糖肾平对糖尿病肾病KKAy小鼠肾脏保护作用及对RhoA/ROCK信号通路影响的研究

目的:探讨糖肾平对糖尿病肾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)KKAy小鼠肾保护作用及其对Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:雌性10周龄SPF级KKAy小鼠60只,KK鼠料诱导10周建立DKD模型,随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平低(0.525 g·kg(-1))、中(1.05 g·kg^(-1))、高(2.1 g·kg(-1))剂量组,10只雌性C57BL/6J小鼠为正常组。各治疗组灌胃给药,正常组、模型组灌胃等体积去离子水,每4周称体质量并测24 h尿蛋白定量。第26周小鼠麻醉后摘眼球取血,称肾质量、测空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FBG)、血尿素氮(BloodUrea Nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)和甘油三酯(Triglyceride,TG)含量;HE、Mallory和PAS染色观察肾组织病理;免疫组化、原位杂交测肾组织转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene familymember A,Rho A)、Rho相关卷曲蛋白激酶(Rho-associatedcoiled-coil-containing protein kinase 1,ROCK1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin,E-Cad)m RNA及蛋白表达。结果:与模型组相比,各治疗组体质量、肾质量/体质量、尿蛋白降低,糖肾平中、高剂量组有显著性差异(P<0.01);肾病理损害明显减轻,FBG、BUN、Scr、TG含量降低(P<0.01),E-Cadherin m RNA及蛋白表达增加,TGF-β1、Rho A、ROCK1和α-SMA m RNA和蛋白表达减少,糖肾平中、高剂量组差异显著(P<0.01)。结论:糖肾平对DKD KKAy小鼠肾的保护作用及抑制肾小管上皮细胞转分化的作用,可能与调节Rho A/ROCK信号通路有关。

推拿对坐骨神经慢性压迫损伤大鼠脊髓背角小胶质细胞P2Y12/RhoA/ROCK2通路及c-Fos蛋白表达的影响

目的观察推拿对坐骨神经慢性压迫损伤大鼠脊髓背角小胶质细胞P2Y12/RhoA/ROCK2通路及c-Fos蛋白表达的影响,探讨推拿治疗腰椎间盘突出症的作用机制。方法采用右侧坐骨神经慢性压迫损伤模拟腰椎间盘突出症神经性疼痛。将24只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组和推拿组,每组8只。造模后第4日,推拿组以按揉法干预,连续14 d。测量造模前及造模后第4、10、17 d大鼠机械缩足阈值(PWT)、热痛阈值(PWL),免疫荧光染色检测大鼠右侧脊髓背角Iba1、P2Y12蛋白表达,Western blot检测右侧脊髓背角RhoA、ROCK2蛋白表达,免疫组化检染色测右侧脊髓背角c-Fos阳性细胞数量。结果与空白组比较,模型组大鼠造模后第4、10、17日PWT、PWL明显降低(P<0.001),右侧脊髓背角Iba1、P2Y12、RhoA、ROCK2蛋白表达明显升高(P<0.001,P<0.05),c-Fos阳性细胞数明显增加(P<0.001);与模型组比较,推拿组大鼠造模后第10、17日PWT、PWL明显升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),右侧脊髓背角Iba1、P2Y12、RhoA、ROCK2蛋白表达明显降低(P<0.001,P<0.01,P<0.05),c-Fos阳性细胞数明显减少(P<0.001)。结论推拿可能通过调控脊髓背角P2Y12/RhoA/ROCK2通路及c-Fos表达抑制小胶质细胞激活,降低神经元兴奋性,对腰椎间盘突出症发挥镇痛作用。

杜仲醇提取物通过RhoA/ROCK信号通路调控大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化作用研究

