未知基因KH与公共生物信息资源的比较与分析

目的 快速分析K5 62细胞中未知基因KH的结构与功能。方法 以mRNA差异显示技术筛选的K5 62细胞在 0 2mg/ml苦参碱诱导前、后 3小时的差异基因为研究对象 ,采用基因片段的碱基序列与Internet网上多种公共生物信息数据库进行比较 ,分析未知基因KH的结构与功能。结果 对其中的 4个片段进行序列分析和同源性比较 ,有 3个基因片段与已知蛋白或蛋白酶的碱基序列完全或高度同源 ;有 1个基因片段除与 16号染色体高度同源外 ,与其它数据库均无显著同源性 ,暂命名KH基因。结论 KH基因可能是苦参碱作用K5 62细胞后表达量发生改变的候选新基因。

未知基因KH开放阅读框架真核表达载体的构建及其对K562细胞增殖的影响

目的 :构建未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingframe,ORF)的真核表达体系 ,初步探讨未知基因KH的功能。方法 :采用DNA重组技术将KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)亚克隆于表达载体 pCl-neoMammalianExpres sionVector,重组为pCI-neo -KH -ORF真核表达体系 ,脂质体转染K5 6 2细胞 ,RT -PCR检测目的基因KH的表达。采用体外培养技术 ,通过 pCI -neo -KH -ORF质粒转染K5 6 2细胞前后的生长曲线和乳酸脱氢酶活性测定观察KH -ORF对K5 6 2细胞增殖速度的影响。结果 :KH -ORF在K5 6 2细胞中获得表达 ,对细胞增殖速度有明显影响。结论 :KH -ORF表达产物可能是一个与K5 6 2细胞增殖有关的功能蛋白质 。

K562细胞未知基因KH的开放阅读框架在大肠杆菌中的表达

目的 :构建K5 6 2细胞未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingflame ,ORF)的原核表达体系。 方法 :采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)的表达载体pCI-neo-KH -ORF ,热休克法转化大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS ,IPTG诱导后 ,SDS -PAGE鉴定目的蛋白的表达。结果 :经IPTG诱导 0 .5h后KH -ORF在BL2 1(DE3)plysS中获得表达 ,表达产物以包涵体形式存在 ,分子产量约 2 4kD。结论 :成功构建了KH -ORF的原核表达体系 ,为进一步研究其功能奠定了基础。