过表达人tRNA甲基转移酶9样蛋白KIAA1456抑制HO8910PM细胞增殖

目的研究人tRNA甲基转移酶9样蛋白KIAA1456的高表达对HO8910PM细胞增殖及细胞周期的影响。方法利用PCR扩增KIAA1456编码区片段,克隆插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-puromycin中,构建Ubi-KIAA1456-EGFP-puromycin(LV-KIAA1456)慢病毒表达载体;将慢病毒表达载体包装生成慢病毒颗粒并感染HO8910PM细胞,72 h后观察绿色荧光蛋白(GFP)在HO8910PM卵巢癌细胞中的表达分布情况;反转录PCR检测HO8910PM细胞中KIAA1456 mRNA水平,Western blot法检测HO8910PM细胞KIAA1456蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期。结果成功构建重组慢病毒表达载体LV-KIAA1456,慢病毒颗粒感染HO8910PM细胞后,细胞中KIAA1456的mRNA和蛋白均高表达。过表达KIAA1456的HO8910 PM细胞增殖能力明显抑制、G1期细胞明显增加。结论过表达KIAA1456显著抑制HO8910 PM卵巢癌细胞增殖,细胞周期阻滞于G1期。

筛选KIAA1456抑制卵巢癌细胞增殖的靶向lncRNAs

目的筛选KIAA1456抑制卵巢癌细胞增殖的靶向lncRNAs。方法细胞免疫荧光检测KIAA1456在卵巢癌细胞HO8910PM中的表达。用基因芯片技术检测过表达KIAA1456后的卵巢癌细胞HO8910PM,与对照HO8910PM卵巢癌细胞之间差异lncRNA基因表达谱,筛选出有明显差异的lncRNAs,并验证。构建KIAA1456-RNAi慢病毒载体,干扰卵巢癌细胞HO8910/PM中KIAA1456的表达,RT-q PCR和Western blot检测KIAA1456干扰效率。用RT-q PCR再次检测KIAA1456沉默后相关lncRNAs的表达变化。结果KIAA1456主要表达于HO8910PM细胞的细胞核。过表达KIAA1456后,表达相差1.2倍以上的lncRNA有654条,表现最显著的有下调的SSX8,上调的SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488,PCR验证结果与芯片趋势一致。KIAA1456-RNAi慢病毒载体成功干扰了卵巢癌细胞HO8910PM中KIAA1456的表达,KIAA1456下调后,SSX8上调,SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488下调。结论 KIAA1456可通过调节SSX8,SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488等相关lncRNAs的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖,为提高卵巢癌的诊断和治疗提供了一个新的靶点。

KIAA1456靶向调控Runx1抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭

目的 探讨KIAA1456靶向调控Runx1对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。方法 采用免疫组织化学法检测91例肺癌及癌旁组织中KIAA1456表达情况,分析KIAA1456与肺癌患者临床病理特征的相关性,并进行Kaplan-Meier生存分析。用Lipofectamine法将miR-NC KIAA1456 RNAi和pCDNA3.0-HA-KIAA1456质粒转染A549细胞,MTT法和Transwell法检测细胞增殖和侵袭能力,Western blotting法检测细胞KIAA1456、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达。结果 KIAA1456在肺癌组织中的高表达率明显低于癌旁组织(P<0.05);KIAA1456在不同淋巴结转移、TNM分期分层间表达有差异(P<0.05)。KIAA1456高表达肺癌患者5年总生存率高于KIAA1456低表达者(P<0.05)。与阴性对照组比较,KIAA1456 RNAi组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达均增加,KIAA1456表达降低;KIAA1456质粒组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1和MMP-9表达均降低,KIAA1456和Runx1表达增加(P<0.05)。结论 KIAA1456可作为肺癌的抑癌基因,通过靶向调控Runx1表达,抑制A549细胞增殖和侵袭。

