不同来源血清碱性磷酸酶km值的比较研究

目的寻找血清中单底物酶ｋｍ值测定实验的材料来源。方法分别测定人脐血清、人静脉血清（人血清）及羊血清中碱性磷酸酶的ｋｍ值，并通过统计学处理进行比较。结果显示：三种血清中酶的活性、ｋｍ值无显著性差异，并显示羊血清的结果接近脐血清并优于人血清。

脲酶km值的比色测定法及其评价

本文报道了作者建立的脲酶km值和V_(max)比色测定法的实验条件和作图求值方法,方法新颖、简便、准确。在临床酶学研究和教学实践中有较好的应用价值。

酶的Km值测定——兼论《酶的Km值三种计算方法的比较》

Michealis-Menten以及Briggs-Haldane先后在研究酶促反应动力学工作中推导出米氏方程式v=Vmax·[S]/Km+[S],式中Km(米氏常数Michealis Constant)

血清醛缩酶Km值作癌瘤诊断指标的初步探讨

醛缩酶(ALD)有A、B、C三型同工酶,患癌瘤时其酶谱发生“返祖”变化。已有应用1,6—二磷酸果糖(FDP)和1—磷酸果糖(FlP)双底物测定酶活力比值(FDP/FlP)、免疫沉淀和放射免疫分析法测定的报道。ALD的同工酶属原级同工酶,其动力学参数不同,但健康人与癌瘤患者血清ALD Km值有无变化,尚未见报道。为了探讨这种变化以及能否以此作为癌瘤诊断的一项指标,作者以FDP为底物,用血清ALD Km值的测定法,对71例癌瘤患者,同时对健康人、

狗呼吸道烧伤前后血清硷性磷酸酶活性及Km值的变化

硷性磷酸酶（ALP）广泛分布于小肠、胎盘、肾、骨、肝、肺及脾等担织器官内。大鼠烧伤后在创伤愈合的肉芽组织中也含有大量的ALP，肉芽组织ALP的性质类似肝、骨组织的ALP同功酶。

单底物酶Km和Vmax估值程序设计及应用

介绍编写单底物酶动力学参数Km和Vmax估值程序的设计和该程序的应用实例．

脲酶K_m值简易测定方法的改进

对脲酶Km值简易测定方法中存在的问题和(NH4)2SO4标准溶液浓度、尿素浓度、脲酶终止剂、缓冲液系统以及脲酶用量等因素对Km值的影响,进行了多组对比测定。将该方法测定条件优化为:(NH4)2SO4标准溶液浓度0.001mol·L-1,尿素浓度1/250、1/200、1/150、1/100、1/50mol·L-1,终止剂10%硫酸锌,缓冲液1/15mol·L-1Tris-H2SO4(pH7.0),脲酶用量0.50mL。

酵母蔗糖酶K_m值的测定

Ｋｍ值是酶的特征性常数，测定Ｋｍ值是研究酶动力学的一种重要方法。故“Ｋｍ值的测定”是医学院校本科生、研究生生物化学实验课的重要内容。多年来，在给学生开设碱性磷酸酶Ｋｍ值的测定或酵母蔗糖酶Ｋｍ值的测定中，我们发现原实验［１］存在一些问题。对此，我们作了...

建筑节能设计中房间立面单元选择对K_m值的影响

外墙的平均传热系数Km是建筑节能设计中的重要指标。本文运用数学分析方法分析研究了不同房间立面单元对Km值的影响,分析研究的结果对节能设计中Km值的计算有实际的指导意义。

单底物酶的Km测定方法学研究

作者将由米氏方程改写的线性回归方程略加分解,用袖珍计算器测算Km 和 Vmax 值,取得了准确又简便的效果。并用此法研究底物浓度对米氏方程的服从性。发现在[S]》[E]的广阔范围内,不同梯度浓度组测得的 Km 或 Vmax 相差很大。运用相关系数(r)反映线性从而证明底物浓适度对米氏方程的服从性的原理,寻找到最适底物浓度的范围。为使 Km 测定达到规范化,作者提出两点建议与同道研讨。(1)实验设计的底物范围要宽广,浓度梯度不少于12个,并能测出最大的初速度。(2)选择实验测得的最大初速度及其1/2之间的底物浓度来计算 Km 和 Vmax值。文章通过实例分析,认为下述建议是合理的。

绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的米氏常数值

本试验旨在研究绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的米氏常数(Km)值,为解释绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢特征提供酶学依据。选用6只1岁左右安装永久性瘤胃瘘管的中国美利奴(新疆型)绵羊[平均体重为(32.00±1.36)kg],饲喂精粗比为30∶70的饲粮,依次采集饲喂前(0 h)和饲喂后1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 h 6个时间点的瘤胃液,重复采集3次。分离和制备细菌、原虫破碎液,分别测定相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的Km值。结果显示:1)绵羊瘤胃细菌、原虫破碎液中蛋白酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和谷氨酸脱氢酶的活力随饲喂时间的延长均呈现先升高后降低的动态变化规律,总体在饲喂后1.5 h达到峰值;谷氨酸和氨含量也呈现相似的变化规律。原虫破碎液中参与蛋白质分解代谢的这4种酶的活力在各时间点均极显著高于细菌(P<0.01)。2)原虫破碎液谷氨酸含量极显著高于细菌(P<0.01);原虫破碎液氨含量在1.5、6.0、9.0和12.0 h显著或极显著高于细菌(P<0.05或P<0.01)。3)绵羊瘤胃细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的Km值分别为2.60×10^(-7)、1.48×10^(-7)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对谷氨酸的Km值分别为8.41×10^(-6)、4.91×10^(-6)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的Km值分别为3.80×10^(-8)、2.70×10^(-8)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对α-酮戊二酸的Km值分别为1.16×10^(-6)、2.07×10^(-6)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对氨的Km值分别为2.97×10^(-5)、1.40×10^(-5)mol/L。结果提示,总体上,绵羊瘤胃细菌、原虫中蛋白酶、谷氨酸脱氢酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶的活力在饲喂后1.5 h达到峰值,之后逐渐降低;绵羊瘤胃原虫中蛋白酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和谷氨酸脱氢酶的活力均极显著高于细菌,原虫中蛋白质分解代谢更旺盛;瘤胃原虫中不仅存在谷氨酸转氨机制,还可能存在利用氨重新合成氨基酸的机制。

嗜酸乳酸杆菌ATCC4356菌株异源二聚体β-半乳糖苷酶的克隆表达

嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)的异源二聚体β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶2家族,由两个部分重叠、协同翻译的基因编码(lacL和lacM)。【目的】克隆表达该酶并测定其酶学特性。【方法】参照已全基因组测序的嗜酸乳酸杆菌NCFM菌株,以嗜酸乳酸杆菌ATCC4356菌株基因组为模板,将lacL的RBS到lacM的终止子之间的序列(2834bp)克隆到pQE31质粒上,并电转化JM109菌株。以下列步骤纯化表达产物:硫酸铵分级沉淀、阴离子交换、亲和层析和凝胶排阻层析。以凝胶排阻层析测定纯化酶的天然分子量,以邻硝基苯基半乳糖为底物测定其酶学特性。【结果】实现了该酶在JM109菌株中的可溶性表达。其氨基酸序列有一处不同于嗜酸乳酸杆菌NCFM菌株,即其大亚基(LacL)的第512位氨基酸不是组氨酸而是精氨酸。纯化酶比活力为226U/mg蛋白,天然分子量为96.3±4.6kDa,最适pH为7,最适温度为49℃,Km和Vmax值分别是:2.18±0.12mmol/L,273±5U/mg蛋白。

小麦叶绿素酶生化动力学特性研究

采用分光光度法对小麦Chlase的生化性质及其动力学特征进行了部分研究.结果表明:Chlase的Km值为11.6μmol/L,Vmax为1.14μmol·min-1·g-1FW;最适pH为7.5,pH在7～8的范围内,Chlase催化Chl脱植基反应的活性较高;最适温度为45℃,在60℃、70℃、80℃保温时,该酶活力丧失50%所需的时间分别为27min、22min、18min;研究发现不同的金属离子及络合剂对该酶活性有影响,低浓度的Ca2+、Zn2+和较高浓度的Mg2+对Chlase有激活作用,而Fe3+、EDTA则较明显地抑制了Chlase活性;Chlase可催化Chla、b的脱植基反应,对Chlb的亲和性较高.

