食管癌患者SOX7、KLK13、FHIT的表达及对术后复发转移的预测价值

目的:探讨SRY盒相关基因7(SOX7)、激肽释放酶相关肽酶13(KLK13)、脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在食管癌患者癌组织中的表达,并分析其与术后复发转移的关联性。方法:选取2022年1月—2023年1月某院行胸腔镜食管癌切除术治疗的86例食管癌患者为研究对象,术后随访1年(失访5例),根据随访结局将患者分为复发转移组(31例)和未复发转移组(50例)。比较不同组织(癌组织vs癌旁组织)、不同结局及不同病理学参数的食管癌患者癌组织中SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达水平。绘制ROC曲线,分析癌组织各指标联合检测对食管癌患者术后复发转移的预测价值。结果:食管癌患者癌组织SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);复发转移组患者癌组织SOX7、KLK13、FHIT mRNA低于未复发转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度为中高分化的食管癌患者癌组织中SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达水平高于分化程度为低分化的食管癌患者,肿瘤分期为Ⅲ期、伴有淋巴结转移的食管癌患者癌组织中SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达水平低于肿瘤分期为Ⅰ~Ⅱ期、不伴有淋巴结转移的食管癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,癌组织SOX7、KLK13、FHIT mRNA预测食管癌患者术后复发转移的AUC分别为0.793、0.829、0.776,三者联合预测食管癌患者术后复发转移的AUC为0.909。结论:食管癌患者癌组织中SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达降低,其表达水平受肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移及术后复发转移影响,联合预测食管癌术后复发转移结局的效能较高,可作为拟定诊疗计划的参考。

清渣汤对玫瑰痤疮模型小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5表达的影响

目的:观察清渣汤口服对玫瑰痤疮模型小鼠皮损组织血管内皮生长因子(VEGF)、Toll样受体2(TLR2)、激肽释放酶5(KLK5)表达的影响。方法:7周龄健康雄性小鼠36只,用随机数字表法将其分为6组:清渣汤高剂组、中剂组、低剂组、阳性对照组(多西环素片)、模型对照组、正常对照组,每组6只。除正常组外,其余各组均进行玫瑰痤疮造模。造模24 h后给药,模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃,清渣汤3剂组分别给予25 mg/kg(低剂量组)、50 mg/kg(中剂量组)和100 mg/kg(高剂量组)清渣汤灌胃,阳性对照组给予30 mg/kg盐酸多西环素溶液灌胃,每日1次,共给药4周。免疫组化法检测皮损部位皮肤组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达水平。结果:模型组小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达较正常组明显增强(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和清渣汤高、中、低剂量组小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达减弱(P<0.05)。结论:清渣汤能够抑制玫瑰痤疮小鼠模型皮损部VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达水平,从而减轻炎症反应。

KLK11对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探究激肽释放酶相关肽11(KLK11)对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR及Western blot技术检测卵巢癌细胞中KLK11基因的表达水平。Western blot评估siRNA特异性抑制KLK11在A2780和HO8910细胞株中表达的抑制效率。CCK-8、划痕实验及Transwell实验检测KLK11对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测卵巢癌细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)的表达水平。结果:与人正常卵巢上皮细胞相比,KLK11在卵巢癌细胞株中表达上调(P<0.01);与Control组相比,si-KLK11组卵巢癌细胞中KLK11蛋白表达降低(P<0.01),卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力被抑制(P<0.01);同时,si-KLK11组A2780和HO8910细胞中Vimentin、Snail蛋白表达水平均下调(P<0.01),而E-cadherin蛋白表达水平上调(P<0.01)。结论:KLK11在卵巢癌细胞中表达上调,沉默KLK11基因可以抑制卵巢癌的增殖、迁移和侵袭能力,KLK11可能通过调控EMT相关分子促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

