环状RNA KMT2E靶向miR-204-5p/MMP9轴对高糖条件下人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的探究环状RNA KMT2E(circ KMT2E)对高糖(HG)诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的影响及调控机制。方法收集自2018年12月至2020年11月在海南医学院第二附属医院眼科中心进行白内障手术的33例非糖尿病性白内障(DC)患者和33例DC患者的晶状体前囊膜,TUNEL法检测晶状体前囊膜上LEC凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测晶状体前囊膜中circ KMT2E、miR-204-5p和基质金属蛋白酶(MMP)9 mRNA表达水平,采用Pearson法分析circ KMT2E、miR-204-5p和MMP9 mRNA表达水平的相关性。取人晶状体上皮细胞系(HLE-B3),CCK-8法筛选最佳HG浓度及作用时间;将HLE-B3细胞分为对照组、HG组、沉默对照组、KMT2E沉默组、过表达对照组、KMT2E过表达组、KMT2E过表达+miR-NC组、KMT2E过表达+miR-204-5p模拟物组,转染后将HLE-B3细胞用HG处理24 h。RT-qPCR检测各组细胞中circ KMT2E、miR-204-5p和MMP9 mRNA表达水平,验证转染效果;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测细胞中MMP9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测circ KMT2E与miR-204-5p的靶向关系。结果与非DC患者相比,DC患者晶状体前囊膜中LEC凋亡、circ KMT2E、MMP9 mRNA表达水平显著升高,miR-204-5p水平显著降低(P<0.05);Pearson相关分析显示,DC患者晶状体前囊膜中circ KMT2E与miR-204-5p呈负相关,MMP9与miR-204-5p呈负相关,MMP9与circ KMT2E呈正相关。200 mmol/L葡萄糖作用24 h时可显著抑制HLE-B3细胞活力(P<0.05)。转染后,与对照组相比,HG组细胞中circ KMT2E、MMP9 mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著升高,miR-204-5p水平、细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);与HG组相比,KMT2E沉默组细胞中circ KMT2E、MMP9 mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低,miR-204-5p水平、细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),KMT2E过表达组上述指标变化则表现出相反的作用(P<0.05);在过表达KMT2E的基础上,上调miR-204-5p,可降低MMP-9表达,明显逆转circ KMT2E过表达对HLE-B3细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-204-5p mimic后,KMT2E-WT细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。结论沉默circ KMT2E可能通过靶向上调miR-204-5p,进而抑制MMP9的表达,减少HG诱导的人LEC凋亡。

KMT2E基因突变致癫痫机制探讨

目的回顾KMT2E基因突变位点,探讨KMT2E基因突变致癫痫的相关机制,并报道1例具有KMT2E基因新突变位点的案例。方法查找各数据库复习相关文献,同时回顾分析1例癫痫患儿的临床资料以及采用二代测序方法进行的全外显子基因捕获检测结果,对其就诊过程进行回顾随访。结果在既往的报道中KMT2E多与髓系白血病相关,后于癫痫患者中发现该基因相关突变,该基因相关突变在国内未见有相关报道。KMT2E可通过介导三胸类组蛋白对细胞中蛋白质的合成及装配产生影响。患儿,男,61月龄,确诊癫痫36个月。基因检测结果显示,患儿KMT2E基因存在杂合变异c.2333C>G(p.Thr778Ser),既往各数据库对该突变位点均无相关致病性报道,生物信息学软件预测为可能致病性变异。结论KMT2E基因突变极可能通过三胸类组蛋白影响下游蛋白的表达进而导致癫痫。KMT2E基因的c.2333C>G(p.Thr778Ser)突变极可能是导致癫痫的原因之一,基因检测有助于早期诊断和治疗。

KMT2E基因变异相关儿童失神癫痫临床表型及遗传学分析

目的探讨KMT2E基因变异所致儿童失神癫痫临床表型及遗传学特征。方法收集临沂市人民医院小儿神经科于2023年1月收治的1例KMT2E基因变异相关儿童失神癫痫患儿的临床资料并进行随访观察,应用全外显子测序技术及Sanger测序法对患儿及其核心家系成员进行基因检测,并对变异位点进行致病性分析。以“KMT2E”为检索词查阅在线人类孟德尔遗传数据库、人类基因突变数据库、PubMed数据库、中国知网及万方数据库建库至2024年5月相关文献,总结KMT2E基因变异相关癫痫患儿的临床表型及遗传学特征。结果患儿为女性,3岁8个月时出现典型失神发作,发育正常,视频脑电图显示广泛性3 Hz左右棘慢波伴有典型失神发作,丙戊酸足量应用后发作减少,联合拉莫三嗪后发作得到控制,临床诊断为儿童失神癫痫。全外显子测序结果显示患儿存在KMT2E基因新发移码变异c.2404dup(p.Arg802Lysfs*8)(NM_182931.3),此位点目前国内外尚未报道。根据美国医学遗传学与基因组学学会变异分类标准与指南,判读c.2404dup变异为致病性变异(PVS1+PS2_Supporting+PM2_Supporting)。患儿父母、哥哥、妹妹均未携带该变异且临床表型正常。共检索到已报道KMT2E基因变异相关癫痫患者22例(包括本例共23例),其中女性10例,男性13例。皆为常染色体显性遗传,其中20例为微小变异,包括8例移码变异、7例错义变异、2例剪切变异、2例无义变异、1例同义变异,其余3例为大片段缺失(包含全基因者2例)。临床表现主要包括癫痫发作(失神发作5例,局灶性发作伴或不伴继发强直阵挛发作7例,强直阵挛发作9例,痉挛发作1例,肌阵挛发作、强直发作、失张力发作1例,出现癫痫持续状态3例,明确为难治性癫痫5例,癫痫起病年龄从新生儿期至青春期)、智力障碍(21/23,4例轻度,5例中度,5例重度)、特殊面容(11/23)、孤独症(3/23)等。结论KMT2E基因变异相关癫痫为常染色体显性遗传病,其临床表型谱广泛。本研究发现的KMT2E基因c.2404dup新变异可致儿童失神癫痫,丰富了KMT2E基因变异谱和临床表型谱。