超声波对胰蛋白酶水解酪蛋白的影响

研究了超声场下胰蛋白酶水解酪蛋白的酶解反应条件与动力学.在超声波频率 20 kHz、作用与间歇时间比为1∶1时,测定了不同功率下胰蛋白酶活性及该酶的最适温度、最适 pH和米氏常数Km 的影响.结果表明,180,225 W功率下,超声10 min的酪蛋白水解率显著高于常规对照组(P<0.05); 225 W超声功率下,在5 ℃,10 ℃,20 ℃下水解率分别比对照组提高 4.4 倍、2.47倍和2.33倍(P<0.01);超声场下胰蛋白酶 Km 值减小,Vm 增大.将胰蛋白酶、底物分别进行超声处理,紫外和荧光光谱分析观察到,超声处理后,酶溶液荧光发射光波长从334 nm移至332 nm,荧光强度提高,表明一定的超声波可能使酶及底物分子构象发生变化,提高胰蛋白酶水解活性.

籽粒低锌与高锌含量基因型水稻锌营养特性的比较

采用溶液培养和放射性同位素技术 ,比较籽粒低锌含量基因型水稻 (OryzasativaL .)湘早籼 17与籽粒高锌含量基因型水稻V5 6根系形态及有关生理特性的差异 ,发现V5 6的根系比湘早籼 17大 (根较长 ,根体积较大 ,生物量较高 )、根冠比值较高及根系吸收锌的Km值较低 ,因而对锌的吸收量较大。这些特性可作为筛选籽粒高锌含量基因型水稻的指标。

大鼠MAOB活性增高的机理研究

研究青、老年大鼠心、脑单胺氧化酶的活性及动力学参数Ｋｍ值，其结果表明：老年组大鼠心、脑单胺氧化酶的活性明显高于青年组，证实了该酶的活性与年龄密切相关，但两组Ｋｍ值无明显差异，提示单胺氧化酶本身的性质没有改变，其活性增高可能与其他因素有关。

食品级肉豆蔻酸异丙酯微乳的制备研究

本文以肉豆蔻酸异丙酯为原料,筛选出肉豆蔻酸异丙酯空白微乳的最佳配方。首先采用伪三元相图法,以微乳区面积为指标,筛选出表面活性剂和助表面活性剂;探究表面活性剂与助表面活性剂质量之比Km值与亲水亲油平衡值(HLB值)对微乳形成的影响,然后以离心和染色实验来判断微乳的稳定性和构型。结果表明:当以肉豆蔻酸异丙酯作为油相,吐温80复配司盘80作为复合表面活性剂,无水乙醇为助表面活性剂(表面活性剂∶助表面活性剂∶IPM=4∶2∶4),且Km=2∶1,HLB=7.5时,形成的微乳液稳定性最好。此条件下,油包水型微乳的最大载水量为15.3%。因此可以说明伪三元相图法制备肉豆蔻酸异丙酯方法方便可行。

胸腺五肽油包水型口服微乳的处方设计与评价

目的对胸腺五肽油包水(W/O)型口服微乳进行处方设计及评价。方法 Km值(Km=m乳化剂∶m助乳化剂)滴定法制备伪三元相图,考察油相、乳化剂、助乳化剂、Km值、温度和药物对W/O微乳区域面积和载水量的影响,求出W/O型微乳的最佳处方组合。结果物理化学性质稳定且W/O区域面积和载水量均较高的W/O型微乳的最佳处方组合为蒸馏水/豆磷脂/无水乙醇/辛癸酸三甘油酯(Km=1∶1),制备温度为室温(20±1)℃。根据最佳处方组合,将水溶性药物胸腺五肽溶于水相中,制备了含药微乳的伪三元相图。结论蒸馏水/豆磷脂/无水乙醇/辛癸酸三甘油酯(Km=1∶1)组合具有较大W/O区域面积和载水量,可成功地将水溶性肽类药物包载于水相,并可将其应用于口服药物传递载体。

黄连对羟苯基丙酮酸双加氧酶的原核表达和酶学性质

为了研究黄连对羟苯基丙酮酸双加氧酶(CjHPPD)的功能和性质,在E.coli中异源表达其编码cDNA得到了重组的CjHPPD.经HPLC和LC-MS检测确定重组CjHPPD具有催化对羟苯基丙酮酸形成尿黑酸的酶活性.酶学特性分析表明,CjHPPD催化尿黑酸形成的最适pH值为6.5,产物尿黑酸的积累至少在反应开始10min内随时间呈线形增长,最适反应温度为30℃.以ρ-HPP为底物进行底物亲和性分析表明,CjHPPD符合Michaelis-Menten动力学曲线,Km值为43.2μmol/L.结果表明,CjHPPD的Km值明显高于其他已报道的植物HPPD的Km值,高Km使得CjHPPD具有较强除草剂抗性.