KK-A^y/Ta小鼠的相关生物学特性测定

【摘要】目的对KK-A^y／Ta小鼠进行生物学特性研究。方法随机选取实验鼠配对繁殖，统计繁殖性状数据，并对其生长曲线、空腹血糖、随机血糖以及糖耐量进行测试。结果KK—A^y／Ta小鼠从3周龄开始体重迅速增加，显示中度肥胖和糖尿病症兆，随着年龄增大其血糖值逐步上升呈现中度高血糖趋势。结论KK-A^y／Ta小鼠是一种中度高血糖、高度胰岛素抵抗，胰岛功能不足且伴随肥胖的适用于Ⅱ型糖尿病研究的动物模型。

Ⅱ型糖尿病KK-A^y/Ta小鼠部分生物学特性分析

以C57BL/6JSlac小鼠为正常对照组,对自发性Ⅱ型糖尿病动物模型KK-Ay/Ta小鼠的体生长曲线、糖代谢曲线、血清胰岛素、主要脏器重量、脏器系数等部分生物学特性数据进行测试和分析,并对其肾脏、肝脏和胰腺等组织形态学变化进行探讨。结果显示:①KK-Ay/Ta小鼠体重、血糖和血清胰岛素水平比对照组高(P<0.01);②雄性KK-Ay/Ta小鼠与对照组间心脏、胰腺差异显著(P<0.05),肝脏、脾脏、肾脏及雄性的各脂肪系数、雌性的脏器脂肪较对照组差异极显著(P<0.01);③30周龄时KK-Ay/Ta小鼠肾小球内玻璃样变性、血管基底膜增厚、肾小管腔内透明管型;肝脏出现明显脂肪变性,并伴随有肝细胞坏死、炎细胞浸润、纤维组织增生;胰岛数量明显减少、体积缩小、胰岛内细胞数量减少。实验结果证明,KK-Ay/Ta小鼠是一种中高度高血糖、高度胰岛素抵抗,胰岛功能不足和肾脏、肝脏病变,且伴随肥胖的良好Ⅱ型糖尿病动物模型。

TA2系小鼠乳腺癌肺转移(BCML-TA299)模型的建立及生物学特性的实验研究

目的:研究乳腺癌BCML-TA299生物学特性、DNA状况、相关基因蛋白的表达水平及其意义。方法:应用同系小鼠原位移植BCML-TA299细胞增殖动力学组织形态学、超微结构观察、流式细胞仪以及免疫组织化学染色技术检测TA2系小鼠乳腺癌移植瘤生物异质性、基因DNA状况和蛋白质的表达水平,研究其与细胞生物特性的关系。结果:用TA2系小鼠自发乳腺癌伴肺转移组织在同系小鼠乳腺原位建立了乳腺癌肺转移A型BCML-TA299模型。历时2年多,鼠间传至第47代,移植成功率为100%。未见自发消退,肿瘤生长特性稳定。鼠间荷瘤存活中位数为51天,平均为58.8±10.03天。肿瘤倍增时间为3.11天(指数生长期)。各代移植瘤病理形态学、超微结构观察证实保持了原代瘤的特征,转移瘤与原发瘤结构一致。染色体检查为鼠类肿瘤染色体,DNA含量经流式细胞仪检测显示为异倍体肿瘤。鼠间传代移植瘤与转移瘤保持p53、cerbB-2、nm23基因异常表达。经抗癌药物敏感实验,表明对CAP(CTX、ADM、DDP)联合化疗最为敏感,而单药紫杉醇作用差。结论:本模型可为研究乳腺癌生物异质性提供有价值的实验工具。

坎地沙坦抑制2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激反应

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激的影响及其作用机制。方法糖尿病KK/Ta小鼠随机分为:非治疗组;早期治疗组:自6周龄起经口给予坎地沙坦(4 mg.kg-.1d-1);晚期治疗组:自12周龄起给予坎地沙坦(4 mg.kg-1.d-1)。正常对照组采用BALB/c小鼠。应用免疫组化染色检测肾脏中DNA氧化损伤的标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),免疫组化和竞争性RT-PCR检测NADPH氧化酶p47phox亚基mRNA和蛋白的表达。同时测定尿白蛋白排泄率、血压和糖耐量等临床指标。结果与同龄BALB/c小鼠比较,28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加(P<0.01),肾脏NADPH氧化酶p47phox的mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),8-OHdG的形成增加(P<0.01)。坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率(P<0.01),抑制肾脏NADPH氧化酶p47phox mRNA和蛋白的表达(P<0.01),减少8-OHdG的形成(P<0.01),早期治疗组和晚期治疗组的作用无统计学差异(P>0.05)。结论坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏NADPH氧化酶p47phox的表达,抑制氧化应激反应,延缓糖尿病肾病的进展。

