二陈汤对高脂饮食小鼠糖脂代谢和生殖激素分泌的调节作用研究:基于Kisspeptin/GPR54通路

目的:基于Kisspeptin/GPR54(吻素/吻素受体)通路研究二陈汤对高脂饮食小鼠生殖激素分泌的影响。方法:将30只C57BL/6J雌性小鼠随机分为正常组、模型组、二陈汤组,每组10只。模型组、二陈汤组小鼠给予高脂饲料喂养12周,第9周开始二陈汤组给予二陈汤灌胃,正常组和模型组小鼠予生理盐水灌胃,干预4周。记录小鼠基础数据,行葡萄糖耐量实验,检测血脂四项;实施HE染色观察卵巢形态,应用ELISA检测小鼠促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)和雌二醇(E2)的水平;应用q-PCR与Western Blot检测小鼠下丘脑瘦素(Leptin)、Kisspeptin、GPR54、促性腺激素释放激素(GnRH)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量和腹围有较大幅度增长(P<0.05,P<0.01),血糖血脂水平升高(P<0.05,P<0.01),卵巢颗粒细胞排列松散,脂滴空泡明显增多,血清T、FSH和LH水平升高(P<0.05,P<0.01),下丘脑组织Leptin、Kisspeptin、GnRH的mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,二陈汤组小鼠的体质量、腹围下降(P<0.05,P<0.01),血糖血脂水平下降(P<0.05,P<0.01),卵巢形态有所恢复,血清T、LH水平下降(P<0.05,P<0.01),下丘脑组织Leptin、Kisspeptin的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Kisspeptin的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:二陈汤可能通过Kisspeptin/GPR54通路改善高脂饮食小鼠的血糖血脂水平,调节生殖激素分泌水平,改善小鼠卵巢组织解剖学与形态学特征。

KiSS-1/GPR54系统在不同发情周期母羊下丘脑中的表达规律

【目的】研究发情周期各阶段KiSS-1/GPR54系统在母羊下丘脑中的表达规律。【方法】将12只雌性小尾寒羊随机分为4组,每组3只,分别于发情前期、发情期、发情后期和间情期,颈动脉放血致死后采集其下丘脑,采用实时荧光定量PCR技术研究母羊发情周期不同阶段下丘脑中KiSS-1和GPR54基因的表达规律。【结果】母羊发情周期各阶段下丘脑上均有KiSS-1和GPR54基因表达;发情期母羊下丘脑KiSS-1基因的表达量极显著高于发情后期、间情期和发情前期(P<0.01),而发情后期、间情期和发情前期之间差异不显著;发情周期的不同阶段,GPR54基因在母羊下丘脑中的表达量无显著差异(P>0.05)。【结论】发情期母羊下丘脑KiSS-1基因的表达量极显著高于发情周期其他阶段(P<0.01),GPR54基因在母羊发情周期各阶段的表达量无显著差异。

能量平衡与哺乳动物生殖:瘦素和KiSS-1/GPR54系统的最新研究进展

本文结合有关瘦素和KiSS-1/GPR54系统的发现,综述了能量平衡与哺乳动物生殖之间作用机制的最新研究进展,并对该领域今后的研究趋势和方向进行了分析。

日粮低营养对母羊下丘脑KiSS-1/GPR54系统表达及相关激素分泌的影响

本研究通过分析日粮低营养对母羊下丘脑KiSS-1/GPR54系统表达及相关激素分泌的影响,明确KiSS-1/GPR54系统在日粮营养调控母羊初情期启动中的作用。选择12只体重为16kg左右的3月龄雌性小尾寒羊,随机分为2组(n=6),分别给予标准营养和低营养(对照组采食量的60%),饲喂30d后,采集下丘脑和血液,利用实时荧光定量PCR、免疫组化、ELISA和放免技术测定下丘脑KiSS-1/GPR54系统表达量及LH、胰岛素和Leptin浓度。结果表明,日粮低营养可显著降低母羊下丘脑弓状核KiSS-1基因和蛋白的表达量(P<0.01),但对GPR54基因表达量并无影响(P>0.05);日粮低营养可显著降低母羊血清中LH和胰岛素(P<0.05)浓度,极显著降低Leptin浓度(P<0.01)。结果提示,下丘脑KiSS-1/GPR54系统可通过降低KiSS-1表达来参与日粮低营养对初情期启动的调控。

