藏鸡KLF15基因克隆、组织表达谱及其表达与肌内脂肪含量相关性的研究

旨在获得藏鸡KLF15基因序列,阐明其组织和时序表达谱,并分析该基因表达与肌内脂肪(IMF)含量的关系。本研究选取1、81、119、154、210日龄健康公母藏鸡各5只为试验动物,利用RT-PCR技术克隆KLF15基因,利用生物信息学软件分析基因生物学特征,利用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测KLF15基因在藏鸡不同组织、不同发育阶段的表达谱,并分析其表达水平与肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量的相关性。结果显示,克隆得到藏鸡KLF15基因序列长度为1 288bp(GenBank登录号:KY747450),开放阅读框为1 212bp,编码403个氨基酸,是具有3个锌指结构的亲水不稳定碱性蛋白质。藏鸡KLF15基因与原鸡的核苷酸和氨基酸的同源性均为99%。KLF15mRNA在藏鸡各个组织中广泛表达,但在肺组织中表达水平最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。KLF15mRNA在1日龄藏鸡胸肌组织中的表达水平高于其他各日龄段,并随着日龄的增长呈下降趋势;在119日龄腿肌组织中的表达水平最高,且整体表达水平的变化都呈先下降后上升再下降的趋势。藏鸡公鸡154日龄前KLF15基因的表达水平与其对应的IMF含量呈正相关,154日龄以后则呈负相关;藏鸡母鸡在各个日龄段则主要表现为微弱的负相关。上述结果为进一步揭示KLF15基因在藏鸡IMF沉积中的作用提供重要数据。

水牛KLF 15基因克隆、分子特征和组织差异表达分析

【目的】试验旨在获取水牛Krüppel样因子15(Krüppel-like factor 15,KLF15)基因,分析其分子特征和组织差异表达,初步揭示该基因的结构和功能。【方法】克隆水牛KLF 15基因编码区,对该基因的结构、氨基酸序列一致性、理化特性、基序、保守结构域、生物学功能等进行比较分析,并采用实时荧光定量PCR法检测KLF 15基因在水牛各组织中的表达水平。【结果】克隆得到水牛KLF 15基因编码区长为1212 bp,编码403个氨基酸。生物信息学分析显示,水牛KLF15与其他牛科物种氨基酸序列的一致性较高,是核内的亲水性蛋白,无信号肽序列及跨膜结构,包含KLF15_N、COG5048和zf-C2H2锌指结构等保守结构域。水牛KLF15的主要功能是调控DNA转录、结合DNA、结合锌指结构等。KLF 15基因在泌乳期水牛的脂肪中表达量最高,在非泌乳期水牛的肌肉中表达量最高,但在2个时期的水牛中均为在乳腺、心脏、肝脏、脾脏等组织中中度表达,在肺脏、肾脏、瘤胃和小肠等组织中低表达或几乎不表达。【结论】水牛KLF15是细胞核内的蛋白,可结合锌指结构调控DNA的转录,在脂合成旺盛的组织中发挥功能。