TA_2系小鼠B淋巴细胞型淋巴瘤淋巴道转移过程形态学观察及DNA含量分析

本实验利用我室建立的TA_2.系小鼠可移植性B淋巴细胞型恶性淋巴瘤株.第43代瘤组织,移植于动物鼠蹊部皮下,2天后开始增殖形成瘤细胞团块.9天后在局部淋巴结边缘窦内定居繁殖形成转移灶,16天远处淋巴结内查见癌细胞.在实验晚期累及肝、肾组织.淋巴结早期反应为副皮质明显扩大,免疫母细胞数显著增加.实验晚期生发中心扩大融合,髓索内浆细胞显著增加.应用显微分光光度计检测,发现局部移植瘤的瘤细胞DNA含量及核面积均随时间和转移途径的延续而增大.我们认为DNA含量发生改变是恶性淋巴瘤易转移的重要标志.因此是一个较为理想的自发淋巴道转移实验模型.

EPA对KKA^y／Ta小鼠代谢异常和肾组织病变的影响

目的研究二十碳五烯酸(EPA)对早期2型糖尿病肾病模型小鼠(KKAy/Ta小鼠)代谢异常及肾组织病变的影响。方法16只7周龄KKAy/Ta小鼠随机分为两组。12周龄时,EPA组(n=8)给予EPA1g·kg-1.d-1腹腔注射×8周,对照组则同步给予生理盐水注射;20周龄时,采用气相色谱法对两组小鼠血清脂肪酸进行检测和成分分析。分别于12、16和20周龄时检测小鼠表型变化,治疗结束后取肾组织进行组织病理学检查。结果20周龄时,EPA组和对照组血清EPA水平分别为(125.8±15.5)μg/mL和(69.2±7.8)μg/mL,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。16和20周龄时,EPA组尿白蛋白/肌酐比值(ACR)均明显低于对照组,分别为(161.3±34.4)mg/gvs(587.4±31.6)mg/g和(188.3±34.6)mg/gvs(610.4±79.8)mg/g(P<0.01);20周龄时,EPA组血清甘油三酯水平及腹腔内葡萄糖耐受试验后血糖和血清胰岛素水平均显著低于对照组(P<0.05)。组织病理学检查显示,EPA组小鼠肾小球细胞外基质积聚和小管间质纤维化的程度均轻于对照组。结论EPA对早期糖尿病肾病KKAy/Ta小鼠肾组织病变具有改善作用,其机制可能与EPA纠正代谢异常有关。

抗氧化剂TA9902对快速老化小鼠-P/8抗氧化及DNA氧化损伤影响的实验研究

目的观察抗氧化剂TA9902对快速老化小鼠P/8(SAM-P/8)抗氧化能力及淋巴细胞DNA氧化损伤的影响,为其临床治疗阿尔茨海默病(AD)提供科学依据。方法选用3月龄雄性SAM-P/8小鼠52只,采用随机数表将其分为老年组(12只)、TA9901组(12只)、EGb761组(14只)、TA9902组(14只)。TA9901组和EGb761组饮水中分别加入0.5%TA9901和0.08%EGb761,TA9902组加入1.0%的TA9002,老年组给予正常饮水饮食。清洁级环境饲养。动物喂养期为6个月。分别检测各组血浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量以及淋巴细胞DNA自发性损伤和10μmol/LH2O2诱导的氧化损伤。结果TA9902组能明显提高血浆SOD、血浆及膜GSH-Px活性,降低血浆MDA水平,与其它3组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);TA9901组、EGb761组血浆SOD、血浆及膜GSH-Px活性显著高于老年组,血浆MDA水平显著低于老年组,差异也有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。各组的淋巴细胞DNA自发性氧化损伤均较低,各组间差异没有统计学意义(P>0.05),而当加入10μmol/LH2O2时,诱发氧化损伤明显加重,TA9902组的DNA氧化损伤较其它3组显著降低(P<0.05,P<0.01),TA9901组、EGb761组的DNA氧化损伤也较老年组明显降低(P<0.05)。与老年组比较,TA9901组、EGb761组鼠尿O6-氧-甲基鸟嘌呤(mG)含量下降(P<0.05),TA9902组下降较为明显(P<0.01)。而TA9901组、EGb761组、TA9902组间差异没有统计学意义(P>0.05)。结论TA9902能显著降低机体的脂质过氧化水平并能提高抗氧化酶活性,同时,DNA诱发氧化损伤及烷化损伤则明显下降。TA9902的抗氧化作用优于TA9901和EGb761。

坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏血管紧张素1型和2型受体表达的影响

目的:探讨坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏血管紧张素1型受体(AT1)和2型受体(AT2)表达的影响。方法:KK/Ta小鼠随机分为:非治疗组;早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4mg.kg-1.d-1)治疗;晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠。测定尿白蛋白排泄率、血压和糖耐量,计算总肾小球面积(WGA)、肾小球丛面积(GTA),细胞外系膜基质面积(EC-MA)和肾小球内细胞核数目(NIGCN)。免疫荧光和免疫组化染色检测肾脏中AT1和AT2的表达。结果:8周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率显著增加[(427.49±89.37)mg/g vs.(9.54±3.25)mg/g,P<0.01],WGA、GTA、ECMA和NIGCN增多,肾小球内AT1的表达增加,AT2的表达减少。坎地沙坦治疗显著减少KK/Ta小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率[早期治疗组(32.18±9.41)mg/g,晚期治疗组(53.20±7.26)mg/g,P<0.01],减轻肾脏病理损害,抑制AT1的表达,上调AT2的表达,早期治疗组和晚期治疗组的作用无显著性差异。结论:KK/Ta小鼠肾脏中AT1受体表达增加,AT2受体表达减少。坎地沙坦治疗能够抑制AT1受体、上调AT2受体的表达,发挥其减少白蛋白尿,减轻糖尿病肾病病理损害的肾脏保护作用。

坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏硝化氧化应激的影响

目的:本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾内硝化氧化应激的影响及其作用机制。方法:KK/Ta小鼠随机分为(1)非治疗组;(2)早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4mg·kg-1·d-1)治疗;(3)晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠。应用免疫组化和免疫荧光染色检测肾脏中硝化氧化应激的标志物硝基酪氨酸,诱导型(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达,竞争性RT-PCR检测iNOS和eNOSmRNA的表达。同时测定尿白蛋白排泄率,血压和糖耐量等临床指标。结果:28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加,肾脏iNOSmRNA和蛋白表达上调,硝基酪氨酸的形成增加。坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率,抑制肾脏iNOSmRNA和蛋白的表达,减少硝基酪氨酸的形成,早期治疗组和晚期治疗组的作用差异无统计学意义。4组小鼠eNOSmRNA和蛋白的表达水平无差异。结论:坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏iNOS的表达,抑制过氧亚硝基阴离子的形成,抑制硝化氧化应激反应,发挥其降低尿白蛋白排泄率等肾脏保护作用。

改进TA-Fe法显示大鼠肾血管和肾小管的研究

目的光镜下观察改进单宁酸-氯化铁法(TA-Fe法)媒染肾微血管和肾小管的效果。方法经TA-Fe法媒染的大鼠肾的两组冰冻切片,一组切片用TA-Fe法,湿片拍照;另一组切片用改进TA-Fe法经脱水、透明、封片,显微摄影。结果两种TA-Fe法均能显示肾微血管和肾小管。改进TA-Fe法使组织结构更清晰,肾血管球毛细血管分叶更明显。肾小囊上皮、毛细血管内皮细胞、足细胞以及球内系膜细胞核亦被良好显示。切片可较长时间保存,但立体感较改进前略差。结论改进后的TA-Fe法显示肾微血管和肾血管效果更好,适合做回顾性研究。