胃癌中基质金属蛋白酶、人组织激肽释放酶7和E-钙粘蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨血清中MMPS、KLK7、E-cad在胃癌患者的表达与临床病理参数间的关系,并探讨二者相关性。方法:胃癌患者50例以及50例胃良性疾患者和50例健康体检者,分别命名为实验组、胃部良性疾患组和健康体检组。实验组中有24例符合手术条件同意行胃切除术的患者,细分为术前组和术后组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胃癌患者术前术后(1月)、胃良性疾患者组、健康体检组血清中MMP-2、MMP-9、KLK7及E-cad水平,分析与各临床病理指标的相关性。结果:实验组血清KLK7及E-cad水平高于胃良性疾患组及正常体检组,差异均显著(P<0.05);实验组术后术前比较,MMP-2、MMP-9均较术前减少,KLK7及E-cad术后分别明显下降和升高,差异显著(P<0.05);实验组Ⅰ~Ⅳ期血清KLK7水平及E-cad水平随癌症的进展分别呈现升高和下降趋势,单因素方差分析结果显示,P<0.05;实验组中胃癌有无微血管转移与血清KLK7及E-cad表达水平有关(P均<0.05)。实验组的年龄分组、肿瘤大小、分化程度、浸润深度等不同病理特征的血清KLK7及E-cad水平的比较显示,KLK7及E-cad表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。胃癌患者血清KLK7及E-cad水平表达呈显著负相关(r=-0.386,P<0.01)。结论:KLK7和E-cad的表达上调或者下调都参与了胃癌的发生发展和转移过程。两者在胃癌患者血清中表达呈负相关,在胃癌发展及转移中可能存在拮抗效应。联合检测KLK7与E-cad可能对监测胃癌患者的病情及估计预后有一定帮助。

原发性乳腺癌组织中KLK6蛋白和mRNA的表达及其临床病理学意义

目的:探讨KLK6蛋白及其mRNA在原发性乳腺癌组织中的表达和临床意义。方法:随机选取原发性乳腺癌患者88例并收集其术后标本,采用SABC免疫组化方法和RT-PCR技术,检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中KLK6蛋白及其mRNA的表达。并分析其与原发性乳腺癌组织临床病理学特征之间的关系。结果:KLK6蛋白在原发性乳腺癌组织中的阳性表达率为78.40%(69/88),并与癌组织的临床病理学特征有关;发生淋巴结转移及ER(+)的癌组织中KLK6蛋白的阳性表达率明显低于未转移组(P<0.05)及ER(-)组(P<0.05)。KLK6 mRNA在原发性乳腺癌组织中的表达水平显著高于正常乳腺组织(P<0.01);但发生淋巴结转移的癌组织中,KLK6 mRNA的表达水平明显低于未转移组(P<0.05);ER+组亦低于ER(-)组(P<0.05)。KLK6蛋白及其mRNA的表达与乳腺癌相关基因CerbB-2的表达无相关性(P>0.05)。结论:KLK6蛋白及其mRNA的异常表达可能与原发性乳腺癌的发生、浸润、转移有关,可以作为一个肿瘤标志物在临床中应用。

KLK6 mRNA在乳腺癌中的表达及其临床病理和生物学意义

目的对正常乳腺组织和癌组织KLK6 mRNA进行定量,分析其表达与临床病理特征的关系,并探讨乳腺癌细胞株MCF-7中KLK6基因被沉默后细胞增殖及凋亡的变化。方法应用实时荧光定量PCR检测48例乳腺癌切除组织中KLK6基因mRNA的表达量,并分析KLK6 mRNA的表达量与ER、PR及肿瘤转移情况的相关性。以体外化学合成的siRNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7中KLK6基因的表达,分析细胞周期、细胞凋亡及细胞形态的变化。结果KLK6 mRNA在73%(35/48)的乳腺癌组织中表达水平增高,明显高于正常组织(P<0.01),有淋巴结转移的患者癌组织中的表达水平明显低于未转移组(P<0.05);ER(+)组低于ER(-)组(P<0.05);PR(+)组与PR(-)组差异不明显(P>0.05);与乳腺癌相关基因CerbB-2的表达无相关性(P>0.05)。MCF-7细胞中KLK6基因表达沉默后,S期细胞增加13.23%,细胞凋亡无明显变化。结论KLK6 mRNA在乳腺癌组织表达增高,并与ER状态及肿瘤转移情况有关。体外MCF-7细胞株和体内移植瘤KLK6基因表达沉默后肿瘤细胞生长加快。提示KLK6基因表达受雌激素下调的影响,是促乳腺癌细胞增殖的抑制因子,从而为乳腺癌的防治提供了新思路。

卵巢癌组织KLK11基因的表达意义

目的:探讨卵巢癌KLK11基因中的表达及临床意义.方法:采用RT-PCR和免疫组化技术检测48例卵巢癌组织中KLK11 mRNA及其蛋白的表达,并分析其与临床病理资料的关系.结果:KLK11蛋白表达位于细胞质.KLK11 mR-NA及蛋白的表达与临床分期有关,晚期(Ⅲ,Ⅳ期)KLK11mRNA及蛋白的表达水平明显高于早期(Ⅰ,Ⅱ期,P<0.05),中低分化癌KLK11 mRNA及蛋白的表达明显高于高分化癌(P<0.05),但KLK11 mRNA及蛋白的表达与组织学类型无关.结论:KLK11基因表达可能与卵巢癌的恶性程度有关.

