布比卡因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和凋亡及miR-191/KLF6信号轴的影响

目的:探讨布比卡因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭、凋亡及微小RNA-191(miR-191)/Krüppel样因子6(KLF6)信号轴的影响。方法:设肝癌HepG2细胞组、顺铂组(3.0μg/ml)、布比卡因低剂量组(2.5 mg/ml)、布比卡因高剂量组(5.0 mg/ml)。培养72 h后,测定肝癌HepG2细胞存活率、穿膜数、凋亡率、miR-191、KLF6 mRNA和蛋白水平。结果:与肝癌HepG2细胞组比较,顺铂组、布比卡因低、高剂量组肝癌HepG2细胞存活率、穿膜数、miR-191水平降低,凋亡率、KLF6 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与顺铂组比较,布比卡因低、高剂量组肝癌HepG2细胞存活率、穿膜数、miR-191水平升高,凋亡率、KLF6 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);与布比卡因低剂量组比较,布比卡因高剂量组肝癌HepG2细胞存活率、穿膜数、miR-191水平降低,凋亡率、KLF6 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。结论:布比卡因能明显抑制肝癌HepG2细胞增殖和侵袭,促进其凋亡;其机制可能与布比卡因降低肝癌HepG2细胞中miR-191的表达进而促进KLF6的表达有关。

KLF6基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞凋亡的影响

目的:探讨过表达Kruppel样因子6(KLF6)基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞活力、凋亡、活性氧簇(ROS)水平及AKT信号通路的影响。方法:使用佛波酯(PMA)将人单核细胞株THP-1诱导分化为巨噬细胞,将巨噬细胞随机分为pcDNA3.1组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+pcDNA3.1组和ox-LDL+pcDNA3.1-KLF6组,其中pcDNA3.1转染参照Lipofectamine^TM 2000试剂盒说明。细胞处理24h,通过MTT实验、AnnexinV-FITC/PI双标细胞凋亡试剂盒和H2DCF-DA探针分别检测细胞活力、凋亡率和ROS水平的变化;Western blot检测Bcl-2、Bax和p-AKT的蛋白水平。结果:pcDNA3.1-KLF6转染巨噬细胞后,KLF6表达明显升高(P<0.05)。ox-LDL可明显抑制巨噬细胞的活力,诱导细胞凋亡,诱导细胞ROS的产生,上调Bax表达,下调Bcl-2和p-AKT的蛋白水平;而过表达KLF6可明显减弱ox-LDL对细胞活力、凋亡、ROS水平及Bcl-2、Bax和p-AKT蛋白水平的影响(P<0.05)。结论:KLF6基因可明显降低ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,机制可能与降低细胞ROS水平及激活AKT信号通路有关。

组织芯片检测舌鳞状细胞癌组织中KLF6、p21及c-Jun的表达

目的探讨舌癌和正常舌组织中核转录因子KLF6、p21及c-Jun蛋白的表达、其相关性及临床意义。方法应用高通量组织芯片技术结合免疫组织化学法,检测包含人类舌鳞状细胞癌组织、舌良性肿瘤组织、因良性病变而活检的正常舌组织的组织芯片中KLF6、p21及c-Jun的表达情况,结合临床病理资料进行统计分析。结果舌癌组织的KLF6表达明显低于正常舌组织和舌良性肿瘤组织,KLF6在低分化舌癌中的阳性表达率100.00%(4/4)明显高于高分化的66.67%(8/12)和中分化的50.00%(2/4);舌癌组织的p21表达明显低于正常舌组织和舌良性肿瘤组织,p21在淋巴结未转移组和临床Ⅰ、Ⅱ期组舌癌组织的表达(9/10)明显高于淋巴结转移组和临床Ⅲ、Ⅳ期组(5/10);舌癌组织的c-Jun蛋白表达显著高于正常舌组织和舌良性肿瘤组织(P<0.05),c-Jun在淋巴结未转移组和临床Ⅰ、Ⅱ期组舌癌组织的表达(8/10)明显低于淋巴结转移组和临床Ⅲ、Ⅳ组(10/10)。KLF6与c-Jun表达存在正相关(P<0.05);c-Jun与p21的表达也存在正相关(P<0.05);11例癌组织的KLF6与p21同为阳性表达,3例癌组织二者同为阴性表达,但KLF6与p21蛋白的表达相关不显著(P>0.05)。结论 KLF6、p21和c-Jun三者与舌癌的发生发展有关,联合检测3个指标,在病理学诊断上有重要的参考价值,可辅助舌癌的临床早期诊断、鉴别诊断及预后判断。