KISS-1/GPR54基因及其在生殖中的作用

KISS-1及其受体GPR54基因对青春期的正常启动具有重要作用。青春期开始前后,动物下丘脑中KISS-1和GPR54 mRNA水平很高,Kisspeptins(KISS-1基因产物)通过激活GPR54增加促性腺激素的释放,KISS-1基因的表达受性腺类固醇激素的调控。GPR54基因突变可以导致人和鼠的特发性促性腺激素分泌不足性腺机能减退症和促性腺激素依赖性性早熟。文章还介绍了KISS-1、GPR54基因的结构、表达、多态性以及和其它生殖调控因子之间的相互关系。

Kisspeptin/GPR54系统功能研究进展

Kisspeptins(Kp)是由KiSS-1基因编码的肽类物质,包括Kp-54、Kp-14、Kp-13和Kp-10,受体为GPR54。Kp在肿瘤调控、生殖调控、内分泌调节等方面具有重要作用,是当前神经内分泌学及神经肽类物质研究热点之一。本文主要对Kp/GPR54系统生理功能研究的最新进展进行综述,并对其在动物生产中的应用前景进行了分析。

Kiss-1/GPR54系统在不同发育阶段五指山猪下丘脑中的表达

采用荧光定量技术研究Kiss-1mRNA和GPR54mRNA在30、60、90(初情期)和120日龄五指山母猪下丘脑表达情况,并检测血清中FSH、LH、E2、P4浓度变化。结果表明:初情期前,Kiss-1mRNA表达量随着五指山猪年龄的增长逐渐升高,到初情期(90日龄)时表达量达到最高(P<0.05),120日龄(初情期后)时表达量逐渐降低(P<0.05)。GPR54mRNA表达不受影响。血清FSH、LH、E2、P4浓度变化的趋势大体一致,初情期前各激素水平逐渐升高,但差异不显著(P>0.05);至初情期(90日龄)时显著升高,且达到一个峰值;血清FSH、LH和E2浓度在90日龄和120日龄时差异不显著(P>0.05),P4浓度在90日龄时显著高于120日龄(P<0.05)。结果显示:Kiss-1基因是五指山猪初情期启动的关键因子。

达氏鲟gpr54基因的克隆及Kisspeptin注射对其表达的影响

G蛋白偶联受体54(GPR54,G protein-coupled receptor 54)是kisspeptin(Kiss)的受体蛋白。Kisspeptin/GPR54系统通过调节促性腺激素释放激素(Gn RH)的活性来参与鱼类生殖调控。为了研究Kisspeptin/GPR54系统对达氏鲟(Acipenser dabryanus)Gn RH的调控功能,克隆得到达氏鲟2个gpr54基因的全长c DNA序列,命名为dsgpr54-1及dsgpr54-2,分别编码379和368个氨基酸。氨基酸序列比对及进化树分析表明,达氏鲟Gpr54与四足动物Gpr54序列一致性较高,亲缘关系较近。荧光定量PCR研究发现,dsgpr54-1的转录本在精巢、卵巢、下丘脑、垂体、中脑及端脑等组织中均有表达,且在下丘脑中转录水平最高;而dsgpr54-2仅在脑组织中转录,且在垂体、中脑及下丘脑中表达丰度均较高。为了研究Gpr54是否可以与其配体Kisspeptin结合调控下丘脑中gnrh基因的表达,分别合成了达氏鲟Kiss-1和Kiss-2的核心十肽(10 nmol/L、1000 nmol/L),腹腔注射到9月龄达氏鲟。结果表明,不同浓度Kiss-1、Kiss-2注射均引起gpr54基因表达量升高,并且10 nmol/L Kiss-2注射能够显著促进dsgpr54-2的表达(P<0.05)。另外,不同浓度Kiss-1注射均造成了gnrh转录水平的下降;而10 nmol/L Kiss-2注射使得gnrh1表达量上升,而gnrh2的表达量下降,1000 nmol/L Kiss-2注射则引起gnrh1表达量的下降,gnrh2的表达量没有显著变化。上述研究结果表明,达氏鲟gpr54基因均能与其配体kiss-1、kiss-2相结合,但表现出一定的受体-配体选择性差异。Kiss-1、Kiss-2通过激活Gpr54的活性,调控下丘脑中gnrh基因的表达,且其调控功能存在差异。