KLK7 mRNA在子宫颈癌组织的表达及其临床意义

目的探讨激肽释放酶7(KLK7)mRNA在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR技术检测30例宫颈癌组织中KLK7 mRNA的表达,并以10例正常宫颈组织作对照。分析宫颈癌组织中KLK7 mRNA的表达水平与临床特征的相关性。结果宫颈癌组织中KLK7 mRNA的表达水平为1.16±0.33,明显高于正常宫颈组织0.77±0.20,(P<0.05)。分化程度较低的宫颈癌组织KLK7 mRNA的表达水平高于分化程度较高的宫颈癌组织(P<0.05)。伴有淋巴结转移的宫颈癌组织KLK7 mRNA表达水平为1.47±0.22,明显高于淋巴结转移阴性1.10±0.31,(P<0.05)。结论KLK7在宫颈癌的浸润、转移过程中具有一定的作用,将成为宫颈癌诊断和判断预后的有力工具,也可成为基因或免疫治疗的新靶点。

乳腺癌基因研究的新进展

近年来随着实验室技术的不断提高,人们对原癌基因、抑癌基因及各种相关蛋白在乳腺癌发生发展中作用的研究进一步深入,这不仅为乳腺癌的研究开辟新领域,也为乳腺癌的治疗提供了新的途径。现将与乳腺癌发病关系密切的相关基因DAPK、Pokemon、TBX2、EZH2及KLK4的研究进展做一综述。

KLK5基因在基底细胞样乳腺癌组织中的差异表达

目的:探索KLK5基因作为诊断基底细胞样乳腺癌(BLBC)的分子标志和治疗靶点的可能。方法:通过包含48 804个探针的人类mRNA基因表达谱芯片比较48例各亚型乳腺癌和6例正常乳腺组织基因表达谱,并通过荧光实时定量PCR法进行结果验证,分析BLBC与其他各亚型乳腺癌基因之间的差异表达。结果:分析乳腺癌各亚型和正常乳腺组织的基因表达谱,在BLBC中有99个基因上调4倍以上(2倍以上有意义),其中KLK5基因显著上调(5倍以上),但KLK5在Luminal A、Luminal B、HER-2过表达的基因表达谱中下调超过2倍,它们之间的差异表达具有统计学意义(P<0.05);并通过RT-PCR检测得到进一步验证。结论:KLK5可以作为诊断基底细胞样乳腺癌的标志基因和治疗靶点。

人组织激肽释放酶7和E-钙粘蛋白在胃癌中的表达及意义

目的探讨血清中 KLK7、E-cad在胃癌患者的表达与临床病理参数间的关系,并探讨二者相关性.方法胃癌患者 50例以及 50 例胃良性疾患者和 50 例健康体检者,分别命名为实验组、胃部良性疾患组和健康体检组.实验组中有24例符合手术条件同意行胃切除术的患者,细分为术前组和术后组.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测胃癌患者术前术后（1月）、胃良性疾患者组、健康体检组血清中KLK7及E-cad水平,分析与各临床病理指标的相关性.结果实验组血清KLK7及E-cad水平高于胃良性疾患组及正常体检组,差异均显著（P〈0.05）;实验组术后术前比较,KLK7 及E-cad 术后分别明显下降和升高,差异显著（P〈0.05）; 实验组Ⅰ～Ⅳ期血清KLK7 水平及E-cad水平随癌症的进展分别呈现升高和下降趋势,单因素方差分析结果显示,P〈0.05; 实验组中胃癌有无微血管转移与血清KLK7 及E-cad表达水平有关,P均 〈0.05. 实验组的年龄分组、肿瘤大小、分化程度、浸润深度等不同病理特征的血清KLK7及E-cad水平的比较显示,KLK7及E-cad表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）. 胃癌患者血清KLK7及E-cad水平表达呈显著负相关（r=-0.386,P〈0.01）.结论 KLK7和E-cad 的表达上调或者下调都参与了胃癌的发生发展和转移过程.两者在胃癌患者血清中表达呈负相关, 在胃癌发展及转移中可能存在拮抗效应.联合检测KLK7与E-cad可能对监测胃癌患者的病情及估计预后有-定帮助.