KLF6、Sp1蛋白在肝癌、肝硬化组织中的表达及意义

目的研究转录因子KLF6、Sp1在人肝细胞癌与肝硬化组织中的表达和意义。探讨KLF6、Sp1在肝癌、肝硬化中发生发展的作用机制及KLF6与Sp1之间的相关性。方法用免疫组化法对51例肝癌组织、35例癌旁肝硬化组织、10例良性病变而切除的正常肝组织转录因子KLF6、Sp1进行蛋白检测。结果KLF6、Sp1蛋白在肝癌组织表达率高于癌旁肝硬化组织,正常肝组织中全部呈阴性表达(P<0.001)。结论KLF6、Sp1蛋白过表达在肝细胞癌、肝硬化的发生发展中可能起重要作用,在肝硬化组织中KLF6与Sp1具有正相关性。

转染抑癌基因KLF6对前列腺癌PC-3细胞的作用研究

目的:研究抑癌基因KLF6对人前列腺癌细胞系PC-3细胞的生长增殖、细胞周期和对Bc l-2和Cyc lin D1蛋白表达的影响及其可能的作用机制。方法:利用RT-PCR法克隆目的基因KLF6,采用阳离子脂质体介导将含或不含KLF6的pEGFP-C1质粒转染入PC-3细胞,分别作为转染组和对照组。分别进行噻唑蓝(MTT)法观察PC-3细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期比例变化和凋亡率,免疫组化法观察PC-3细胞Bc l-2和Cyc lin D1的表达水平变化。结果:转染了抑癌基因KLF6的前列腺癌PC-3细胞生长抑制率为(30.0±5.4)%(对照组为0%,P<0.01);细胞周期比例表现为G2/M期减少为(11.2±0.9)%[对照组为(25.2±2.8)%,P<0.05],G0/G1期比例增加为(80.0±9.8)%[对照组为(58.6±7.3)%,P<0.05];细胞凋亡峰为(24.3±2.3)%[对照组为(5.2±0.7)%,P<0.01];Bc l-2的表达率为(18.7±3.2)%[对照组为(41.8±5.9)%,P<0.01];Cyc lin D1的表达率为(25.3±3.7)%[对照组为(38.5±4.6)%,P<0.05]。结论:抑癌基因KLF6的转染可以明显抑制前列腺癌PC-3细胞的生长增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bc l-2和Cyc lin D1的表达有关。

KLF6蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其意义

目的探讨Kruppel样因子6(KLF6)蛋白在肝细胞癌中的表达以及与肝细胞癌发生、发展之间的关系。方法采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测48例原发性肝癌组织、癌旁组织及24例正常肝组织中KLF6蛋白的表达。结果 KLF6蛋白在肝癌组织、癌旁组织的阳性表达率明显高于正常肝组织(P<0.05);KLF6蛋白表达与肝功能Child-Pugh分级正相关(P<0.05);男性患者肝癌组织KLF6蛋白的表达高于女性患者(P<0.05);KLF6蛋白的表达与年龄、甲胎蛋白、肿瘤直径、肝硬化、乙型肝炎病毒感染、远处转移和门静脉癌栓无明显相关(P>0.05)。结论 KLF6蛋白在肝癌组织和癌旁组织中高表达,KLF6基因与肝细胞癌的发生、发展有关。