目的:分析杜仲醇提取物通过RhoA/ROCK信号通路调控骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化中的影响。方法:选取实验用纯系大鼠50只,随机数字表法分成5组:正常组(10只)、模型组(10只)、杜仲低剂量组(10只)、杜仲中剂量组(10只)与杜仲高剂量组(10只),模型组与杜仲低、中、高剂量组制备OP大鼠模型,杜仲低、中、高剂量组大鼠分别使用50、100、200 mg/kg杜仲醇提取物灌胃,正常组、模型组大鼠5 mL/kg生理盐水灌胃,末次给药后断颈处死大鼠,经过BMSCs培养并察看大鼠细胞成长及矿化状况,RT-PCR检测大鼠软骨细胞内ROCK1、RhoA表达状况及BMSCs成骨诱导后骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)mRNA表达。结果:模型组、杜仲低剂量组大鼠细胞矿化率较正常组显著降低,杜仲中、高剂量组大鼠细胞矿化率较模型组、杜仲低剂量组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、杜仲低剂量组大鼠ROCK1、RhoA mRNA表达量较正常组显著降低,杜仲中剂量组、杜仲高剂量组大鼠ROCK1、RhoA mRNA表达量较模型组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、杜仲低剂量组OPN、Runx2及OCN mRNA表达量较正常组显著降低,杜仲中、高剂量组OPN、Run×2及OCN mRNA表达量较模型组、杜仲低剂量组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:杜仲醇提取物可提升BMSCs内RhoA/ROCK信号路径ROCK1、RhoA mRNA表达量,促进成骨分化和BMSCs增殖,但其具体机制仍需行更深入研究。

两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾脏纤维化RhoA/ROCK/Nox4信号通路的影响

目的观察两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾功能损伤及肾脏纤维化的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠以高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和两色金鸡菊高、中、低剂量组,每组10只。各给药组给予相应剂量药物灌胃4周。Masson染色观察大鼠肾脏纤维物质沉积的变化;放射免疫法检测大鼠早期肾损伤各指标的水平;免疫组化检测大鼠肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肾脏纤维物质沉积、尿微量白蛋白、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-巨球蛋白(β2-MG)水平显著升高,RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,两色金鸡菊高、中、低剂量组均不同程度地改善大鼠肾脏纤维物质的沉积,抑制尿液微量白蛋白、α1-MG、β2-MG表达水平,肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过RhoA/ROCK/Nox4信号通路抑制模型大鼠肾组织α-SMA的表达、肾脏纤维物质沉积,进而减轻模型大鼠早期肾脏损伤。

RhoA/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用研究

目的探讨Rho A/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用。方法选取清洁级雌性SD大鼠30只建立糖尿病大鼠模型,按随机数字表法分为法舒地尔组和模型组,分别给予盐酸法舒尔地尔注射液(10 mg/kg/d)和等体积生理盐水腹腔注射,再选择10只大鼠作为对照组予普通饲料喂养。24周末测量各组大鼠心脏重量、体重、心脏组织形态和心肌胶原沉积程度,测定各组心肌匀浆超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),采用Western blot法检测心肌磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(p MYPT1)。结果模型组体重低于对照组,而心脏重量和心脏重量/体重比明显高于对照组(P<0.05);法舒地尔组体重较模型组有所上升,而心脏体重和心脏重量/体重比下降(P<0.05);模型组大鼠心肌细胞排列混乱,结构不清晰,间质中成纤维细胞增多,法舒地尔组大鼠心肌间质中成纤维细胞较模型组减少;模型组心肌间质及血管周围胶原面积为(11.34±0.74)%,心肌胶原含量为3.55±0.13 g/mg,明显较对照组增高(P<0.05);法舒地尔组胶原面积和胶原含量分别为(3.32±0.32)%和(2.35±0.18)g/mg,均较模型组降低(P<0.05);模型组心肌MDA和p-MYPT1为(2.60±0.34)nmol/mgprot和0.933±0.021,明显高于对照组(P<0.05);法舒地尔组MDA和p-MYPT1分别为(1.30±0.41)nmol/mgprot和0.501±0.017,均较模型组降低(P<0.05);模型组SOD为(174.01±17.35)U/mgprot,明显低于对照组(P<0.05),而法舒地尔组SOD为(195.23±11.28)U/mgprot,较模型组有所升高(P<0.05)。结论 Rho A/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化中起了重要作用,ROCK抑制剂法舒地尔能有效抑制糖尿病心肌纤维化。