自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏基因表达谱的研究

目的:应用基因芯片技术研究自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏基因表达谱,旨在寻找糖尿病肾病的易感基因。方法:提取20周龄雄性KK/Ta(n=3)和BALB/c(n=2)小鼠肾脏总RNA,应用Affymetrix公司生产的Affymetrix Murine Genome U74Av2基因芯片检测肾脏基因表达谱。选择差异表达基因,通过竞争性RT-PCR反应验证基因芯片的结果。结果:98个已知基因和31个表达序列标签(ESTs)在20周龄KK/Ta与BALB/c小鼠的肾脏中存在着差异表达。与BALB/c小鼠相比,KK/Ta小鼠肾脏中21个已知基因和7个EST表达上调,77个已知基因和24个EST表达下调。竞争性RT-PCR反应确认了基因芯片研究的结果。结论:KK/Ta小鼠肾脏中的差异表达基因广泛参与细胞外基质的合成与降解、信号传导、转录调节与蛋白质合成、离子转运、葡萄糖与脂类代谢等。糖尿病肾病易感基因位点UA-1区域的差异表达基因S-腺苷高同型半胱氨酸水解酶基因Ahcy为糖尿病肾病的可能易感基因。

全基因组扫描2型糖尿病KK/Ta小鼠白蛋白尿易感基因定位

目的利用全基因组扫描方法进行2型糖尿病KK/Ta小鼠白蛋白尿易感基因定位。方法以近交纯品系雌性BALB/c小鼠与雄性KK/Ta小鼠交配建立第一代杂交小鼠(F1),以雄性(KK/Ta×BALB/c)F1小鼠与雌性KK/Ta小鼠回交。提取208只雄性回交小鼠基因组DNA。根据扩增的101个微卫星DNA分离片段大小决定回交小鼠基因型,同时测定体质量、血糖、尿白蛋白及尿肌酐等表现型。采用基因定位专用软件(MAPMAKER/QTL,Map manager)进行数量性状位点(QTL)分析。结果 KK/Ta小鼠的体质量、空腹血糖水平、经腹腔葡萄糖耐量试验空腹与注射葡萄糖后2 h血糖之和显著高于BALB/c和F1小鼠(P<0.01)。20,28周龄的KK/Ta小鼠平均尿白蛋白水平显著高于BALB/c和F1小鼠(P<0.01)。20周龄与28周龄的白蛋白尿水平与第2条染色体83.0 cM D2Mit311微卫星DNA标记附近区域显著连锁,最大对数优势积分值(LOD)为3.5,我们将这一易感基因座位命名为尿白蛋白1(UA-1)。KK/KK组回交小鼠20周龄和28周龄的尿白蛋白水平显著高于KK/BALB组回交小鼠。结论与2型糖尿病KK/Ta小鼠尿白蛋白水平紧密连锁的易感基因座位位于第2条染色体83.0 cM处D2Mit311微卫星DNA标记附近区域(UA-1)。UA-1区域附近的生长激素释放激素基因GHrH、生长抑素受体4基因Smstr4、血栓调节蛋白(TM)基因Thbd等为糖尿病肾病的可能易感基因。

大鼠金属蛋白酶组织抑制物-1反义基因片段TA克隆载体的构建

目的 构建含大鼠金属蛋白酶组织抑制物 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP 1)反义基因片段TA克隆载体 ,为进一步研究TIMP 1在肾组织纤维化中的作用奠定基础。方法 本实验利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,从提取的大鼠肾组织总RNA中特异地扩增含 313bp的TIMP 1cDNA片段 ,并将其克隆到TA载体。结果 用限制性内切酶鉴定 313bp的TIMP 1cDNA片段插入方向 ,测序结果证实扩增片段为目的片段。结论 成功地构建了含大鼠TIMP