鼻咽癌中KLF6基因突变的检测

背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)高发于中国南方和东南亚地区,其发病是一个多因素、多步骤的过程,与遗传因素、EB病毒感染和环境因子有关,但分子机理仍不清楚。KLF6基因编码一种广泛表达的核转录因子,在某些前列腺癌肿瘤中发现有高频的等位基因的丢失和基因突变。本研究通过对KLF6基因在NPC肿瘤中的突变检测,探讨KLF6基因与NPC发病的关系。方法:采用PCR-直接测序分析方法,在19例散发性NPC组织细胞和3个NPC细胞系(CNE1,CNE2,SUNE1)中对KLF6编码区和拼接位点进行检测。结果:在3例散发性NPC肿瘤组织DNA中检测到KLF6基因的3个不同位置的错义改变,分别为GAG→GTG(Glu75Val)、AGC→AGG(Ser136Arg)和AGA→AAA(Arg243Lys),在50个随机正常个体(100条染色体)和3个NPC细胞系中没有发现这3个位点的碱基变异。结论:这3个变异可能是KLF6基因的新的突变位点,在某些NPC发病中可能有作用。

KLF6、p21^(WAF1/CIP1)、CyclinD1在结直肠癌中的表达及意义

目的研究转录因子KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1在结直肠癌中的表达及意义。方法应用免疫组化Envision法对58例结直肠癌组织、20例结直肠黏膜慢性炎症组织中的KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白表达进行检测。结果结直肠癌组织KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白表达率均与结直肠黏膜慢性炎症组织比较有统计学差异(P<0.05);KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白在结直肠癌组织中的表达与其浸润深度及预后有关(P<0.05)。结论 KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1在结直肠癌的发生发展中可能起重要作用。

结直肠癌组织中KLF6蛋白的表达及其与血清癌胚抗原的相关性

目的探讨KLF6蛋白在结直肠癌组织中的表达及其与血清癌胚抗原的相关性。方法应用免疫组化SP法检测KLF6蛋白在结直肠癌、结直肠腺瘤及正常结直肠组织中的表达,分析KLF6蛋白与结直肠癌各种临床病理参数的关系。用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测结直肠癌患者血清CEA水平。结果 KLF6蛋白从正常结直肠组织、结直肠腺瘤到结直肠癌组织中表达逐渐下调(85.7%、76.5%、43.6%),三者比较差异有统计学意义(2=25.20,P<0.01);KLF6蛋白表达水平与组织学类型无关(2=0.13,P>0.05),与分化程度(2=4.04)、淋巴结转移(2=6.79)、TNM分期(2=6.16)有关(均P<0.05)。KL6表达阴、阳性患者血清CEA水平差异无统计意义(P>0.05)。结论 KLF6表达下降,可能参与了结直肠癌的发生发展;KLF6基因可能是结直肠癌的一个重要抑癌基因并可能参与结直肠癌细胞凋亡的调节。KLF6可作为结直肠癌恶性程度的一个监测指标,长期的随访有助于评价手术疗效、是否转移和监测复发。