一贯煎联合骨髓间充质干细胞调控RhoA/ROCK1通路抑制大鼠肝纤维化的实验研究

目的:探究一贯煎联合骨髓间充质干细胞在治疗肝纤维化过程中对RhoA/ROCK1通路的作用。方法:将72只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、干细胞组、一贯煎+干细胞组;四氯化碳腹腔注射6周制备肝纤维化动物模型,干预4周后取材。记录大鼠阴虚表征情况;检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)含量;HE、Masson染色观察病理改变;实时PCR、蛋白质印迹法检测肝组织中RhoA、Rho相关激酶1(ROCK1)、α-SMA和COL-1 mRNA及蛋白表达;IHC检测α-SMA、COL-1阳性面积。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠具有明显阴虚表征,肝脏出现明显炎症浸润和纤维增生,肝组织RhoA、ROCK1、α-SMA、胶原蛋白-1(COL-1)mRNA与蛋白表达显著升高(P<0.05),α-SMA、COL-1阳性面积显著增加(P<0.05);与模型对照组比较,一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、骨髓干细胞、一贯煎+干细胞组大鼠的阴虚表征、肝脏炎症和纤维化程度减轻,RhoA、ROCK1、α-SMA和COL-1 mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05),α-SMA、COL-1阳性面积显著减少(P<0.05),其中一贯煎+干细胞组较一贯煎中剂量组、干细胞组效果更优(P<0.05)。结论:一贯煎与骨髓干细胞可通过调控RhoA/ROCK1通路抑制肝星状细胞活化从而发挥抗纤维化的作用,二者协同作用效果优于各自单独作用效果。

溶血磷脂酸调控RhoA/ROCK2信号通路对大鼠脑缺血再灌注后的影响

目的分析溶血磷脂酸(LPA)调控RhoA/ROCK2信号通路对脑缺血再灌注后的影响。方法使用线栓法成功构建20只脑动脉栓塞大鼠,缺血2 h后再行灌注,灌注24 h后完成脑缺血再灌注模型,将其按照随机数字表法分为两组,每组各10只,分别为模型组和LPA组。LPA组每日腹腔注射50μmol/L的LPA,模型组每日腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,同时随机纳入10只健康大鼠作为对照组,各组均标准饲养14 d。比较各组大鼠脑神经细胞活力、迁移、凋亡情况,并比较各组大鼠14 d后脑神经细胞炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平、细胞内RhoA、ROCK2蛋白和mRNA表达情况。结果标准饲养7 d和14 d后,模型组大鼠的脑神经细胞活力和迁移个数均低于对照组,LPA组大鼠的脑神经细胞活力和迁移个数均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05);且标准饲养14 d后,LPA组大鼠的脑神经细胞活力和迁移个数高于7 d时,而模型组大鼠14 d的脑神经细胞活力和迁移个数低于7 d时,差异均有统计学意义(P<0.05)。标准饲养7 d和14 d后,模型组大鼠的脑神经细胞凋亡率均高于对照组,LPA组大鼠的脑神经细胞凋亡率低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05);标准饲养14 d后,LPA组大鼠的脑神经细胞凋亡率低于7 d,而模型组大鼠14 d的脑神经细胞凋亡率高于7 d时,差异均有统计学意义(P<0.05)。标准饲养14 d后,模型组大鼠的脑神经细胞IL-6、IL-1β、TNF-α水平均高于对照组,LPA组大鼠的脑神经细胞IL-6、IL-1β、TNF-α水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。标准饲养14 d后,模型组大鼠的脑神经细胞内RhoA、ROCK2蛋白和mRNA均低于对照组,LPA组大鼠的脑神经细胞内RhoA、ROCK2蛋白和mRNA均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论LPA可通过调控RhoA/ROCK2信号通路提高脑神经细胞活性,促进迁移,抑制凋亡,缓解炎症反应。

糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的实验研究

目的:探讨糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:10%FBS的RPMI 1640培养细胞,培养细胞分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和糖肾宁组,按每孔3000个细胞接种于96孔板中。每组8个复孔,加入6%的各组含药血清培养,分别于12、24、48、60 h观察细胞形态并应用MTT法检测细胞增殖情况;Western blotting检测Rho A、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达。结果:正常组细胞呈扁平不规则多角形,高糖刺激下,细胞呈梭型,加入含药血清后呈扁平不规则多角形。MTT:24、48 h,正常组与模型组比较,有极显著性差异(P<0.01),60 h,正常组与模型组比较,有显著性差异(P<0.05);24 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组比较,有显著性差异(P<0.05);48 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有极显著性差异(P<0.01);60 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有显著性差异(P<0.05)。Western blotting:正常组与模型组、Y27632组比较Rho A蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);糖肾宁组与模型组比较,有极显著性差异(P<0.01);糖肾宁组与Y27632组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组比较ROCK1蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组比较α-SMA蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组组比较E-Cadherin蛋白表达增加,有显著性差异(P<0.05);Y27632组与糖肾宁组比较,有显著性差异(P<0.05);模型组与Y27632组、各治疗组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:糖肾宁可抑制高糖培养肾小管上皮细胞增殖和Rho A/ROCK信号通路相关分子的表达,逆转肾小管上皮细胞转分化、减轻肾间质纤维化、延缓DKD进程。

糖肾平含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的研究

目的:探讨糖肾平含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:制备鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:正常组,高糖组,抑制剂(Y27632)组,厄贝沙坦组,糖肾平低、中、高剂量组,3000细胞/孔种于96孔板,每组8个复孔,12、24、48、60 h观察细胞,MTT法检测细胞增殖。Western blotting检测肾小管上皮细胞中Rho A、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达。结果:高糖诱导后细胞呈梭型或不规则三角形;含药血清干预后,细胞呈扁平不规则多角形。MTT:12 h,与正常组比,各组OD值升高;24、48、60 h,与正常组比,高糖组OD值显著升高(P<0.01);与高糖组比,各治疗组OD值有不同程度降低(P<0.05),48 h,与Y27632组、厄贝沙坦组和糖肾平高剂量组比,糖肾平低、中剂量组OD值降低(P<0.05);60 h,与Y27632组比,糖肾平中剂量组降低;与厄贝沙坦组比,糖肾平各剂量组OD值降低(P<0.05);与糖肾平高剂量组比,糖肾平低剂量组升高(P<0.05)。Western blotting,与正常组比,高糖组E-Cadherin蛋白表达减少,Rho A、ROCK1和α-SMA蛋白表达增加(P<0.01);与高糖组比,各组E-Cadherin蛋白表达增加,Rho A、ROCK1和α-SMA蛋白表达减少,高剂量组有显著差异(P<0.01);与Y27632组比,糖肾平高剂量组ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P>0.05),Rho A蛋白表达减少(P<0.01);与厄贝沙坦组比,糖肾平高剂量组Rho A、ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。结论:糖肾平通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和Rho A/ROCK信号通路相关分子的表达,从而逆转上皮-间质转分化,抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。

亚低温联合高压氧干预对大鼠神经干细胞RhoA/RHOCK通路的影响

目的探讨亚低温联合高压氧干预通过Rho A/RHOCK通路对神经干细胞凋亡、增殖、分化的影响。方法制作大鼠神经干细胞液压损伤模型,并随机分为4组。常温组不进行任何干预;亚低温干预组于伤后1 h进行(32±0.5)℃亚低温治疗4 h;高压氧组予以高压氧干预;联合组在亚低温干预同时予以高压氧干预。采用免疫荧光检测神经干细胞Rho A、RHOCK、Nogo-A、NgR基因及蛋白表达,激光共聚焦显微镜根据荧光强度值计算神经干细胞内Ca2+浓度,TUNEL法检测神经干细胞凋亡情况。结果体外损伤模型神经干细胞造模后72 h,联合组、高压氧组、亚低温组神经干细胞Rho A、RHOCK、Nogo-A、NgR基因及蛋白表达较常温组明显降低(P均<0.05),联合组比高压氧组、亚低温组降低更明显(P均<0.01)。常温组、亚低温组、高压氧组、联合组神经干细胞细胞内Ca^(2+)浓度分别为(286.6±34.7)、(236.6±21.4)、(234.6±19.0)、(202.6±15.0)nmol/L,组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。常温组、亚低温组、高压氧组、联合组神经干细胞凋亡率分别为(24.76±0.16)%、(19.13±0.84)%、(18.13±0.76)%、(10.13±0.26)%,组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论亚低温治疗能通过影响Rho A/RHOCK通路发挥调控神经干细胞凋亡、增殖、分化的作用。

