FIH与锚蛋白重复序列结构域

缺氧诱导因子抑制因子(FIH)是体内调节缺氧诱导因子1(HIF-1)转录活性的主要因子之一。近年FIH研究中最引人注意的是一组含有锚蛋白重复序列结构域的底物蛋白质,这组蛋白普遍存在并参与多种生理功能,其含多个FIH羟化位点,但具有不完全羟化及优势底物的特征,又与FIH、HIF-1之间存在错综复杂的关系。

锚蛋白重复结构域1的研究进展

锚蛋白重复结构域1(ANKRD1)也被称为心肌锚定重复序列蛋白(CARP),由ANKRD1编码,是一种应激反应蛋白,为细胞质中的重要组成部分,而且是细胞核转录的重要辅助因子。其在细胞的表达水平,定位甚至病理应激类型不同,可发挥不同的功能。CARP作为肌肉锚蛋白重复蛋白家族的一员,在各种心脏疾病中高表达,但其发挥作用的机制及对相关病理生理学仍不清楚。本文从ANKRD1的结构及其在心脏疾病中的作用进行阐述。

Kankl抑制肿瘤的机制研究进展

KN基序和锚蛋白重复结构域1(Kank1)与肿瘤关系密切,其在大多数肿瘤中表达下降或缺失,而启动子甲基化是Kank1表达下降或缺失的重要原因。Kank1在不同组织来源的恶性肿瘤中发挥抑制作用,其可以通过各种信号通路、下游分子抑制肿瘤的增殖、转移、侵袭,促进肿瘤的凋亡。因此,Kank1的低表达与肿瘤的不良预后密切相关,其可能成为恶性肿瘤预后、早期诊断的分子指标以及肿瘤靶向药物的治疗靶点。未来对Kank1进行深入研究,不仅有助于更好地了解肿瘤的发生和发展机制,也为恶性肿瘤的诊断和治疗提供了新的思路和方法。

ANKIB1相关泛素结合酶的筛选

含锚蛋白重复和IBR结构域蛋白1(ankyrin repeat and IBR domain-containing protein 1,ANKIB1)属于RING-IBR-RING(RBR)蛋白家族,也是该家族中唯一含有泛素结合模体的成员,能促进某些蛋白的泛素化.几乎所有的RBR蛋白都具有泛素连接酶(E3)活性.ANKIB1也被推测为一种E3,但迄今尚未证实.RBR型E3能够与多种泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,Ubc,统称E2)互作并发挥催化作用,其中最常见的是UbcH7,UbcH8和UbcH5B次之.为了筛选ANKIB1相关的E2,本研究在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达了UbcH5B、UbcH7和UbcH8蛋白,并采用GST沉降(GST pull-down)实验验证3种E2与ANKIB1的相互作用.实验结果表明,内源性及过表达的ANKIB1均能与UbcH5B、UbcH7或UbcH8相互作用,同时ANKIB1也是唯一能与这3种E2互作的RBR蛋白.本研究为ANKIB1可能是1种E3的假说提供了支持,并为后续研究ANKIB1的E3活性和催化机制提供了线索.

胃癌组织FIBCD1、ANKRD49表达与临床病理特征和预后的关系研究

目的 分析胃癌组织中含纤维蛋白原C结构域蛋白1(FIBCD1)及锚蛋白重复结构域49 (ANKRD49)表达及与临床病理特征和预后的关系。方法 选取2015年1月至2018年1月该院收治的132例胃癌患者。以免疫组化染色法检测其胃癌组织和癌旁组织(距癌组织边缘2 cm以上)中FIBCD1、ANKRD49的表达情况。采用Spearman相关分析FIBCD1与ANKRD49的相关性。分析胃癌组织中FIBCD1、ANKRD49的表达与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线及Log-rank检验分析不同FIBCD1、ANKRD49表达情况胃癌患者生存情况。采用COX比例风险回归模型分析影响胃癌患者预后的危险因素。结果 胃癌组织中FIBCD1、ANKRD49阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织中FIBCD1与ANKRD49表达呈正相关(r=0.522,P<0.001)。不同TNM分期、肿瘤浸润深度的患者胃癌组织中FIBCD1、ANKRD49阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.05)。FIBCD1、ANKRD49阳性表达患者3年生存率均低于FIBCD1、ANKRD49阴性表达患者(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、肿瘤浸润深度T3~T4、FIBCD1阳性表达、ANKRD49阳性表达是影响胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论 胃癌组织中FIBCD1、ANKRD49阳性表达率升高,二者与TNM分期、肿瘤浸润深度有关,且可影响胃癌患者预后。

