KLK7小分子抑制剂对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭与转移的影响

为了探讨KLK7小分子抑制剂G284-1264对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭和转移的影响,采用MTT法检测G284-1264处理后细胞的存活率;钙黄绿素-AM/PI活细胞/死细胞双染和流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期分布,同时用细胞划痕实验检测G284-1264对SKOV3细胞侵袭与转移的影响。结果显示:相同时间作用下,随着G284-1264浓度增大,SKOV3细胞存活率逐渐降低,24 h、48 h和72 h的IC50分别为110.0、48.62和39.64μmol/L,相比5-FU,G284-1264对SKOV3细胞表现出更强的抗增殖能力;钙黄绿素-AM/PI对细胞进行双染后,G284-1264作用组细胞活力明显降低;流式细胞术分析发现,G284-1264作用组G1期的细胞数目增加,G2期明显降低,且凋亡率高于空白组和阳性对照组;划痕实验表明G284-1264处理细胞36 h后,细胞迁移率降低16.49%。以上结果表明KLK7小分子抑制剂G284-1264能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭与转移。

激肽释放酶KLK7小分子抑制剂的筛选及活性初步研究

根据KLK7的晶体结构,采用美国ChemDiv化合物数据库进行计算机模拟筛选和人工挑选,并对获得的化合物进行KLK7活性抑制实验。结果表明,有4个化合物对KLK7活性具有较好的抑制作用,其IC50分别为37.166μM,25.32μM,28.955μM,36.078μM,可用于进一步的研究。

STARD7蛋白新型小分子抑制剂Lasiodin激活NRF2/EGR1通路诱导三阴乳腺癌铁死亡

目的探讨StAR相关脂质转移结构域包含7(STARD7)在三阴乳腺癌(TNBC)中的表达情况及其与预后的相关性。高通量筛选STARD7的小分子抑制剂,研究其小分子抑制剂对TNBC的影响及潜在分子机制。方法生物信息学分析STARD7在各亚型乳腺癌中的表达情况以及与预后的相关性。Westernblot和免疫组化检测细胞系以及临床TNBC样本中STARD7的表达情况。以STARD7为靶点,通过分子对接、体外蛋白纯化和体外分子互作实验,筛选并鉴定STARD7的小分子抑制剂。CCK8测定对照组(DMSO组)及1、2、5、10、20μmol/L浓度Lasiodin处理24 h后的TNBC细胞的存活率,确定最佳药物作用浓度。台盼蓝和YO-PRO-1染色测定各组细胞死亡率,Westernblot测定各组凋亡、铁死亡相关蛋白表达;RT-qPCR及Western blot分别测定NRF2、HO-1、KEAP1、EGR1的mRNA和蛋白表达。构建TNBC移植瘤模型并随机分为对照组、紫杉醇组(10 mg/kg)和Lasiodin组(10 mg/kg),分别处理后测定肿瘤体积、裸鼠体重,HE染色评价生物安全性。结果生物信息学分析及体外实验表明STARD7在TNBC组织及细胞中高表达,且与患者预后负相关(P<0.05);高通量筛选并鉴定出Lasiodin是STARD7的小分子抑制剂;Lasiodin对STARD7的抑制可能通过调控下游NRF2/EGR1通路相关蛋白的表达促使TNBC细胞发生铁死亡,同时伴有凋亡和坏死。体内实验证明Lasiodin能够抑制肿瘤生长(P<0.05),且未观察到明显的不良反应。结论STARD7可能在TNBC的进展中发挥重要的调控作用,Lasiodin为其小分子抑制剂,提示STARD7和Lasiodin分别可能成为治疗TNBC的潜在靶点和新型药物。