化瘀祛痰方对急性心肌缺血大鼠心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA表达的影响

【目的】观察化瘀祛痰方对急性心肌缺血大鼠心肌组织RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)信号通路中RhoA、ROCK1 mRNA表达的影响,探讨其防治机制。【方法】将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,即空白组,模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组10只。西药组予以单硝酸异山梨酯水溶液(剂量为3.125 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,中药低、中、高剂量组予以化瘀祛痰方水煎液(剂量分别为10.4、20.8、41.6 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,空白组和模型组予以等体积生理盐水灌胃,给药7 d。预灌胃7 d后,除正常组外,其余各组大鼠给予腹腔注射异丙肾上腺素(Iso)复制急性心肌缺血模型。观测大鼠心电图ST段总偏移值。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织结构,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清内皮素1(ET-1)含量,qPCR法检测心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA的表达。【结果】与空白组比较,模型组心肌纤维大片断裂,间质出现明显出血,心电图ST段偏移值、血清ET-1含量、心肌组织RhoA与ROCK1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组心肌纤维断裂情况改善,间质出血减少,心电图ST段偏移值、血清ET-1含量、心肌组织RhoA与ROCK1的mRNA表达水平均降低(P<0.05)。【结论】化瘀祛痰方可改善心肌缺血状态,其机制可能与降低心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA表达,从而抑制心肌收缩,改善心肌血流量有关。

水蛭素抑制RhoA/Rho激酶信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎症反应和纤维化的影响

目的 探讨水蛭素抑制RhoA/Rho激酶(ROCK)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症反应和纤维化的影响。方法 2020年1—6月,将52只清洁级SD大鼠随机数字表法分为造模组(42只)和对照组(10只)。造模组大鼠通过气管内滴注脂多糖(LPS)溶液建立COPD模型,建模后的大鼠随机数字表法分为模型组、水蛭素组(50 U/kg)、ROCK激活剂组[溶血磷脂酸(LPA,40μg/kg)组、水蛭素+LPA组(50 U/kg水蛭素+40μg/kg LPA)],10只/组。药物组和激活剂组分别按照相应剂量进行干预;其余各组给予生理盐水干预。干预结束后,检测各组大鼠肺功能指标-呼气峰值流速(PEF)及0.3秒用力呼气容积(FEV0.3)、用力肺活量比值(FVC);颈总动脉取血,检测血清中炎性因子指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平;分离肺组织,观察肺组织形态学变化、肺纤维化程度以及RhoA/ROCK信号通路蛋白表达情况。结果 对照组大鼠无肺组织损伤;与对照组PEF(11.21±1.12)V/mL,FEV0.3(31.68±3.24)mL/s,FVC(8.56±0.85)V/mL,IL-1β(65.78±6.66)ng/L,TNF-α(100.32±10.02)ng/L相比,模型组大鼠肺组织损伤及纤维化较为严重,PEF(7.41±0.71)V/mL、FEV0.3(22.42±2.21)mL/s、FVC(4.61±0.46)V/mL较显著降低(P<0.05),而IL-1β(158.63±15.89)ng/L、TNF-α(545.37±54.56)ng/L显著增加,RhoA、Rho激酶1(ROCK1)蛋白表达也增加(P<0.05);与模型组相比,经水蛭素组大鼠肺组织损伤及纤维化程度得到改善,PEF(5.34±0.53)V/mL、FEV0.3(16.15±1.62)mL/s、FVC(8.21±0.82)V/mL较模型组显著增加(P<0.05),而IL-1β(68.72±6.88)ng/L、TNF-α(115.35±11.55)ng/L显著降低,RhoA、ROCK1蛋白表达均显著降低(P<0.05);LPA可减弱水蛭素对COPD大鼠炎症反应和肺纤维化的改善作用(P<0.05)。结论 水蛭素可以降低炎症细胞浸润,改善肺组织损伤和肺纤维化,可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