敲低ASAP1降低结核分枝杆菌感染小鼠RAW264.7细胞的迁移能力

目的观察含SH3结构域-ADP-核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)介导小鼠RAW264.7巨噬细胞对结核分枝杆菌感染过程的影响以及ASAP1对巨噬细胞迁移能力的影响。方法建立ASAP1敲低的RAW264.7细胞系,感染结核分枝杆菌H37Ra后,利用荧光共聚焦显微镜和平板计数方法对胞内细菌的载量进行检测,采用TranswellTM法检测ASAP1敲低细胞的迁移能力。结果与对照组细胞相比,ASAP1敲低的RAW264.7细胞感染H37Ra后胞内细菌载量增多,且细胞迁移能力降低。结论敲低ASAP1降低RAW264.7细胞的迁移能力。

胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin的表达及临床意义

目的:探讨胰腺癌组织中IQ结构域GTP酶激活蛋白1(IQGAP1)、癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)的表达及临床意义。方法:回顾性分析2011年1月—2014年1月武威市人民医院行胰腺癌根治术治疗的95例胰腺癌患者的病历及随访资料,免疫组织化学染色法检测正常胰腺组织、胰腺癌组织及癌旁组织中IQGAP1和Gankyrin的表达,分析IQGAP1和Gankyrin表达与胰腺癌临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同IQGAP1和Gankyrin表达患者的总生存率的差异,Cox比例风险回归模型分析患者预后的影响因素。结果:与癌旁组织和正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin表达均上调(P<0.05)。IQGAP1和Gankyrin表达均与胰腺癌TNM分期、分化程度和糖类抗原199(CA199)表达相关(P<0.05)。IQGAP1阳性、Gankyrin阳性患者的5年生存率均明显低于阴性患者(P<0.05);Cox比例风险回归分析结果显示,TNM分期、IQGAP1表达、Gankyrin表达和CA199表达均是胰腺癌患者预后的独立危险因素(HR=1.250、13.316、3.542、4.089,P<0.05)。结论:胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin表达上调,IQGAP1和Gankyrin表达与胰腺癌患者生存以及预后相关,可能作为胰腺癌患者的预后预测因子,辅助胰腺癌的诊断和临床治疗。

微小RNA-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制

目的探讨微小RNA(miR)-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制。方法选择2018年6月至2019年6月南阳市中心医院收治的45例锁骨上淋巴结转移的乳腺癌和45例无淋巴结转移的乳腺癌作为研究对象。采用转录组织化学方法分析淋巴结转移和无淋巴结转移癌组织中差异表达的miRNA。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析差异表达的miRNA(miR-224);采用慢病毒介导miRNA阴性对照和miR-224过表达在人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)乳腺癌细胞建立对照细胞系(对照组)和miR-224过表达细胞系(miR-224组)。将对照组和miR-224组细胞接种至裸鼠腋下,并于30 d后处死,解剖分析锁骨上淋巴结转移;生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-224靶基因,蛋白质印迹法(Western blot)分析临床样本和细胞系miRNA靶蛋白(PHLPP)1表达水平,组间比较采用t检验。结果转录组化学结果显示,淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(5.08±0.69)明显高于未淋巴结转移乳腺癌组织(2.10±0.69),差异有统计学意义(t=3.109,P<0.05)。荧光定量PCR结果验证显示,淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(2.98±0.41)高于无淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(1.20±0.31),差异有统计学意义(t=2.839,P<0.05)。miR-224组细胞侵袭数量[(119.49±9.72)个]高于对照组细胞侵袭数量[(69.39±6.09)个],差异有统计学意义(t=4.091,P<0.05)。miR-224组细胞接种移植瘤30 d后淋巴结转移病灶数[(25.98±3.12)个]高于对照组细胞接种移植瘤30 d后淋巴结转移病灶数[(10.54±2.39)个],差异有统计学意义(t=3.001,P<0.05)。PHLPP1是miR-224靶基因。淋巴结转移乳腺癌组织中PHLPP1蛋白表达水平(0.36±0.12)低于未淋巴结转移乳腺癌组织中PHLPP1蛋白表达水平(0.94±0.16),差异有统计学意义(t=2.816,P<0.05)。miR-224组细胞PHLPP1蛋白表达水平(0.50±0.12)低于对照组细胞PHLPP1蛋白表达水平(1.04±0.18),差异有统计学意义(t=2.212,P<0.05)。结论miR-224在淋巴结转移的乳腺癌中呈高表达,其可能机制为通过调节PHLPP1蛋白表达参与了乳腺癌的侵袭和转移。