乙酰胆碱酯酶AChE与1,7-二氮杂咔唑抑制剂的作用机理的分子动力学模拟

通过分子对接、分子动力学(MD)模拟以及成键自由能分析方法,从原子水平上模拟研究了3种1,7-二氮杂咔唑衍生物(分别记为M1、M2和M3)与ACh E的结合模式及相互作用机理,分析和讨论了研究体系的静电相互作用和范德华相互作用(vd W)。用MM-PBSA方法计算的3种抑制剂与ACh E之间的结合自由能与抑制剂的实验生物活性数据(IC50值)相对应。分析结果表明,残基S286与抑制剂之间形成的氢键作用有利于抑制剂与ACh E之间的结合。范德华相互作用,尤其是抑制剂与关键残基W279和Y334的作用,对抑制剂与ACh E之间的结合自由能有较大的贡献,在区分抑制剂M1(或M2)和M3的生物活性上发挥着重要的作用。

基于结构的新型CDK7抑制剂的设计、合成及其抗肿瘤活性

根据细胞周期依赖性激酶7(CDK7)的蛋白结构,利用Discovery Studio2.1程序包中的LigandFit模块建立了CDK7抑制剂的分子对接模型,采用受试者工作特征曲线(ROC)方法选择LigScore2为最佳打分函数(ROC曲线下的面积为0.95),并验证了该模型的准确性.利用该模型对设计的化合物与CDK7蛋白进行对接分析,得到了2个打分最高的化合物16、17,进而通过13步的合成路线,以中等至高的收率得到目标化合物,并测定其体外抗肿瘤活性.结果表明,所合成的化合物对急性前髓细胞性白血病细胞(HL60)、鼻咽癌细胞(KB)、肝肿瘤细胞(SMMC-7721)、结肠腺癌细胞(HCT-116)、肺癌细胞(A549)细胞株均有抑制作用(IC50值为0.84-19.70μmol·L-1),其中化合物16对HL60细胞株的IC50值最低,为0.84μmol·L-1.

噻吩并嘧啶酮类PDE7抑制剂的特征结构及作用机制研究

基于定量构效关系和分子对接研究理论,以34个噻吩并嘧啶酮类磷酸二酯酶7(PDE7)抑制剂为研究对象,采用比较分子相似性指数法(Co MSIA)和GOLD分子对接法研究其特征结构信息以及与靶标的作用机制。结果表明,所建立Co MSIA模型的预测能力较强(Q2=0.53,R2ncv=0.96,R2pre=0.89),结合分子对接结果还发现,抑制剂与PDE7间的作用力以氢键作用力和π-π堆积作用为主;大体积的亲水性氢键供体R1取代基、亲水性R2取代基有利于化合物活性的增强,且哌啶环上有益于结合氢键的受体基团。所得模型和信息为后续新型PDE7抑制剂的设计开发提供理论指导。

基于中药数据库的α7型尼古丁乙酰胆碱受体抑制剂的虚拟筛选

研究了DMXB-A与α7型尼古丁乙酰胆碱受体(α7 nAchR,这里指α7二聚体)的结合模型,并以DMXBA为模板化合物,采用相似性搜索从中药数据库中筛选出19个中药分子,运用分子对接技术,研究了19个中药分子与α7型尼古丁乙酰胆碱受体的结合模式,最终筛选出一个最佳的分子Mol7235,并进一步研究了该分子与α7二聚体的活性口袋的非键作用和分子表面匹配情况.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合HPV16E7-DNA疫苗治疗宫颈癌的效果及机制研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)伏立诺他(SAHA)联合人乳头瘤病毒16 E7-DNA(HPV16E7-DNA)疫苗治疗宫颈癌的效果及免疫机制。方法建立TC-1宫颈癌小鼠模型,负瘤第5天,采用随机数字表法将小鼠分为HPV16E7-DNA组、SAHA组、SAHA联合HPV16E7-DNA组、对照组,用药方案:HPV16E7-DNA组给予疫苗5μg/kg,SAHA组给予SAHA 20 mg/kg,SAHA联合HPV16E7-DNA组给予疫苗5μg/kg+SAHA 20 mg/kg,对照组给予100μL磷酸盐溶液(PBS)。每3天1次,共4次。绘制肿瘤生长曲线;流式细胞仪检测各组小鼠外周血CD8^+T细胞的数量;体外实验检测不同剂量SAHA(25.0、12.5 nmol/L)对TC-1细胞MHCⅠ类分子H-2K^b表达的影响。结果与其他三组比较,SAHA联合HPV16E7-DNA组的肿瘤生长速度明显减慢,小鼠外周血HPV16E7特异性CD8^+T细胞的数量增高(P<0.05)。体外实验结果提示,与对照组比较,SAHA组细胞MHCⅠ类分子H-2K^b的表达明显增高(P<0.05),低剂量与高剂量SAHA组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HDACI联合HPV16E7-DNA疫苗可能通过上调肿瘤细胞MHCⅠ类分子的表达,激活机体CD8^+T细胞免疫反应,从而产生明显的抗肿瘤效应,有望用于宫颈癌的免疫治疗。