益母草碱调节RhoA/ROCK信号通路对乙型肝炎大鼠的治疗作用

【目的】观察益母草碱对乙型肝炎大鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只大鼠随机分为6组,即正常组,模型组,益母草碱低、中、高剂量组,益母草碱高剂量+溶血磷脂酸(LPA)组。除正常组外,其余各组大鼠构建乙型肝炎病毒(HBV)感染模型。造模成功后,各组对应干预。干预结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)及炎症因子白细胞介素(IL)-10、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,自动分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肝组织HBV DNA水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化,免疫组织化学法检测肝组织乙型肝炎核心抗原(HBcAg)表达水平,Western Blot法检测肝组织Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠肝小叶中心坏死,肝细胞水肿、变性,HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平,HBcAg阳性细胞数,ALT、AST水平,IL-6、TNF-α、IL-10含量,RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平均显著升高(均P<0.05);与模型组比较,益母草碱低、中、高剂量组大鼠肝损伤程度降低,肝细胞变性减轻,HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平,HBcAg阳性细胞数,ALT、AST水平,IL-6、TNF-α含量,RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平均显著降低,IL-10含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与益母草碱高剂量组比较,益母草碱高剂量+LPA组肝损伤程度加重,HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平,HBcAg阳性细胞数,ALT、AST水平,IL-6、TNF-α含量,RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平升高,IL-10含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】益母草碱能减轻乙型肝炎大鼠肝组织损伤,改善肝功能,减少炎症反应,其机制与抑制RhoA/ROCK通路有关。

侯氏黑散中风药、补虚药对脑缺血大鼠轴突生长抑制信号通路Nogo-A/NgR与RhoA/Rock2的影响

目的探讨侯氏黑散方中风药、补虚药以及风药补虚药联用对脑缺血大鼠轴突生长抑制因子Nogo-A、NgR、Rho A、Rock2蛋白表达的影响。方法采取线栓法制备永久性大脑中动脉栓塞(p MACO)模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、风药组(7.70 g/kg)、补虚药组(2.59 g/kg)、风药补虚药联用组(10.50 g/kg)。术后每12 h灌胃给药1次,连续给药72 h。运用Western blot检测大鼠缺血侧海马CA1区Nogo-A、NgR、Rho A、Rock2蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠Nogo-A、NgR、Rho A、Rock2蛋白的表达均升高(P<0.01);与模型组相比,各给药组大鼠NgR的蛋白表达均显著下降(P<0.01);Rho A、Rock2蛋白的表达均不同程度的下降,但只有联用药组具有统计学差异(P<0.05)。结论侯氏黑散中风药、补虚药可能通过对脑缺血大鼠轴突生长抑制信号通路Nogo-A/Rho A/Rock2的调节促进脑缺血后神经功能的修复。

异丙酚诱发新生大鼠海马神经元凋亡及与RhoA/ROCK2信号通路的关系

目的探讨异丙酚诱发的新生大鼠海马神经元凋亡情况及其与RhoA/ROCK2信号通路的关系。方法 46只SD大鼠随机分为对照组,低、高剂量实验组,分别腹腔注射脂肪乳剂7. 5 mL·kg^(-1),异丙酚50 mg·kg^(-1),异丙酚100mg·kg^(-1)。分离并培养新生SD大鼠神经元,对照组(C组)神经元正常培养,低、高剂量异丙酚干预组(P组)神经元分别加入6,12μg·mL^(-1)异丙酚。用TUNEL法检测原代SD大鼠神经元凋亡情况,蛋白免疫印迹法检测大鼠海马组织中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及RhoA/ROCK2信号通路蛋白的表达。结果 C组,低、高剂量P组凋亡率分别为(9. 54±1. 13)%,(10. 53±1. 85)%,(27. 63±2. 54)%,高剂量异丙酚干预组分别与对照组和低剂量试验组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。对照组,低剂量实验组和高剂量实验组海马组织中Caspase-3蛋白相对表达量分别为0. 28±0. 03,0. 32±0. 05,0. 98±0. 25; RhoA蛋白相对表达量分别为0. 25±0. 05,0. 32±0. 06,0. 87±0. 08;ROCK2蛋白相对表达量分别为0. 59±0. 11,0. 63±0. 20,1. 53±0. 09,高剂量实验组分别与对照组和低剂量试验组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论高剂量异丙酚可诱发新生大鼠海马神经元凋亡,且RhoA/ROCK2信号通路的激活参与了该过程。