核因子KLF6与PPARγ在大鼠非酒精性脂肪性肝炎中的动态变化

目的:研究核转录因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome proliferation activated receptor gamma,PPARγ)和核因子KLF6(Kruppule like factor,KLF6)在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝纤维化形成过程中的作用及相互关系。方法:高脂饮食建立NASH肝纤维化大鼠模型,HE和Massson染色观察肝组织病理学变化,检测血清AST、ALT、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅵ型胶原(CⅥ)的动态变化,RT-PCR检测核转录因子KLF6、PPARγ和α-SMA mRNA的动态表达变化。结果:(1)F12～24周肝脏炎症活动度计分较对照组明显增高(P<0.05～0.01)。(2)F16、24周组肝纤维化评分与对照组比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05～0.01)。(3)高脂喂养12周后,血清AST、ALT水平逐步增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05～0.01)。随着高脂喂养时间的延长,血清肝纤维化指标HA、LN和CⅣ水平呈逐渐增高趋势,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05～0.01)。(4)RT-PCR显示模型组PPARγmRNA于高脂喂养8周单纯性脂肪肝时即明显上调(0.84±0.07 vs 0.54±0.12,P<0.05),12周达高峰(1.16±0.14),16周脂肪性肝炎明显时表达开始下调(0.73±0.05),24周下调更为明显(0.34±0.15),与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);而KLF6、α-SMA mRNA于高脂喂养12周开始增高,24周达高峰,与对照组比较差异显著(P<0.01)。(5)相关分析发现,KLF6与α-SMA表达及炎症、肝纤维化分级评分之间呈显著正相关(r=0.859、0.956、0.706,P<0.01),而与PPARγ呈负相关(r=-0.536,P<0.05)。结论:单纯性脂肪肝时,PPARγ的高表达可能是机体的一种适应性反应,从而抑制促炎、促纤维生成因子KLF6的释放,当损伤因素持续存在,损伤与抗损伤动态平衡失调后PPARγ合成减弱,而KLF6则明显增加,激活HSC,共同参与NASH肝纤维化形成过程。

抑癌基因KLF6在肝癌HepG2细胞修复DNA损伤过程中的作用研究

目的:研究抑癌基因KLF6对肝癌HepG2细胞修复DNA损伤能力的影响。方法:RT-PCR及Western blotting技术测定HepG2细胞在5mg/L顺铂作用12、24、36h后KLF6 mRNA及其蛋白水平变化。采用宿主细胞再活化反应(HCR)检测KLF6稳定表达HepG2细胞修复DNA损伤的能力。结果:在5mg/L顺铂作用下,随作用时间延长,KLF6 mRNA及其蛋白水平增高,但作用36h,KLF6蛋白水平下降。KLF6稳定表达HepG2细胞修复被顺铂损伤质粒DNA的能力明显高于对照组。结论:DNA损伤能诱导肝癌HepG2细胞KLF6基因表达,KLF6基因在细胞DNA损伤修复过程中发挥一定作用。

KLF6、KLF4及APC基因蛋白在结直肠癌中的表达和意义

目的研究转录因子KLF6、KLF4及APC基因在结直肠癌中的表达和意义。探讨它们在结直肠癌发生发展中的作用机制。方法应用免疫组化Envision法对58例结直肠癌组织、20例结直肠黏膜慢性炎症组织中的KLF6、KLF4及APC基因进行蛋白检测。结果KLF6、KLF4及APC蛋白在结直肠癌组织表达率分别为77.59%(45/58)、51.79%(30/58)、65.50%(38/58),低于在结直肠黏膜慢性炎症组织中的100%(20/20)、85%(17/20)、90%(18/20),差异有统计学意义(P<0.05);KLF6、KLF4及APC蛋白在结直肠癌组织中的表达与其浸润深度及预后有关(P<0.05),与淋巴结转移及Dukes分期无关(P>0.05)。结论KLF6、KLF4及APC基因可能在结直肠癌的发生发展中起重要作用。

口腔鳞状细胞癌中KLF6、p21和c-Jun的表达

为探讨口腔癌组织中KLF6、p21和c-Jun的表达及意义,采用免疫组化技术检测198例口腔癌、49例口腔良性肿瘤中KLF6、p21和c-Jun的表达,以56例口腔正常组织作对照。结果显示:正常对照组、良性及恶性肿瘤KLF6的表达分别为91.07%(51/56)、83.67%(41/49)、62.12%(123/198),三组间阳性表达有显著性差异(P<0.05);KLF6在肿瘤直径>2 cm组和中、低分化组中的阳性表达显著低于肿瘤直径≤2 cm组及高分化组(P<0.01);p21在恶性肿瘤中阳性表达81.82%(162/198)显著低于正常组的85.71%(48/56)(P<0.05);c-Jun在正常对照组、良性肿瘤及恶性肿瘤的表达分别为8.93%(5/56)、10.20%(5/49)、46.97%(93/198),三组间阳性表达有显著性差异(P<0.05)。恶性肿瘤中KLF6基因核表达缺失或减弱与p21表达下调显著相关(P<0.01),恶性肿瘤中KLF6浆表达增加与p21表达下调显著相关(P<0.01)。恶性肿瘤中KLF6核表达缺失或减弱与c-Jun阳性表达增加显著相关(P<0.01)。可见,KLF6、p21和c-Jun三者表达异常与口腔癌的发生发展密切相关,其分子机制值得深入研究。

