KIR2DS2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA(short hairin RNA,shRNA)的RNAi慢病毒载体。方法:针对已经筛选确定的KIR2DS2基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Hpa I和Xho I酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shKIR2DS2慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-shKIR2DS2及Packaging system质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR和测序证实,成功构建KIR2DS2shRNA的慢病毒载体LV-shKIR2DS2。293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml。结论:成功构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA的RNAi慢病毒载体。