丹参酮ⅡA对压力负荷增加大鼠心肌肥厚的抑制作用

目的:观察RhoA、Rock1蛋白在压力负荷增加大鼠心肌中的表达,探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,Tan Ⅱ A)对压力负荷增加大鼠心肌肥厚的抑制作用。方法:40只成年雄性SD大鼠,随机分成5组(n=8),即假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Tan Ⅱ A低剂量组[L-Tan Ⅱ A组,10 mg/(kg.d)]、Tan Ⅱ A高剂量组[H-Tan Ⅱ A组,20 mg/(kg.d)]及阳性对照药物卡托普利组[Captopril组,100 mg/(kg.d)]。除Sham组外,其余4组大鼠均行肾上方腹主动脉缩窄术建立压力负荷增加心肌肥厚模型,Sham组大鼠仅分离腹主动脉而不结扎。术后4周成功造模并开始给药,疗程为4周。8周后,检测心脏肥厚指数和心肌组织病理学,ELISA法检测心肌羟脯氨酸含量以及免疫组化和免疫印迹法检测心肌组织中RhoA和Rock1蛋白的含量。结果:与Sham组比较,Model组大鼠的心脏肥厚指数、心肌羟脯氨酸含量及心肌组织中RhoA和Rock1蛋白含量均显著升高(均P<0.01);与Model组比较,Tan Ⅱ A低剂量组的心脏肥厚指数、心肌羟脯氨酸含量及心肌组织中RhoA和Rock1蛋白含量均降低(均P<0.05),而Tan Ⅱ A高剂量组上述指标均显著降低(均P<0.01)。结论:压力负荷增加大鼠心肌组织中RhoA和Rock1蛋白的表达明显升高,表明RhoA/Rock信号通路参与了压力负荷增加大鼠心肌肥厚的发生与发展。Tan Ⅱ A能抑制RhoA/Rock信号通路,从而改善心肌肥厚。

抗纤益心方通过调节RhoA/ROCK2信号通路改善扩张型心肌病大鼠心肌纤维化

目的:探讨抗纤益心方抑制扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)模型大鼠心肌纤维化的相关分子机制。方法:80只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(70只)。采用呋喃唑酮自饮水法建立DCM大鼠模型,将造模成功大鼠(45只)随机分为模型组、卡托普利(10.125 mg·kg^(-1))组及抗纤益心方高(3.6 g·kg^(-1))、中(1.8 g·kg^(-1))、低剂量(0.9 g·kg^(-1))组。连续药物干预4周后超声心动图检测各组大鼠心脏功能;HE染色和Masson染色检测心肌组织病理改变;ELISA检测血清中可溶性生长刺激表达基因2蛋白(soluble growth stimulating factor 2,sST2)及半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)的含量;Western Blot检测Ras同源蛋白家族成员A(ras homologous family member A,RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(rho associated coiled coil forming protein kinase 2,ROCK2)、肌球蛋白磷酸酶靶标亚基1(myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1)、p-MYPT1的蛋白表达水平。结果:与正常组相比,模型组大鼠LVEDD、LVESD显著升高(P<0.01),LVEF、LVFS显著降低(P<0.01),心肌组织胶原蛋白过度沉积,CVF及sST2和Gal-3含量显著升高(P<0.01),心肌组织RhoA、ROCK2、p-MYPT1蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,抗纤益心方高、中剂量组和卡托普利组大鼠LVEDD、LVESD显著降低(P<0.05),LVEF、LVFS显著升高(P<0.05),心肌组织病理明显改善,胶原蛋白沉积明显改善,心肌纤维化明显减轻,CVF及血清sST2和Gal-3含量显著降低(P<0.05),心肌组织RhoA、ROCK2、p-MYPT1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:抗纤益心方可能通过下调RhoA/ROCK2信号通路抑制DCM大鼠心肌纤维化的发生。

