山羊痘病毒毒力因子KLP1互作蛋白的筛选与初步鉴定

为进一步研究山羊痘病毒毒力因子KLP1,了解其生物学功能,本试验构建了羊皮肤组织酵母cDNA文库及GTPV KLP1蛋白基因的诱饵质粒,并做了质粒的自激活检测。采用酵母双杂交方法,从羊皮肤组织酵母cDNA文库中筛选出与KLP1蛋白相互作用的蛋白,结果成功构建了羊皮肤组织cDNA文库,容量为1.05×10^(7) CFU,成功构建pGBKT7-KLP1诱饵质粒,且在酵母双杂交系统中没有毒性和自激活作用;酵母双杂交筛选出与KLP1蛋白互作的蛋白克隆25个,经过测序比对合并得9种蛋白,对其进行LacZ回转验证和共定位试验验证,证实NOTCH1蛋白与KLP1蛋白具有特异的相互作用。本试验为阐明GTPV毒力因子KLP1的生物学特征及其作用机制提供参考。