在寻常型银屑病发病机制中的作用。方法选取19例寻常型银屑病患者的皮损组织和皮损旁正常组织为研究材料,采用免疫组化方法检测pDC的特异性表面标志分子CD2AP、CD123和TLR7、TLR9及其信号通路中相关蛋白分子白细胞介素1受体相关激酶1(IRAK-1)、干扰素调节因子7(IRF7)的表达情况并进行对比分析。结果皮损组织中CD2AP+pDC和CD123+pDC的阳性率均明显高于皮损旁正常组织(均P<0.05),在皮损组织表皮层和真皮层均有分布,但以真皮层居多。皮损组织中TLR7、TLR9、IRAK-1、IRF7在真皮层的表达较为明显,表达阳性率均高于皮损旁正常组织(均P<0.05);TLR9、IRAK-1、IRF7在表皮层均有少量表达,表达阳性率高于皮损旁正常组织(均P<0.05),而TLR7在表皮层的表达阳性率与皮损旁正常组织相比无统计学差异(P>0.05)。结论CD2AP+pDC、CD123+pDC在寻常型银屑病皮损组织中异常分布,可能与TLR7/9通路的激活及其下游途径有关,TLR信号异常活化对寻常型银屑病的发生发展起一定作用。

ox-LDL促进树突状细胞LOX-1表达及炎症因子分泌

目的应用小鼠高脂模型及树突状细胞株研究血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)高表达树突状细胞(DC)在动脉粥样硬化中的作用。方法氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导原代培养的C57小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),采用Western blot检测BMDC LOX-1蛋白水平;采用流式细胞术检测高表达LOX-1和低表达LOX-1细胞亚群的比例;MACS磁珠分选LOX-1表达水平不同的两种细胞亚群,观察ox-LDL对两种细胞亚群的影响及释放炎症因子的影响;采用C57小鼠高脂模型,在高脂喂养的不同时间(4周、6周、8周)检测小鼠总胆固醇水平和主动脉中DC数量;用不同浓度的Dil标记的ox-LDL(Dil-ox-LDL)刺激DC2.4细胞,荧光显微镜观察各组细胞吞噬作用的差异,Western blot检测LOX-1的表达。结果 DC可分为高表达和低表达LOX-1两种细胞亚群,且ox-LDL能增加LOX-1^(high)DC的比例;分选后的阳性细胞被ox-LDL刺激后,TNF-α和IL-1βmRNA的表达明显上调(P<0.01),且阳性细胞的上升比例高于阴性细胞。在C57小鼠高脂模型中,高脂喂养组总胆固醇水平明显升高,且随着总胆固醇水平的升高,小鼠主动脉中DC增多,且LOX-1^(high)DC比例明显增加。用不同浓度的Dil-ox-LDL刺激DC2.4细胞,随着Dil-ox-LDL浓度的升高,DC2.4细胞对ox-LDL的吞噬也增加,并且ox-LDL可以诱导DC2.4细胞表面LOX-1表达,20 mg/L和40 mg/L的ox-LDL对LOX-1表达的诱导作用明显。结论 ox-LDL能够上调DC表面受体LOX-1,增加LOX-1^(high)DC比例,促进炎症因子表达。

多参数TOX免疫表型法的建立及在母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤中的应用

目的:建立多参数流式检测胸腺细胞选择相关高迁移率族蛋白(TOX)在PD-1、Tim-3和CD244耗竭性T细胞中的免疫表型法,以及其在1例罕见CD4-CD56^(+)表型的血液恶性肿瘤母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)患者中的应用分析。方法:收集1例BPDCN患者骨髓(BM)和外周血(PB),2例非肿瘤手术患者和1例健康者BM以及11例健康者(HI)PB分别作为BM和PB对照组,利用多色流式单抗CD45、CD3、CD4、CD8、CD25、FoxP3、TOX、PD-1、Tim-3、CD244及相应同型对照进行流式细胞检测。结果:流式检测结果提示,BPDCN患者BM和PB中TOX^(+)CD3^(+)、TOX^(+)CD4^(+)和TOX^(+)CD8^(+)T细胞比例均比对照组升高;BPDCN患者BM和PB中TOX^(+)PD-1^(+)CD8^(+)、TOX^(+)Tim-3^(+)CD8^(+)和TOX^(+)CD244^(+)CD8^(+)耗竭性T细胞中的分布比例也显著高于对照组。此外,在BPDCN患者BM和PB的CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg细胞中TOX^(+)细胞分布比例高于对照组;同时TOX^(+)细胞在PD-1^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg、Tim-3^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg和CD244^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg耗竭性T细胞中的分布比例也明显高于对照组。结论:成功建立多参数流式细胞术检测PD-1、Tim-3和CD244耗竭性T细胞亚群中TOX免疫表型法,TOX可能是BPDCN患者T细胞免疫调节的重要转录因子。