激肽释放酶转基因大鼠模型的建立

目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG（150-150IU/kg）超排不同周龄（4-8周）SD大鼠比较超排效果的差异，以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件，经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型，通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达。结果4-8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7，5周龄大鼠超排效果最好，与其他周龄大鼠相比有显差异，P〈0.05；显微注射1538枚卵，移植685（44.53%）枚卵于31只受体输卵管中，12（12/31，38.7%）只怀孕，共产仔62只，经PCR检测获得6只阳性鼠，Southern检测3只阳性。对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达。结论成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型，该模型是高血压病研究的理想动物模型。

KLK7蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义

目的探讨KLK7蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义。方法采用Western-blot技术检测34例卵巢上皮性癌、19例卵巢交界性上皮性肿瘤、32例卵巢良性上皮性肿瘤及37例正常卵巢组织中KLK7蛋白的表达,并分析其与各临床病理指标的相关性。结果KLK7蛋白在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率(分别为79.4%、47.4%)及表达水平(分别为0.85±0.15、0.53±0.09)均显著高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(分别为15.6%、16.2%和0.20±0.13、0.22±0.11,P均<0.05);且KLK7蛋白在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率和表达水平均与手术病理分期和淋巴结转移有明显的相关性(P<0.05)。结论KLK7蛋白在卵巢上皮性癌组织中呈高表达,其不同程度的表达增强与卵巢上皮性肿瘤可能有关。

人组织激肽释放酶蛋白在宫颈癌组织中表达及临床意义

目的:通过研究人组织激肽释放酶(KLK8)蛋白在宫颈癌的表达,探讨KLK8蛋白在宫颈癌发病中的作用。方法:选择正常宫颈组11例,慢性宫颈炎组13例,宫颈癌组43例,应用免疫组化方法,研究KLK8基因的表达产物即其在宫颈癌组织内表达。结果:KLK8蛋白定位于宫颈上皮细胞胞浆内。宫颈浸润癌组织,慢性宫颈炎组织及正常宫颈组织中KLK8蛋白的阳性表达率分别为69.8%、15.4%、0,其中宫颈癌与正常宫颈组间KLK8蛋白阳性表达率有明显差异(P<0.01),与慢性宫颈炎组相比KLK8蛋白阳性表达率也有明显差异(P<0.01),而正常宫颈和慢性宫颈炎组间表达率无明显差异(P>0.05)。结论:①KLK8蛋白在宫颈癌组织中的表达明显高于正常和慢性宫颈炎者;②KLK8蛋白在肿瘤的入侵和转移中发挥着重要的作用,参与了宫颈癌的形成机制,并且将成为宫颈癌诊断的有力工具和治疗的新靶点。

Klk6、Her-2蛋白及Ki-67在子宫内膜癌中的表达及临床病理意义

目的探讨组织型激肽释放酶6(Klk6)、Her-2蛋白及Ki-67在子宫内膜癌中表达的意义。方法应用免疫组化检测正常增生期内膜、单纯性增生性内膜、复杂性不典型增生性内膜各19例和子宫内膜样腺癌38例中Klk6、Her-2蛋白、Ki-67的表达情况。利用统计学软件SPSS 17.0和Graphpad Prism 5进行统计学分析检测并探讨其意义。结果 Klk6、Her-2蛋白、Ki-67在癌组织中表达高于其他病变(P<0.05),Klk6在不同肿瘤临床分期中表达有明显统计学差异(P<0.05);而Klk6、Her-2蛋白在子宫内膜癌分级及淋巴结有无转移表达无统计学差异(P>0.05)。结论 Klk6、Her-2蛋白、Ki-67在子宫内膜癌中的表达与肿瘤发生有一定的相关性,特别是Klk6与子宫内膜癌分期相关,对临床诊断、治疗及评估预后具有一定的价值。

KLK10基因表达增强能够降低人舌癌细胞的增殖和侵袭能力

目的探讨人组织激肽释放酶10(KLK10)对舌癌Tca8113细胞增殖和侵袭力的影响。方法运用分子生物学技术,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-KLK10,转染Tca8113细胞,分别用RT-PCR、Western blot检测KLK10 mRNA及蛋白表达水平。MTS细胞生长实验检测细胞增殖的变化;Transwell小室细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 pIRES2-EGFP-KLK10转染Tca8113细胞获得稳定细胞株,与空白对照组及空载体组比较,KLK10 mRNA及蛋白表达水平均明显增高,KLK10增强表达的舌癌细胞增殖和侵袭能力均明显减弱(P<0.05)。结论 KLK10表达增强能够降低人舌癌细胞的增殖和侵袭能力。KLK10基因可能成为肿瘤治疗上有前途的分子靶点。