Kisspeptin-GPR54-GnRH神经元轴在雌性大鼠中枢性性早熟中的作用

目的探讨Kisspeptin-GPR54-GnRH神经元轴在雌性大鼠中枢性性早熟(CPP)中的作用。方法选择雌性SD大鼠50只,随机分为对照1组(正常青春前期)、对照2组(正常青春早期)、对照3组(正常青春中期)、实验1组(性早熟青春早期)、实验2组(性早熟青春中期)各10只。实验组皮下注射N-甲基-DL-天冬氨酸(NMA)建立CPP模型。观察各组阴道开放时间及性周期,测量其子宫指数、卵巢指数、卵巢黄体出现个数、子宫壁厚度和血清黄体生成素;用Real-Time RT-PCR法检测下丘脑中的KISS-1 mRNA、GPR54 mRNA、促性腺激素释放激素(Gn-RH)mRNA表达;在电镜下观察各组下丘脑内分泌神经元的超微结构。结果实验组性发育起始时间早于对照组,实验组各检查指标明显高于对照1组(P均<0.05),实验1组与对照2组、实验2组与对照3组比较均无统计学差异。随着青春期发育,实验组和对照组大鼠下丘脑中KISS-1 mRNA、GPR54 mRNA、GnRH mRNA表达均逐渐升高,下丘脑内分泌神经元代谢逐渐活跃,分泌旺盛。结论应用NMA可建立理想的雌性大鼠CPP模型,随着大鼠青春期发育,其下丘脑中的KISS-1 mRNA、GPR54 mRNA、GnRH mRNA表达逐渐升高;提示Kisspeptin-GPR54-Gn-RH神经元轴在CPP的发生、发展中起重要作用。

KISS-1 mRNA和GPR54 mRNA在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因(KISS-1)和G蛋白偶联受体54(GPR54)mRNA在子宫内膜异位症(EMT)中的表达及意义。方法利用实时定量逆转录PCR方法检测EMT患者的异位/在位内膜组织及正常子宫内膜组织中KISS-1及GPR54 mRNA的表达情况。结果 KISS-1 mRNA在EMT患者异位及在位内膜中的表达水平均明显低于正常子宫内膜(P<0.01),GPR54 mRNA在EMT患者异位内膜中的表达水平略高于EMT患者在位内膜及正常子宫内膜,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 KISS-1下调在EMT的发生中起重要作用。

Kisspeptin/GPR54信号通路促使性早熟形成的作用观察

目的:以达那唑诱导的雌性性早熟模型大鼠为研究对象,探讨下丘脑kisspeptin/GPR54信号通路在性早熟发病机制中的作用。方法:3日龄SD雌性大鼠,随机分为正常组、对照组和模型组。于大鼠5日龄时,模型组皮下注射溶有达那唑的乙醇与乙二醇的混合液进行造模,分别于大鼠15、25、30、35和40日龄时处死,留取标本。观察性器官发育情况;采用ELISA法检测外周血中E2、FSH和LH水平;采用real-time PCR法检测下丘脑Kiss-1、GPR54和GnRH的mRNA表达;应用免疫荧光法观察下丘脑kisspeptin的表达情况。结果:模型大鼠青春期启动和性成熟时间较正常组和对照组显著提前(P<0.05);在25和30日龄时,模型大鼠外周血清性激素水平和子宫系数均显著高于正常组和对照组(P<0.05);在25和30日龄时,模型大鼠卵巢形态学发育也明显早于正常组;在25日龄时,模型组大鼠下丘脑Kiss-1和GnRH的mRNA及下丘脑弓状核kisspeptin表达显著高于正常组和对照组(P<0.05);在30日龄时,模型组大鼠下丘脑弓状核kisspeptin表达低于正常组和对照组(P<0.05);在35日龄时,模型组大鼠Kiss-1和GnRH的mRNA表达较正常组和对照组降低(P<0.05);在所观察日龄内,各组大鼠GPR54mRNA的表达均无显著差异。结论:性早熟模型大鼠在青春期启动时下丘脑Kiss-1 mRNA和kisspeptin的表达显著上调,提示kisspeptin可能是性早熟形成的启动因子,kisspeptin/GPR54信号通路在性早熟的发病中可能起着重要作用。

子宫内膜癌中KiSS-1及GPR54mRNA的表达及意义(英文)

目的检测KISS-1及GPR54mRNA在子宫内膜癌组织中的表达,探讨其在子宫内膜癌浸润及转移中的作用。方法采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测32例子宫内膜癌,10例子宫内膜上皮内瘤样病变(EIN)及12例正常子宫内膜组织中KiSS-1及GPR54mRNA的表达情况和其与各种临床参数的关系。结果KiSS-1mRNA在子宫内膜癌组中的表达率(37.5%)明显低于EIN组(80.0%)及正常内膜组(83.3%),并且其在子宫内膜癌组中的表达率与临床分期、肌层浸润深度及淋巴结转移密切相关,P均<0.05。GPR54mRNA在子宫内膜癌组的表达率(78.1%)高于EIN组(70.0%)和正常内膜组(66.7%),但无明显差异(均P>0.05)。GPR54mRNA在子宫内膜癌组中的表达与临床分期、组织分级、肌层浸润深度及淋巴结转移情况均无相关性(均P>0.05)。结论KiSS-1与其受体GPR54结合在抑制子宫内膜癌的浸润和转移过程中可能起着重要的作用。

