牦牛KLF2基因功能区克隆及组织表达分析

旨在克隆牦牛KLF2(Krupple-like transcription factor 2,Kruppel样转录因子2)基因功能区序列,阐明其组织表达规律,并揭示基因与肌内脂肪含量的相关性。以麦洼牦牛为试验动物,利用RT-PCR方法克隆KLF2基因功能区序列,荧光定量PCR技术检测该基因在各种组织中的表达模式。结果表明,获得牦牛KLF2基因序列454bp(GenBank登陆号:KX395178),包括KLFs家族典型的3个锌指结构域;KLF2mRNA在牦牛的肺脏和脂肪组织中存在高水平表达,极显著高于其他组织(P<0.01);KLF2 mRNA的表达水平与背最长肌IMF(Intramuscular Fat,肌内脂肪)含量呈正相关(P<0.01,R=0.885)。结果推测KLF2可能作为牦牛肉质性状的候选基因。

青海湖裸鲤klf 2基因的克隆与功能初步分析

【目的】围绕青海湖裸鲤卵巢中klf2基因的克隆和功能开展相关研究,为青海湖裸鲤的卵巢发育机制研究提供理论基础。【方法】采用RACE(Rapid-amplifiction of cDNA ends)和RT-PCR克隆青海湖裸鲤klf2基因全长cDNA序列,对其进行生物信息分析,通过表达研究对其功能进行初步分析。【结果】青海湖裸鲤klf2基因全长cDNA序列为2183 bp,包含1104 bp开放阅读框,编码367个氨基酸;克隆的klf2基因与其他脊椎动物的同源性为47.0%~95.1%,处于系统进化树上同一分支。klf2基因与其邻近基因eps15l1、calr3、ap1m1、tpm4的共线性在四足类和部分鱼类中高度保守;klf2基因的表达在青海湖裸鲤存在雌雄差异,在卵巢中高量表达,在精巢中不表达,在雌雄个体的垂体、鳃、心脏、脾脏、头肾、肾中少量表达;青海湖裸鲤klf2基因在6月和9月卵巢中低表达,在12月及后期卵巢中持续高表达。【结论】klf2基因可能在青海湖裸鲤卵巢发育和卵子发生过程中起重要作用。

KLF2过表达及敲减胃癌稳转细胞株的建立

目的构建KLF2过表达BGC823和KLF2敲减MGC803胃癌稳转细胞株。方法克隆人源KLF2基因,连接到Age I/Age I酶切后GV358载体上,构建GV358-KLF2重组质粒,转染293T细胞,包装慢病毒;构建KLF2shRNA,连接到Bam HI和EcoRI双酶切后的PHBLV-U6-ZSGreen-Puro载体上,经鉴定后转染293T细胞。采用RT-PCR及Western印迹法检测稳转细胞株中KLF2的表达。结果利用慢病毒介导,重组质粒G V358-K L F2和K L F2-shRN A转导入B G C823细胞、M G C803细胞并稳定表达。RT-PC R和W estern印迹法结果均显示过表达稳转株KLF2表达量明显升高(P<0.05),敲减稳转株KLF2表达量明显下降(P<0.05)。结论成功构建了K L F2过表达B G C823细胞株和K L F2敲减M G C803细胞株,为后续K L F2功能实验奠定了基础。