噻吩并嘧啶酮类PDE7/PDE4双重抑制剂的特征结构

磷酸二酯酶7和4(phosphodiesterase 7 and 4,PDE7 and PDE4)作为特异性水解第二信使3',5'-环腺苷酸的蛋白酶,是治疗炎症等相关疾病的重要靶点。本文以37个噻吩并嘧啶酮类PDE7和PDE4双重抑制剂为研究对象,采用比较分子相似性指数分析(Co MSIA),研究其影响化合物抑制活性的特征结构信息。结果表明,这两类抑制剂的Co MSIA的预测能力较强(Rpre2≥0.80)。其影响分子生物活性的共同特征结构主要是:(1)噻吩环上的R_2取代基为疏水场的敏感区域;(2)嘧啶酮环和R_3取代基的链接基益于采用含氢键供体的亲水性基团;(3)噻吩环所在区域益于引入包含氢键供体的基团。研究还发现,PDE7抑制剂的R_1和R_2取代基,分别适宜结合小体积的亲水性基团和大体积的基团。PDE4抑制剂的嘧啶酮环和R3取代基的链接基益于结合正电基团。本研究所得的模型和信息,可为后续新型抑制剂的设计开发提供理论指导。

基于分子对接方法进行金银花、连翘抗流感病毒H7N9的研究

目的从金银花-连翘药对中寻找能够应对流感病毒H7N9的潜在抑制剂。方法以H7N9神经氨酸酶N9及其两种突变型N9-R294K和N9-R292K为受体,以金银花-连翘中24个化合物为配体,应用分子对接方法研究配体与受体之间的相互作用关系。结果研究发现金银花-连翘药对中19个成分与H7N9神经氨酸酶发生作用。其中M1、M4、M5、M7、M8、M10、M12、M14、M16、M17、M19、M22、M23等小分子是金银花-连翘药对作用H7N9神经氨酸酶的主要化合物。分子对接结果显示M4和M22与N9、N9-R294K、N9-R292K的对接分值分别为9.86、11.42、8.02、8.69、11.15、7.24;M5、M10与N9-R294K对接得分为10.36、8.36,均显著高于对照组奥司他韦羧酸盐。结论金银花-连翘药对能够通过分子间的协同效应有效防治H7N9流感病毒。M4(连翘酯苷A)和M22(亚油酸乙酯)可以作为流感病毒H7N9(包括两种突变型)的潜在抑制剂进行进一步研究开发。

4-苯氨基喹啉化合物的合成及其与EGFR^(T790M)分子对接研究

以6-氟(或7-氟)-4-氯-喹啉为原料与对二苯胺经亲核取代反应,得到4-(4'-氨基苯氨基)喹啉化合物,再与不同的酰化试剂发生酰化反应,得到12个未见文献报道的化合物,结构经过ESI-MS确认。用Molegro Virtual Docker软件完成与EGFR^(T790M)的分子对接,并用Discovery Studio 2016 Client软件分析化合物与EGFR^(T790M)的作用模式。分子对接研究表明6-氟-4-{4'-[(4″-甲氧基)-苯酰氨基]-苯氨基}-喹啉1位的氮和4″位甲氧基上的氧分别与ARG A:776和HIS A:850残基形成两个氢键。为开发EGFR^(T790M)抑制剂提供基础。

