人结肠癌细胞系绿色荧光蛋白裸鼠移植瘤模型的建立与观察

目的建立绿色荧光蛋白（GFP）裸鼠结肠癌肿瘤模型，并与普通裸鼠结肠癌肿瘤模型进行比较，观察其在肿瘤形态学、生物学特性及病理学之间的差异。方法将处于对数生长期的KM12SM人结肠癌细胞分别接种于10只GFP裸鼠和10只裸鼠的右侧腋窝皮下，观察成瘤时间，肿瘤体积及病理形态等情况。结果GFP裸鼠平均成瘤时间约为4～5d，裸鼠约为6～8d；接种第20天，裸鼠组测得体积约为（3463．434±341．39）mm^3，GFP裸鼠组肿瘤体积约为（4923．46±521．72）mm^3，存在显著差异。镜下见肿瘤细胞生长活跃，大小较为均匀，部分区域可见腺腔形成。结论经比较研究，GFP裸鼠在结肠癌肿瘤模型的成瘤时间，肿瘤质量等方面较裸鼠具有一定的优势，可为结肠癌转移的机制探讨和诊断治疗研究提供更为理想的动物模型。

miR-152和miR-448靶向于Rictor并抑制结直肠癌细胞增殖

目的筛选靶向于Rictor mRNA表达的miRNAs并研究其在结直肠癌中的调控作用。方法采用软件预测筛选可能靶向于Rictor mRNA表达的miRNAs,用所预测的miRNAs转染KM12SM细胞株,利用qRT-qPCR和Western blotting进一步确定对Rictor表达具显著调控作用的miRNAs。在此基础上,利用双荧光素酶报告系统进一步确定可结合到Rictor mRNA的3'UTR区对其转录后进行调节的miRNAs。利用细胞存活检测和克隆形成实验进一步确证所筛选miRNAs对细胞存活和克隆形成的影响。结果 miR-152和miR-448对Rictor表达均具显著抑制作用(P<0.01,P<0.05),且miR-152和miR-448可结合到Rictor mRNA的3'UTR区,显著抑制荧光素酶活性(P<0.01,P<0.05),对其进行转录后进行调节,miR-152和miR-448过表达均可显著抑制结直肠癌细胞株KM12SM的生长和增殖。结论 miR-152和miR-448可能通过靶向于Rictor mRNA进而抑制其蛋白表达,最终负调控结直肠癌的生长和克隆形成。