大鼠骨髓树突状细胞的分离培养及HMGB1/TLR4信号通路的调控作用

目的:研究HMGB1/TLR4信号通路对大鼠骨髓树突状细胞(mDCs)MyD88、NF-κBP65、细胞因子、共刺激分子表达的影响,探讨此信号通路是否对m DCs具有调控作用。方法:mDCs分离、培养、纯化、鉴定后,随机分为5组,每组各设24、48、72h3个时间点。C组:m DCs加于RPMIl640完全培养基中;H组:加入HMGB1;H-Ab组:加入HMGB1后30min再加入HMGB1特异性中和抗体;TLR4-A组:加入HMGB1后30min再加入TLR4拮抗剂;IgG组:加入HMGB1后30min再加入对照IgG抗体。检测各组各时间点m DCsMy D88、NF-κBP65蛋白和基因、共刺激分子(CD80、CD86)的表达及上清液中细胞因子(IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α)的浓度变化。结果:24h、48h、72h各组HMGB1刺激后MyD88、NF-κBP65蛋白和基因、细胞因子、共刺激分子表达明显升高,使用HMGB1特异性中和抗体、TLR4拮抗剂后明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:HMGB1通过m DCs的受体TLR4影响下游MyD88、NF-κBP65蛋白和基因的表达,并刺激细胞因子的分泌,同时促进共刺激分子CD80、CD86的表达,对mDCs起一定的调控作用。

马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及TNF-α分泌的影响

目的研究马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及促炎因子TNF-α分泌的影响。方法马尔尼菲青霉酵母相菌液与小鼠腹腔巨噬细胞共培养24h,采用流式细胞技术检测巨噬细胞TLR-2、TLR-4及Dectin-1的平均荧光强度;共聚焦显微镜观察荧光染色的受体;ELISA法测定培养液上清中TNF-α的浓度;Real time PCR检测不同时间段TNF-α的mRNA表达。结果马尔尼菲青霉可使巨噬细胞TLR-2、TLR-4、Dectin-1的平均荧光强度均增高,并激活巨噬细胞产生TNF-α。结论马尔尼菲青霉上调了巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达,巨噬细胞的激活与TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达上调相关。

Fonsecaea monophora对巨噬细胞TLR2、TLR4、Dectin-1和TNF-α表达的影响

目的探讨F.monophora对巨噬细胞模式识别受体TLR2、TLR4及Dectin-1的表达及介导炎症因子TNF-α分泌的影响。方法 F.monophora分生孢子突变株(色素株,CBS122845)及白化突变株(CBS125149)菌液分别与小鼠巨噬细胞(RAW264.7)共培养,RAW264.7巨噬细胞作为阴性对照。采用Real Time PCR检测各组TLR2、TLR4、Dectin-1和下游信号分子MyD88、NF-κB mRNA的表达情况,流式细胞术检测TLR2、TLR4、Dectin-1蛋白的表达水平,ELISA法检测培养上清中TNF-α因子的分泌情况。结果与对照组比较,CBS122845和CBS125149组中巨噬细胞TLR2、TLR4、Dectin-1和MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达量均升高;与CBS125149比较,CBS122845组中TLR2的mRNA和蛋白的表达量无明显变化,而TLR4、Dectin-1和MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白的表达量升高更明显;与对照组比较,CBS122845组培养上清TNF-α因子的分泌量明显减低,CBS125149组TNF-α因子的分泌量明显升高。结论 TLR2、TLR4、Dectin-1这三个模式识别受体可能共同参与巨噬细胞对F.monophora的识别过程,并可激活下游信号分子MyD88和NF-κB;且CBS122845可以通过抑制TNF-α分泌来抑制炎症反应,维持菌体在巨噬细胞中的长期生存和繁殖。

内吗啡肽在小鼠树突状细胞的诱导表达

目的研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在小鼠树突状细胞的表达。方法从7～8周龄的C57BL/6J小鼠骨髓提取骨髓前体细胞培养,经CD11c(树突状细胞的特异性标记)免疫磁珠分选,获得纯化的树突状细胞。流式细胞仪分析表明,CD11c阳性细胞纯度达95%以上。免疫荧光染色研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在树突状细胞的表达;酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA)的方法,检测培养树突状细胞上清液中的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2的含量。结果免疫荧光染色表明,活化的树突状细胞内可分泌内吗啡肽-1和内吗啡肽-2;酶免疫测定检测结果表明,不同的Toll样受体(toll like receptor,TLR)配体活化树突状细胞促使分泌不同浓度的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2。结论活化的树突状细胞可诱导内吗啡肽的表达。