二十碳五烯酸对早期糖尿病肾病小鼠炎症和氧化应激状态的作用

目的:观察二十碳五烯酸(EPA)对早期糖尿病肾病动物模型KKAy/Ta小鼠炎症和氧化应激状态的作用。方法:KKAy/Ta小鼠随机分为两组:治疗组予以EPA1g·kg-1·d-1腹腔内注射共8周,对照组予以生理盐水注射。20周龄时检测表型变化和血清丙二醛(MDA)水平,及肾脏中巨噬细胞浸润、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、MDA和硝化酪氨酸(nitrotyrosine)表达的变化。结果:EPA显著降低了KKAy/Ta小鼠的血清三酰甘油和MDA水平,并减少尿白蛋白的排泄,改善了葡萄糖不耐受现象。EPA治疗后KKAy/Ta小鼠肾脏中MCP-1、巨噬细胞的浸润及MDA和nitrotyrosine表达明显减弱。结论:EPA改善了早期糖尿病肾病KKAy/Ta小鼠肾脏的炎症和氧化应激状态,其机制可能与EPA对代谢异常的纠正有关。

TA9901配伍EGb761对神经根撕脱后脊髓运动神经元的影响

目的 观察植物抗氧化剂TA990 1配伍EGb76 1对臂丛神经根撕脱后C7前角运动神经元c jun、NOS表达和存活的影响。方法 成年SD雌性大鼠 12 0只 ,随机分为撕脱组和治疗组。行C5～T1神经根撕脱术后 ,两组动物每天分别给予腹腔注射 1ml生理盐水或 0 5 % (TA990 1配伍EGb76 1)溶液。治疗后 4h、12h、1d、3d、5d、1周、2周、4周和 6周处死动物 ,行c jun免疫细胞化学、NADPH d组织化学和中性红复染。比较两组动物c jun阳性、NOS阳性和存活的运动神经元的数目。结果 臂丛神经根撒脱 4h后c jun开始表达 ,1d达高峰 ,随后下降至 6周。nNOS表达从 5d开始 ,2周时达高峰 ,以后逐渐下降至 6周。运动神经元的死亡开始于 2周 ,以 4周和 6周最明显。TA990 1配伍EGb76 1提高c jun表达的效果随治疗时间延长而增强、其抑制NOS表达作用则以 2周点最强。结论 TA990 1配伍EGb76 1能增强神经根撕脱后运动神经元c jun的反应 ,抑制NOS的表达 。

TA-Fe法媒染卵巢内微血管的光镜观察

目的 :光镜下观察大鼠卵巢各部位微血管的分布。方法 :应用单宁酸媒染固定液灌流大鼠 ,取卵巢作冰冻切片 ,氯化铁呈色显示微血管。结果 :卵巢髓质内可见较粗大 ,密集的不同切面的血管。其分支进入皮质 ,皮质血管较少 ,分布在卵泡周围、大卵泡膜、间质腺及黄体内。卵泡膜毛细血管呈网状 ,黄体血窦似肝小叶血窦样分布。结论 :TA Fe法可清晰地显示卵巢微血管 。

波形蛋白和胶质细胞纤维酸性蛋白在成年大鼠伸长细胞中的表达

目的 :研究波形蛋白 (VIM)和胶质细胞纤维酸性蛋白 (GFAP)在成年大鼠伸长细胞 (TAS)中的表达 ,观察TAS的特点并探讨胶质细胞的分类。方法 :采用免疫组织化学方法 ,显示第三脑室腹侧壁和正中隆起 (ME)TAS的特征。结果 :在TAS中VIM的表达强度高 ,GFAP表达较弱 ,差异非常显著。对星形胶质细胞 (AST)来说 ,不论使用Triton与否 ,GFAP均为高强度表达 ,而VIM为阴性。ME的TAS较第三脑室的突起较粗大分支较多。结论 :无Triton存在下 ,VIM可以明确定位并区分第三脑室区域2种主要的胶质细胞TAS和AST ;成年大鼠TAS还保持部分未成熟细胞的特性 ;ME是大量获得TAS的组织来源。

输注的外源脾脏细胞似与1型糖尿病小鼠的胰岛复原无关

1型糖尿病是因于免疫系统混乱的结果，当T细胞和白血球将制造胰岛素的细胞误认为外来的敌人，就会对他们展开毁灭性攻击。科学家认为，有效的治疗1型糖尿病需要2项科学成果。第一，可利用刺激或移植细胞的方式提供新的胰岛beta细胞以恢复胰脏产生胰岛素的能力；其次，保护新的beta细胞免于免疫系统的破坏。