Kisspeptins/GPR54系统及其在动物性发育中的作用

促性腺释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)脉冲式释放的激活是动物性发育的关键。研究结果发现,kisspeptins/GPR54系统对GnRH脉冲式释放的激活起到了重要作用,是性发育启动的调节器。在kisspeptins/GPR54胞内信号通路方面的研究也已经证实,kisspeptins能通过GPR54受体激活多种信号,以发挥其它功能。另外,光周期、机体能量储备等也是影响动物性发育的重要因素。

复方地黄合剂对青春期大鼠下丘脑KiSS-1与GPR54及Ghrelin mRNA表达的影响

目的探讨中药复方地黄合剂对青春期大鼠性发育的调节作用及可能的作用机制。方法将16只SPF级4周龄SD雌性大鼠随机分为两组,正常组予0.9%NaCl溶液灌胃,中药组予复方地黄合剂灌胃。每天观察大鼠阴道口开放(VO)时间;干预2周后计算子宫、卵巢指数;Real-time荧光定量PCR法检测下丘脑组织KiSS-1及其GPR54和GhrelinmRNA的表达;ELISA法检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、Ghrelin以及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达浓度。结果中药组VO时间平均推迟约7d,子宫、卵巢指数较正常组均明显降低(P<0.01);中药组血清LH、Ghrelin均显著降低(P<0.01),而对FSH、IGF-1无明显影响(P>0.05);中药组KiSS-1、GPR54mRNA表达量分别降低至正常组的0.22和0.17倍,差异有显著性(P<0.01),而GhrelinmRNA变化不明显(P>0.05)。结论复方地黄合剂对青春期大鼠性发育有明显的调节作用,其作用机制可能与抑制KiSS-1、GPR54基因表达,从而影响外周FSH、LH等激素水平有关。

Kisspeptin/GPR54信号通路对下丘脑-脑垂体-性腺轴的调节机制

作为耦联体的kisspeptin/GPR54在动物体的下丘脑具有较高表达,kiss I mRNA的表达不仅受光照周期的影响,而且受雌激素的调节,然而雌激素对下丘脑Arc和AVPV区域kisspeptin神经细胞的调节却截然相反。kisspeptin/GPR54通过G蛋白耦联机制激活GnRH细胞的脉冲分泌,从而对下丘脑-脑垂体-性腺轴进行调节。

Kisspeptin/GPR54系统在生殖启动中的作用

青春期的启动始于下丘脑脉冲性GnRH分泌的提高。Kisspeptin/GPR54系统是新发现的能够调节下丘脑GnRH释放的重要信号通路,此系统的发现敲开了生殖启动机理研究的新大门。本文就Kisspeptin/GPR54系统的发现、生物学特性与对生殖启动的调节作用等方面作一综述。

新的生殖激素调控系统——KiSS-1/GPR54

KiSS-1/GPR54在中枢神经系统和生殖器官广泛表达,与生殖功能密切相关。kisspeptin激活促性腺激素释放激素神经元,有力地促进促性腺激素释放激素的释放。GPR54基因突变导致原发性低促性腺激素型性腺功能低减,给予外源促性腺激素释放激素恢复性腺功能。小剂量kisspeptin注射可以引起大鼠黄体生成激素剧烈升高。KiSS-1/GPR54在脑内介导类固醇激素对促性腺激素释放激素释放的调控作用。

初情期母牦牛下丘脑kiss-1/GPR54系统基因克隆

应用聚合酶链反应和基因克隆技术,对10头初情期母牦牛下丘脑kiss-1/GPR54系统基因进行扩增和基因克隆。结果表明,kiss-1基因拼接后序列全长为291bp,其中CDS序列长为282bp,序列中碱基组分为腺嘌呤20.62%,鸟嘌呤27.14%,胸腺嘧啶23.37%,胞嘧啶28.87%。共编码95个氨基酸,其中丙氨酸占总氨基酸残基的11.58%,亮氨酸占10.52%,丝氨酸、甘氨酸、脯氨酸各占9.47%。GPR54基因拼接后序列全长为202bp,其中CDS序列长为196bp,序列中碱基组分为腺嘌呤16.34%,鸟嘌呤30.69%,胸腺嘧啶17.82%,胞嘧啶35.15%。GPR54基因共编码66个氨基酸,其中脯氨酸占总氨基酸残基的13.63%,甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸各占10.60%,半胱氨酸占9.09%。