红芪多糖对GK糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦组织MYPT1/p-MYPT1蛋白表达的影响

目的探讨红芪多糖(HPS)改善GK糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃动力的作用机制。方法 12只Wistar大鼠作为正常组,68只GK大鼠高糖高脂饲料不规则喂养8周制备DGP模型,60只成模大鼠随机分为模型组、阳性药组(莫沙必利)、红芪多糖低、中、高剂量组等5组(每组12只)。除正常组和模型组外,其他各组大鼠灌胃干预12周。于干预前和干预后第4、8、12周末检测血糖;实验结束后检测胃排空率(GER);ELISA法检测胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、P物质(SP)含量;分别采用免疫组化法和蛋白印迹(WB)法检测胃窦组织RhoA、MYPT1、p-MYPT1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠血糖显著升高(P<0.01),胃排空率显著下降,胃激素含量显著降低,胃窦组织RhoA、MYPT1、p-MYPT1蛋白表达显著降低(P<0.01);经干预治疗后,与模型组比较,阳性药组和HPS各组血糖显著降低(P<0.01),胃排空率、胃激素含量、胃窦组织RhoA、MYPT1、p-MYPT1蛋白表达量显著增高(P<0.05或P<0.01)。结论 HPS能够降低GK糖尿病胃轻瘫大鼠血糖,促进胃排空,增加胃泌素、胃动素、P物质等胃激素的含量,这可能与其调节胃窦组织RhoA/RocK信号通路有关。

川芎嗪对两肾一夹高血压模型大鼠心肌的保护作用及机制

目的 探讨川芎嗪对两肾一夹高血压模型大鼠心肌的保护作用及对Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路的影响。方法 通过两肾一夹法构建高血压大鼠模型,将SD雄性大鼠50只随机分成5组:假手术组(灌胃等量生理盐水),模型组(造模成功后灌胃等量生理盐水),坎地沙坦组[造模成功后灌胃10 mg/(kg·d)坎地沙坦],川芎嗪低、高剂量组[造模成功后分别灌胃30、50 mg/(kg·d)川芎嗪],每组各10只。每日1次,连续给药4周。通过血压仪测量给药2、4周后各组大鼠动脉收缩压、心率。末次给药24 h后,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血浆中内皮素1、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)含量,HE染色观察各组大鼠左心室心肌细胞形态变化,Masson染色观察心肌胶原组织结构变化,计算心肌胶原容积分数(CVF),实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测各组大鼠左心室组织RhoA、ROCK1、转化生长因子β;(TGF-β;)mRNA及蛋白表达情况。结果与假手术组相比,干预前,干预2、4周,模型组大鼠收缩压、心率升高(均P<0.05)。干预2、4周,与模型组相比,坎地沙坦组,川芎嗪低、高剂量组大鼠收缩压、心率降低(P<0.05);坎地沙坦组和川芎嗪高剂量组大鼠收缩压低于川芎嗪低剂量组(均P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠出现心肌细胞排列紊乱、细胞间隙不明显、纤维组织增生、排列不规则、有大量蓝色胶原组织表达等病理变化,心肌CVF升高;与模型组相比,坎地沙坦组,川芎嗪低、高剂量组大鼠上述病理变化明显减轻,心肌CVF降低[心肌CVF:坎地沙坦组(1.71±0.15)%比川芎嗪高剂量组(1.76±0.21)%比川芎嗪低剂量组(3.53±0.37)%比模型组(4.72±0.43)%比假手术组(1.15±0.10)%,F=230.903,P<0.001]。与假手术组相比,模型组大鼠血浆内皮素1、AngⅡ、TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI升高,左心室组织RhoA、ROCK1、TGF-β;mRNA及蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型组比较,坎地沙坦组,川芎嗪低、高剂量组血浆内皮素1、AngⅡ、TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI含量,左心室组织RhoA、ROCK1、TGF-β;mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。川芎嗪高剂量组和坎地沙坦组大鼠上述指标低于川芎嗪低剂量组(P<0.05)。结论 川芎嗪降低血压,缓解心肌组织损伤,可能与抑制RhoA/ROCK通路有关。