KIAA1456抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长

目的:探讨KIAA1456对人卵巢癌细胞株HO-8910PM裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:将15只裸鼠随机分成3组:空白组(PM组),阴性对照组[PM(NC)组],实验组[PM(KIAA1456)组]。利用人卵巢癌细胞株HO8910PM及本课题组前期通过慢病毒介导建立的阴性对照组细胞株HO8910PM(NC)和过表达KIAA1456的细胞株HO8910PM(KIAA1456)分别在空白组、阴性对照组、实验组建立裸鼠皮下移植瘤,待成瘤成功后,分别用PBS缓冲液和携带针对随机无关序列(NC)的慢病毒液Lentivirus-NC(作为阴性对照,LV-NC),携带KIAA1456病毒液Lentivirus-KIAA1456(LV-KIAA1456)每隔4 d进行一次瘤内定点注射治疗至28 d处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;采用实时荧光定量PCR和Western blot检测移植瘤组织中KIAA1456的表达情况;免疫组化检测移植瘤中ki-67和PCNA的表达情况。结果:HO8910PM(KIAA1456)移植瘤组KIAA1456表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P=0.000);28 d后处死裸鼠,HO8910PM(KIAA1456)组皮下移植瘤的体积明显小于阴性对照组和空白对照组(P=0.000),抑瘤效果明显;移植瘤组织中KIAA1456的表达上调,ki-67和PCNA表达明显下调。HO8910PM(KIAA1456)组移植瘤组织中ki-67和PCNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(P=0.000)。结论:过表达KIAA1456基因对人上皮性卵巢癌细胞HO8910PM裸鼠皮下成瘤的生长具有抑制作用,有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。

KIAA1456靶向调控Notch通路抑制非小细胞肺癌

[目的]探讨KIAA1456通过靶向Notch调控对非小细胞肺癌生长、侵袭的影响。[方法]设置H1299细胞组、KIAA1456 mimics组、KIAA1456 inhibitor组,各组细胞培养48 h;培养结束后,CCK-8测量细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,Transwell实验测定细胞侵袭水平,RT-PCR法及蛋白印迹法测定细胞KIAA1456、Notch1 mRNA与蛋白水平。[结果]KIAA1456 mimics组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数低于H1299细胞组,KIAA1456 inhibitor组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数高于H1299细胞组、KIAA1456 mimics组。KIAA1456 mimics组凋亡率、KIAA1456 mRNA和蛋白高于H1299细胞组(P<0.05),KIAA1456 inhibitor组凋亡率、KIAA1456 mRNA和蛋白低于H1299细胞组、KIAA1456 mimics组(P<0.05)。KIAA1456 mimics组高于H1299细胞组(P<0.05),KIAA1456 mimics组Notch1 mRNA和蛋白低于H1299细胞组(P<0.05),KIAA1456 inhibitor组Notch1 mRNA和蛋白高于H1299细胞组、KIAA1456 mimics组(P<0.05)。[结论]KIAA1456能抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖侵袭,促进其凋亡;其机制可能与KIAA1456抑制Notch通路的激活有关。

KIAA1456基因过表达对骨肉瘤细胞增殖的影响

目的探讨人tRNA甲基转移酶9样蛋白(h TRM9L)KIAA1456基因过表达对骨肉瘤细胞株增殖的影响及其分子作用机制。方法实验分为三组:空白对照组(Ctrl组),骨肉瘤MG63和U2OS细胞不作任何处理;阴性对照组(Scrambled组),骨肉瘤MG63和U2OS细胞转染空载质粒;实验处理组(KIAA1456组),将p T3-myr-KIAA1456过表达质粒转染至骨肉瘤MG63和U2OS细胞。利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot检测骨肉瘤细胞中KIAA1456 mRNA和蛋白表达水平,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)细胞增殖实验检测KIAA1456过表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,流式细胞术分析骨肉瘤细胞周期的变化,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白细胞质及细胞核β链蛋白(Cytoplasmicβ-catenin、Nucleusβ-catenin)、细胞周期蛋白-1(Cyclin D1)及C-myc的蛋白表达水平。结果与Ctrl组和Scrambled组比较,(1)KIAA1456组骨肉瘤MG63和U2OS细胞中KIAA1456 mRNA和蛋白表达水平增高(P均<0.01);(2)CCK-8法检测KIAA1456组在24、48、72、96 h OD值均降低(P<0.01);(3)Ed U细胞增殖实验显示,KIAA1456组细胞增殖率降低(P<0.01);(4)流式细胞术显示,在MG63细胞和U2OS细胞中,KIAA1456组G0/G1期细胞数量比例增多,而S期和G2/M期细胞数量减少(P<0.05,P<0.01);(5)Western blot结果显示,KIAA1456组Wnt/β-catenin信号通路中相关蛋白Nucleusβ-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达降低,Cytoplasmicβ-catenin蛋白表达增高(P<0.01)。结论KIAA1456过表达可显著抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖并且使骨肉瘤细胞周期阻滞在G0/G1期,其作用机制可能与抑制β-catenin核转位以及下调Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因Cyclin D1、C-myc的表达相关。