带有穿膜肽重组PTD-KLF4的制备及活性鉴定

KLF4是Kruppel样转录因子(kruppel-like factors,KLF)家族中的一员,是维持胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)全能性的重要转录因子。蛋白质转导结构域(protein transd uctiondomain,PTD)能够携带大分子进入细胞。为了获得具有穿膜功能的重组KLF4蛋白,利用原核表达载体PKYB表达KLF4与PTD的融合蛋白PTD-KLF4,用Ni柱纯化融合蛋白并作Westernblotting鉴定。利用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记PTD-KLF4检测其穿越中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary,CHO)细胞细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)检测重组融合蛋白PTD-KLF4结合目的DNA的活性。结果表明:重组PTD-KLF4可以成功进入细胞、定位细胞核内,穿膜效率为(22.29±2.1)%。重组融合蛋白PTD-KLF4引起细胞形态变化,并具有与目标DNA序列特异结合的能力。重组PTD-KLF4的制备为外源蛋白诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,IPSCs)奠定基础。