野生型KLF6对前列腺癌LNCaP细胞的作用

目的:探讨野生型抑癌基因KLF6对前列腺癌LN-CaP细胞的生长增殖、细胞周期和侵袭转移能力的影响及其可能的作用机制.方法:利用RT-PCR法克隆目的基因KLF6,并将含KLF6的pEGFP-C1质粒转染入LNCaP细胞.分为转染组和对照组分别进行MTT法观察LNCaP细胞的生长抑制率,流式细胞仪观察细胞周期比例变化和凋亡率,细胞爬片划痕法观察LNCaP细胞的侵袭转移能力变化.结果:转染了野生型抑癌基因KLF6的前列腺癌LNCaP细胞生长抑制率为(31.9±4.7)%,对照组为0%,差异有统计学意义(P<0.01),细胞周期比例表现为G2/M期减少,G0/G1期比例增加为(75.0±8.8)%,对照组为(55.9±7.1)%,差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡峰为(29.3±3.7)%,对照组为(8.6±0.9)%,差异有统计学意义(P<0.01);每毫米划痕区内迁移入的细胞数为102.8±15.4,对照组为(192.7±25.2),差异有统计学意义(P<0.05).结论:野生型抑癌基因KLF6的转染可以明显抑制前列腺癌LNCaP细胞的生长增殖,并诱导其调亡,使其侵袭转移能力下降,其机制可能与野生型抑癌基因KLF6部分地逆转LNCaP细胞的恶性表型有关.

KLF6蛋白在大肠癌组织中的表达及意义

目的:探讨KLF6蛋白在大肠癌组织中的表达及其临床病理意义。方法:采用免疫组织化学法分别检测68例大肠癌及40例正常大肠黏膜组织中KLF6蛋白的表达情况,并分析其表达水平与其临床病理因素的关系。结果:KLF6蛋白的阳性表达率在大肠癌组织中为44.1%,明显低于正常大肠黏膜组织的82.5%(P<0.05),KLF6蛋白在大肠癌组织中的表达与肿瘤组织的分化程度、淋巴结转移、浸润深度及临床Dukes分期密切相关(P<0.05)。结论:KLF6蛋白的低表达可能与大肠癌的发生、发展、转移及预后有关,在某些程度上可以作为判断大肠癌预后的重要指标之一。

转录因子KLF6通过下调Basigin-2的表达抑制肝癌细胞侵袭转移

目的:检测肝癌细胞中转录因子KLF6的表达水平,确定KLF6对肿瘤转移相关基因Basigin-2的转录调控机制,并探讨其对Basigin-2介导的肝癌细胞侵袭转移的调控作用。方法:培养肝癌细胞及正常肝细胞,提取总RNA,real-time RT-PCR方法确定KLF6和Basigin-2的表达水平。荧光素酶报告基因系统检测KLF6对Basigin-2的转录调控作用。过表达或干涉KLF6基因,观察Basigin-2表达水平的变化,并用Transwell方法检测KLF6对肝癌细胞体外侵袭力的影响。结果:相对于正常肝细胞,肝癌细胞中Basigin-2在mRNA水平表达上调,而KLF6表达水平下调。KLF6可以与Basigin-2启动子区结合,抑制Basigin-2的转录活性。肝癌细胞中过表达KLF6可以在mRNA水平上抑制Basigin-2的转录表达,而干涉KLF6则表现为Basigin-2的表达上调。过表达KLF6可以抑制肝癌细胞的体外侵袭力,相反干涉KLF6促进了肝癌细胞的侵袭转移。结论:转录因子KLF6抑制Basigin-2的转录激活,KLF6可以抑制Basigin-2介导的肝癌细胞的侵袭转移。