人乳腺癌细胞株KLK5 mRNA的表达及雌激素的调节作用

目的探讨雌激素对雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7和B37组织激肽释放酶5(KLK 5)mRNA的表达水平,以及雌激素对KLK5 mRNA表达水平的影响。方法分别取生长良好的MCF-7和B37细胞,在不同浓度的雌激素(17-βE2)存在下培养72小时后,收集细胞,提取总RNA,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应,检测KLK5 mRNA表达水平及变化。结果在未经刺激的乙醇对照组,MCF-7细胞KLK5 mRNA的相对表达水平(KLK5 mRNA/GAPDH mR-NA)为(3.23±0.51)×10-5,B37细胞KLK5 mRNA表达水平为(3.13±0.62)×10-4。B37细胞KLK5 mRNA表达水平高于MCF-7细胞。当17-βE2浓度10-11mol/L以下时,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA表达水平与乙醇对照组无明显差异(P<0.05)。随17-βE2浓度的增高,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA的表达呈递增趋势,各组与乙醇对照组相比差异有显著意义(P<0.01)。结论雌激素对人乳腺癌细胞株MCF-7和B37细胞的KLK5 mRNA表达有剂量依赖的上调作用。

ST段抬高型心肌梗死患者血运重建前后血清生成素Ⅱ组织激肽释放酶1水平变化及与预后的关系

目的探讨直接经皮冠状动脉介入(PCI)术前、术后血清血管生成素Ⅱ(AngⅡ)、组织激肽释放酶1(KLK1)水平变化以及对ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者6个月内发生主要不良心血管事件(MACE)的预警价值.方法前瞻性选择2018年1月至2019年3月在广州市第一人民医院接受直接PCI术的STEMI患者220例,记录术前5 min和术后24 h血清AngⅡ和KLK1水平,随访6个月,记录MACE发生情况.结果与术前相比,STEMI患者血清AngⅡ总体水平(3.15±0.97)μg/L降低,而血清KLK1总体水平(27.97±12.86)ng/L升高(P<0.05).术前和术后血清AngⅡ水平与Gensini评分均呈正相关性(r=0.578,0.337,P<0.05),且随着心肌梗死面积增加术前血清AngⅡ增加(P<0.05).术前血清KLK1水平与Gensini评分具有负相关性(r=-0.346,P<0.05);且随着心肌梗死范围的扩大血清KLK1水平逐渐降低(P<0.05).随访6个月,MACE组患者术后血清AngⅡ降低率和KLK1升高率分别为(-29.14±17.52)%、(33.46±14.51)%,高于非MACE组患者(P<0.05).术后血清AngⅡ降低率(OR=6.895,95%CI 2.178~13.994)和KLK1升高率(OR=19.165,95%CI 2.469~36.883)是MACE发生的独立影响因子(P<0.05).经受试者工作特征(ROC)曲线分析,术后AngⅡ联合KLK1变化率对术后6个月发生MACE预测的ROC曲线下面积(AUC)为0.913(95%CI0.837~0.990).结论动态观察血清AngⅡ和KLK1水平变化,对于STEMI患者PCI术后6个月MACE的发生风险有一定的预测价值.

实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织中KLK4 mRNA表达

目的探讨KLK4基因在人乳腺癌组织中表达的临床意义。方法用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法检测39例乳腺癌组织和25例正常组织中KLK4 mRNA的表达,以及mRNA表达量与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CerbB-2及肿瘤的转移情况进行相关性分析。结果正常乳腺组织和癌组织KLK4 mRNA的相对表达水平分别为0.0120±0.0044和0.0272±0.0067,两者差异显著(P<0.01);乳腺癌组织中KLK4的相对表达水平在ER(+)和ER(-)组分别为0.0269±0.0070和0.0276±0.0067;在PR(+)和PR(-)组分别为0.0270±0.0065和0.0275±0.0081;在CerbB-2(+)和CerbB-2(-)组分别为0.0270±0.0064和0.0301±0.0074;在肿瘤有、无转移组分别为0.0258±0.0061和0.0276±0.0066,各组间KLK4mRNA表达水平均无显著性差异(P>0.05)。结论在乳腺癌组织中KLK4 mRNA的表达水平显著高于正常乳腺组织,但在肿瘤是否转移,雌激素受体、孕激素受体及CerbB-2阳性和阴性组间无显著性差异。