京尼平对脂多糖诱导的KGN细胞株炎性反应的影响研究

目的研究不同质量浓度京尼平对脂多糖诱导的人卵巢颗粒细胞系(KGN细胞株)炎性反应的影响。方法2018年9月,用脂多糖诱导KGN细胞株炎性反应,24h后分别加入不同质量浓度(0、0.05、0.10、0.20、0.30mmol/L)京尼平,设置空白对照组(添加相应剂量溶剂二甲基亚砜的DMEM/F12培养基)、脂多糖组和脂多糖+0.05、0.10、0.20、0.30mmol/L京尼平组。采用CCK-8法检测KGN细胞株的活性;采用酶联免疫吸附试验检测各组上清液中雌激素水平,以及白细胞介素-4(IL-4)、IL-5、IL-1β、IL-6的表达;蛋白质印迹法检测各组17α羟化酶(CYP17A1)、芳香化酶(CYP19A1)、线粒体解偶联蛋白2(UCP2)、核因子κB(NF-κB)蛋白表达。结果与空白对照组比较,高质量浓度(≥0.10mmol/L)京尼平对KGN细胞株生长具有明显抑制作用,差异均有统计学意义(P<0.05);低质量浓度(≤0.05mmol/L)京尼平对KGN细胞株生长无明显影响,与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。脂多糖诱导的KGN细胞株IL-4、IL-5、IL-1β、IL-6表达,以及UCP2、NF-κB蛋白表达均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);脂多糖诱导的KGN细胞株用高质量浓度京尼平干预后IL-4、IL-5、IL-1β、IL-6表达,以及NF-κB蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);UCP2、CYP17A1、CYP19A1蛋白表达变化均不明显,差异均无统计学意义(P>0.05);各组雌激素水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论脂多糖能诱导KGN细胞株发生明显的炎性反应,京尼平对炎性反应具有明显的抑制作用,并伴随NF-κB蛋白表达的下降而更明显。而京尼平在炎性状态下可能不影响雌激素的分泌。

脱氢表雄酮能促进体外人卵巢颗粒细胞——KGN细胞的凋亡

目的观察脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对体外人卵巢细胞——KGN细胞株凋亡的影响。方法用不同剂量的DHEA(0.01 mmol/L、0.1 mmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L)处理体外培养的KGN细胞,以不加DHEA为阴性对照组,然后分别用CCK-8法和流式细胞术检测KGN细胞的活性和凋亡情况;并通过实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测雄激素受体(androgen receptor,AR)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)和BCL-2相关X蛋白(BCL-2 associated X protein,BAX)基因m RNA的表达水平;通过蛋白免疫印迹(Western blotting)检测AR、BCL-2、BAX、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)及磷酸化ERK(P-ERK)的表达水平。结果与阴性对照组相比,经DHEA处理的KGN细胞的活力显著下降(P=0.000),而且随着DHEA剂量的增加,KGN细胞的凋亡率也随之提高,其中10 mmol/L DHEA干预组的凋亡率与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P=0.019);用不同浓度DHEA处理KGN细胞后,细胞中BCL-2蛋白的表达水平随着DHEA浓度的增加逐渐降低,其中10 mmol/L DHEA干预组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P=0.007);与阴性对照组相比,0.1 mmol/L和10 mmol/L DHEA干预组细胞中BCL-2 m RNA的表达水平也显著降低(P=0.007,P=0.012);而细胞中AR和BAX的表达水平无显著变化(P>0.05);此外,虽然DHEA干预组KGN细胞中ERK蛋白的表达水平与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),但P-ERK蛋白的表达水平随着DHEA浓度的增加逐渐降低,其中10 mmol/L DHEA干预组细胞中P-ERK蛋白的表达水平显著降低(P=0.005)。结论 DHEA能抑制KGN细胞的生长而促进其凋亡,并伴随着细胞中BCL-2蛋白和P-ERK蛋白表达水平的下降。