胃癌中抑癌基因p16与KLF6蛋白的表达及相关性研究

目的:探讨胃癌组织中抑癌基因p16与KLF6在胃癌发生、发展中的作用。方法:应用免疫组化SP技术,检测73例胃腺癌组织中p16与KLF6的表达,分析其与临床病理特征的关系和两基因之间的相关性。结果:胃癌组织中p16和KLF6均呈低表达,在低分化胃癌中显著低于高-中分化胃癌,在淋巴结转移较多时其表达明显下降,与临床分期密切相关。两基因之间表达呈正相关(rs=0.326)。结论:p16和KLF6对胃癌的发生、发展、侵袭和转移起重要作用,且两者之间存在相关。联合检测两者的表达水平对胃癌的诊断和预后有一定的参考价值。

胶质瘤中KLF6基因突变的检测

目的 通过对 (Kruppcl- like factor 6 ,KL F6 )基因编码区全部外显子在胶质瘤组织中的突变检测 ,探讨 KL F6基因与胶质瘤发生发展的关系。方法 联合应用聚合酶链反应 (Polym erase chain reaction,PCR)和变性高效液相色谱法 (Denatured high pressure liquid chrom atograghy,DHPL C)技术对 2 2例胶质瘤患者进行 KL F6基因编码区全部外显子序列突变筛查。结果 发现在 2 2例胶质瘤组织中有 2例 KL F6基因的第 2位外显子的 PCR产物的 DHPL C峰型可见变异 ,其 PCR产物经序列分析确定为第 76 4碱基 C→ T单碱基突变 (AAC→ AAT) ,但未导致编码氨基酸 N(天门冬酰胺 )的改变 ,为一新的单核苷酸多态 (Single nucleotide polymorphism ,SNP)。结论 KL F6基因的突变在本组胶质瘤病例发生发展过程中未起重要作用。

抑癌基因KLF6在肿瘤中的研究进展

肿瘤的发生、发展是多因素参与的多步骤多阶段过程,随着科学技术的不断发展,人们对肿瘤的认识不断加深。KLF6是近年来新发现的抑癌基因,其突变、缺失和表达减少等可见于多种肿瘤,与肿瘤的发生、发展密切相关,本文就KLF6及其在肿瘤中的研究进展进行综述。

非小细胞肺癌中KLF6-SV1的表达及临床病理学意义

目的观察抑癌基因KLF6的剪切变异体KLF6-SV1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达特点,探讨其与临床病理学参数的关系。方法应用免疫组化检测42例NSCLC和40例良性肺疾病(肺的炎性肌纤维母细胞瘤、肺脓肿、肺结核、肺的硬化性血管瘤等)中KLF6-SV1蛋白的表达水平,原位杂交检测42例NSCLC和40例良性肺疾病中KLF6-SV1基因mRNA的表达。结果 KLF6-SV1在NSCLC中的蛋白阳性率为71.4%(30/42),表达水平均高于良性肺疾病(P<0.05)。KLF6-SV1基因mRNA的阳性率为69.0%(29/42),表达水平高于良性肺疾病(P<0.05)。KLF6-SV1的蛋白表达水平与其mRNA表达水平之间具有较好的一致性。KLF6-SV1的表达与有无淋巴结转移及肿瘤的分化程度有关,组间差异具有统计学意义(P<0.05),与病理分型、组织大小和临床分期无关,组间差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论 KLF6-SV1的过表达可能与NSCLC的发生、发展及早期淋巴结转移密切相关,有望成为今后诊断的参考指标之一,并有可能成为肿瘤基因治疗的新靶点之一。