尼美舒利对人喉鳞癌Hep-2细胞祼鼠移植瘤CD44和MMP-7表达的影响

目的探讨尼美舒利对喉鳞状细胞癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用及机制。方法建立人喉鳞癌Hep-2细胞株裸鼠移植瘤模型,应用尼美舒利处理裸鼠,观察肿瘤生长情况并绘制生长曲线,免疫组织化学技术检测移植瘤组织中COX-2、CD44和MMP-7蛋白表达,RT-PCR技术检测移植瘤组织中COX-2、CD44和MMP-7 mRNA表达情况。结果与对照组相比,治疗组肿瘤体积增长较对照组缓慢,体积抑瘤率为63.36%,重量抑瘤率达51.81%,肿瘤体积和重量均明显低于对照组(P均<0.05)。实验组和对照组治疗前后裸鼠体重增长值差异无统计学意义(P>0.05)。实验组COX-2、CD44和MMP-7蛋白及mRNA表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论尼美舒利可有效抑制人喉鳞癌细胞系Hep-2裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制COX-2、CD44及MMP-7表达有关。

去泛素化酶USP7在细胞中的功能作用及其研究进展

Ubiquitin-specific protease7(USP7)属于半胱氨酸蛋白酶,是去泛素化酶家族Deubiquitinases(DUBs)的重要成员之一。近年来研究表明USP7能调节细胞内众多蛋白底物的活性和功能,包括抑瘤蛋白、DNA修复蛋白、免疫应答蛋白、病毒蛋白、表观遗传调节子等,在疾病的发生发展中起着重要的作用。这篇文章综述了USP7在细胞中的功能作用以及在肿瘤和病毒性疾病中的最新研究进展。

三阴性乳腺癌高表达CDK7与不良预后有关,可作为治疗靶点

三阴性乳腺癌（TNBC）患者预后往往较差,治疗后复发率较高,但是对于该疾病尚缺乏分子标志和有效的靶向治疗。Cancer Res近期发表了一篇文章,研究细胞周期相关酶CDK7作为三阴性乳腺癌潜在治疗靶点的可行性。作者利用公共可用的三阴性乳腺癌数据（n=383）以及METABRIC TNBC数据集（n=217）进行分析,发现CDK7 mRNA水平与患者预后有关。

乙酰胆碱酯酶抑制剂3,6-二芳基-7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮类化合物的设计、合成与生物活性

目的初步探讨乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮类化合物的合成及构效关系。方法利用分子对接技术设计一些新的7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮类化合物,采用化学方法合成这些目标化合物,采用Ellman法对目标化合物进行体外乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选。首先由芳基乙烯在温和条件下的氧化反应得到2-芳基-2-氧代乙酸,2-芳基-2-氧代乙酸与硫代氨基脲在碱性水溶液中缩合得到3,4-二氢-6-芳基-3-硫代-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮衍生物,3,4-二氢-6-芳基-3-硫代-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮衍生物与取代的α-氯代苯乙酮在乙酸中反应得到4个目标化合物;6-芳基-3-(羟基芳基)-7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮类化合物进一步经Williamson反应得到7个6-芳基-3-(烷氧基芳基)-7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮类化合物。结果合成了11个未见文献报道的新化合物,其结构均经质谱、红外光谱和核磁共振氢谱确证。体外乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选表明,所有目标化合物均具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中5个化合物在10μmo.lL-1时的抑制活性超过了40%。结论综合分子对接和体外AChE抑制活性的测试结果发现,3,6-二芳基-7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮类化合物可与AChE的CAS区、PAS区和阴离子亚位点发生相互作用,C-6位苯环对位的卤原子可增强化合物对AChE的抑制活性。

