龙葵碱联合KLF16基因对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨龙葵碱联合Krüppel样转录因子16(KLF16)基因对人胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人胶质瘤U87细胞,将特异性KLF16 siRNA和阴性对照siRNA Control转染U87细胞,分别命名为si-KLF16组和si-NC组,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测转染后细胞中KLF16的表达情况。使用不同浓度(2.5、5、10、20、30μg/μL)的龙葵碱分别作用si-NC组和si-KLF16组细胞48 h,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率并筛选半数抑制浓度(IC50),以IC50为龙葵碱后续实验浓度,根据是否添加龙葵碱处理实验分为4组,si-NC组、si-KLF16组、si-NC+Sol组、si-KLF16+Sol组,分别使用MTT和流式细胞仪测定各组细胞增殖和凋亡能力,Western blot分析各组细胞中Ki-67、PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果胶质瘤U87细胞转染后,si-KLF16组细胞中KLF16 mRNA和蛋白表达显著低于si-NC组(P<0.05)。筛选出浓度为20μg/μL的龙葵碱作为后续实验浓度。与si-NC组比,si-KLF16组、si-NC+Sol组和si-KLF16+Sol组细胞增殖能力均受到明显抑制(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05)。与si-KLF16组和si-NC+Sol组比,si-KLF16+Sol组细胞增殖抑制作用和凋亡促进作用更显著(P<0.05)。结论龙葵碱联合KLF16基因能够协同抑制胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与调控Ki-67、PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达有关。