从进化角度分析皮肤脱屑相关Kallikrein7蛋白家族潜在抑制剂结合点

KLK7是丝氨酸蛋白酶家族的一员,能够水解桥粒蛋白从而引起角质层细胞间粘合力下降,是治疗皮肤脱屑的靶标。为了研究KLK7潜在特异性抑制点,本研究利用NCBI的blastp寻找人KLK蛋白同源序列,然后对获得的同源序列在Smart中验证是否有丝氨酸胰蛋白酶保守功能域。并基于获得的59个人KLK7蛋白同源序列进行进化踪迹分析,对于获得的65个KLK7蛋白全家族保守残基进一步用序列对比和结构对比进化分析进行验证。然后用Metapocket预测人KLK7蛋白质潜在配基结合点,结合之前获得的61个KLK7蛋白全家族保守残基进行潜在的抑制剂结合点分析,Asp104和Arg123是潜在的特异抑制剂结合点。其中Asp204和Ile30之间的盐桥对蛋白质结构起到稳定作用,Arg123是KLK7的外结合点,为寻找KLK7特异性抑制剂奠定了理论基础。

长链非编码RNASNHG7在缺血和再灌注损伤中的分子机制研究

研究长链非编码RNASNHG7在缺血和再灌注损伤中的分子机制。方法 首先验证长链非编码RNASNHG7在H/R AC16细胞中的表达,分为空白组与H/R组;检测si-NC、H/R组+si-NC、H/R组+si-SNHG7三组中的CCK8水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测空白组、H/R组、H/R组+si-NC、H/R组+si-SNHG7中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;检测si-NC、H/R组+si-NC、H/R组+si-SNHG7三组中的IL-1β、IL-18水平;最后加入Notch1抑制剂,检测si-NC、H/R组+si-NC、H/R组+si-SNHG7、Si-SNHG7+Nothc1阻滞剂的Bcl-2、Bax、Caspase 1、NLRP3、ASC、GSDMD、Notch1、Dll4。结果 H/R组SNHG7水平高于空白组,H/R组+si-NC组CCK8水平高于空白组,H/R组+si-SNHG7组CCK8水平低于空白组(P<0.05);si-NC组SOD呈高表达,H/R组+si-NC组MDA、LDH、IL-1β、IL-18呈高表达(P<0.05);不同组别WB检测中各蛋白差异明显(P<0.05)。结论 长链非编码RNASNHG7通过竞争性抑制Nothc1表达阻断其对靶基因的负向调控,阻碍I/R导致的心肌细胞凋亡,发挥保护作用,同时与急性心肌梗塞存在密切关系。

儿童急性肾损伤相关新型生物标志物的研究进展

急性肾损伤(AKI)是儿童住院患者常见的急重症,其发病率和死亡率都很高。AKI病程进展迅速,早期诊断和风险预测能够辅助临床医生及时开展治疗,有效改善患儿预后。传统的生物标记物血清肌酐(SCr)与肾功能相关,但不能及时反映肾脏的损伤情况。目前,许多新的、有潜力的生物标志物,如中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP7)以及金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)等被广泛研究。儿童有其独特的生长发育规律,同一生物标志物在不同年龄段的基线水平不同。文章综述了这些新的AKI生物标志物的病理生理学基础,在AKI患儿早期诊断、风险分层、预后评估中的应用及其与成人患者的差异。

3-芳基-6-(4-氟苄基)-7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮衍生物的合成及乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

目的进一步探究含有氟原子的7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮类化合物作为乙酰胆碱酯酶抑制剂的构效关系。方法利用分子对接和分子模拟技术,设计合成了一系列新的3-芳基-6-(4-氟苄基)-7H-噻唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-7-酮衍生物,并用质谱、红外光谱、质子核磁共振和元素分析对其进行结构表征。以石杉碱甲为阳性对照,采用Ellman比色法测试了目标化合物的乙酰胆碱酯酶抑制活性。结果实验结果表明所有目标化合物在10μmol·L^(-1)时均表现出40%以上的抑制作用,一些目标化合物对乙酰胆碱酯酶表现出显著的抑制作用。结论目标化合物母体骨架中C6位苯环上的氟原子对目标化合物的乙酰胆碱酯酶抑制活性发挥着重要作用。

脓毒症急性肾损伤早期生物标志物的新进展

脓毒症（sepsis）是一种由感染引起的全身炎症反应综合征（SIRS）,可引起多器官的损伤,严重时可引起多脏器功能障碍综合征（MODS）。脓毒症相关器官功能障碍是重症监护室（ICU）中最常见的死因。其中死亡风险最高的是急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）。