KL47型和KL64型产KPC酶肺炎克雷伯菌的菌株特征和体外药物敏感性分析

目的分析KL47型和KL64型荚膜血清型产KPC酶肺炎克雷伯菌(KPC-KP)的菌株特点,比较多黏菌素B、替加环素、头孢他啶-阿维巴坦对KL47型和KL64型KPC-KP菌株的体外抗菌活性。方法纳入2019年1月—2020年12月南部战区总医院216例患者不同部位分离的280株经PCR确认携带blaKPC的KPC-KP菌株。用wzi测序法进行荚膜血清型测定,采用肉汤微量稀释法检测多黏菌素B、替加环素、头孢他啶-阿维巴坦以及临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果280株KPC-KP中168株为患者单一部位分离的菌株,另112株来自48例患者2~5个不同部位分离到菌株。168株荚膜血清分型以KL47型和KL64为主,分别占44.6%(75/168)和38.7%(65/168),其他荚膜血清型(KL10、KL12、KL19、KL27、KL28、KL105、KL110)占14.9%(25/168),3株(1.8%)菌株无法归类于以上血清型。112株KPC-KP中82株来自37例患者不同部位分离的菌株荚膜血清型均为同一型,另30株来自11例患者不同部位分离的菌株荚膜血清型为不同型;KL47型和KL64型分别为54.5%(61/112)和27.7%(31/112),其他荚膜血清型为12.5%(14/112),有6株(5.4%)无法归类于以上血清型。KL47型和KL64型两组患者患有基础疾病中,除慢性阻塞性肺疾病患病率差异有统计学意义(P<0.01),其余临床危险因素差异均无统计学意义(P>0.05),KL47和KL64型患者14 d及28 d死亡率差异无统计学意义(P>0.05)。136株KL47对多黏菌素B、替加环素和头孢他啶-阿维巴坦敏感率为95.6%、97.8%和98.5%,MIC_(90)分别为16、2、8 mg/L;96株KL64对多黏菌素B、替加环素和头孢他啶-阿维巴坦敏感率为88.5%、91.7%和100%,MIC_(90)分别为16、2、4 mg/L。多黏菌素B和头孢他啶-阿维巴坦对KL47和KL64体外抗菌活性相当(P>0.05),而替加环素对KL47和KL64型KPC-KP菌株体外抗菌活性差异有统计学意义(P=0.04)。结论该院KPC-KP荚膜血清型以KL47和KL64型为主。多黏菌素B和头孢他啶-阿维巴坦对KL47和KL64体外抗菌活性差异无统计学意义,替加环素对KL47具有更好的体外抗菌优势。KL64的高流行率、高耐药率可能带来临床难治愈及高死亡率,亟需感染防控措施的加强及临床流行病学监控。

产KPC酶肺炎克雷伯菌对头孢他啶/阿维巴坦耐药机制研究进展

头孢他啶/阿维巴坦(Ceftazidime/Avibactam,CZA)是头孢他啶和一种新型β-内酰胺酶抑制剂(阿维巴坦)的组合,已被美国食品药品监督管理局和国家市场监督管理总局批准,主要用于治疗复杂的腹部和尿道感染、医院获得性细菌性肺炎和呼吸机相关的细菌性肺炎,特别是由肺炎克雷伯菌引起的感染和炎症。然而,CZA临床应用导致了多重耐药肺炎克雷伯菌的出现。其耐药机制主要有三种:blakpc基因的突变、细菌细胞膜孔蛋白突变和KPC酶的表达量增加。本文就耐CZA的肺炎克雷伯菌流行情况和耐药机制进行综述,旨在为临床防治CZA的耐药菌株提供科学依据,并为新药开发提供指导。

肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌产KPC酶的检测研究

目的了解肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌产KPC酶的情况和耐药关系。方法收集2007年3月至2008年10月临床分离的肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌681株,采用KB纸片法进行药敏试验,以亚胺培南,美罗培南,厄他培南为检测药物,筛选出碳青霉烯类耐药菌株,采用改良的Hodge试验、聚合酶链反应(PCR)扩增检测细菌产KPC酶及基因分型。结果在491大肠埃希菌株和190肺炎克雷伯菌株中,对碳青霉烯类耐药的大肠埃希菌6株,肺炎克雷伯杆菌6株。进行Hodge试验,12株菌全部阴性,聚合酶链反应(PCR)扩增没出现目的基因片段。结论在12株对碳青霉烯类抗生素耐药的细菌中未发现产KPC酶的菌株。据国内的同类研究报道,目前我国主要以产KPC-2酶为主,而且产KPC酶存在地域性差异,课题研究显示本区域暂时没发现产KPC酶的菌株,有待进一步监测研究。

碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌中KPC酶的研究

目的了解上海部分医院肠杆菌科细菌中KPC酶的产生及耐药情况。研究KPC酶的分子生物学特性和blaKPC的转移和传播。方法在上海4所医院收集亚胺培南或美罗培南(纸片扩散法)中介或耐药的肠杆菌科菌株,PCR检测blaKPC、DNA测序、接合转移试验、质粒电泳、Southern blot。结果在上海4所医院共收集到7株对亚胺培南药敏结果(纸片扩散法)中介或耐药的肠杆菌科细菌;PCR检测显示有2株菌株携带blaKPC-2;接合转移试验、质粒电泳、Southern blot试验显示blaKPC-2是由一个50kb大小的质粒携带。结论上海4所医院2006年的KPC酶的检出率还比较低;2株肠杆菌科菌株的blaKPC-2都是由1个50kb的质粒所携带。

碳青霉烯类抗菌药物不敏感的肺炎克雷伯菌产KPC酶监测

目的了解武汉地区肺炎克雷伯菌产KPC型碳青霉烯酶的耐药基因流行状况及型别,为有效监测和控制医院感染提供实验室依据。方法收集2014年6月至2015年10月武汉地区3家三甲医院对碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降的肺炎克雷伯菌53株,均采用Phoenix-100全自动系统进行鉴定和药敏试验,采用改良Hodge试验进行KPC初筛,聚合酶链反应对53株菌分别进行blaKPC基因扩增,阳性扩增测序验证型别。结果 53株菌中38株菌改良Hodge试验阳性,阳性率为71.70%(38/53);32株扩增出780bp左右的目的条带,阳性率为60.38%(32/53);经测序和比对分析为blaKPC-2基因。结论武汉地区对碳青霉烯酶类抗菌药物不敏感的肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶基因主要为KPC-2型,临床感染和控制部门应加强监控,防范产KPC-2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌在院内暴发和流行。

5种药敏方法检测产KPC酶肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性

目的评价临床常用的5种药敏方法对KPC酶介导碳青霉烯类抗生素耐药性的检出率。方法36株经PCR证实产KPC酶的肠杆菌科细菌(包括32株肺炎克雷伯菌、1株大肠埃希菌、1株弗氏枸橼酸杆菌、1株产酸克雷伯菌和1株黏质沙雷菌),用琼脂稀释法、纸片扩散法检测各菌株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的耐药性,ATB G-5药敏卡检测亚胺培南、美罗培南耐药性,VITEK2AST-GN13药敏卡检测亚胺培南、厄他培南的耐药性,BD Phoenix NMIC-109药敏卡检测亚胺培南的耐药性。结果BD Phoenix、ATB、VITEK2、琼脂稀释法、纸片扩散法检测亚胺培南耐药率分别为11.1%(4株)、13.9%(5株)、13.9%(5株)、22.2%(8株)、68.6%(25株);ATB、纸片扩散法、琼脂稀释法检测美罗培南耐药率分别为22.2%(8株)、47.2%(17株)、55.6%(20株);VITEK2、琼脂稀释法、纸片扩散法检测厄他培南耐药率分别为69.4%(25株)、77.8%(28株)和88.9%(32株)。VITEK2和琼脂稀释法厄他培南对所有产KPC酶菌株MIC≥2μg/ml。结论纸片扩散法和琼脂稀释法比仪器法更能检出KPC酶介导的碳青霉烯类抗生素的耐药性,厄他培南可作为筛选产KPC酶菌株的指示药物。

四种清热解毒中药注射液对血培养产KPC酶肺炎克雷伯菌感染的干扰实验及应对策略

目的研究痰热清、清开灵、热毒宁及喜炎平中药注射液对体外血培养产KPC酶肺炎克雷伯菌(KPC酶)感染时产生药物干扰后,血培养阳性报警时间差异以及应对药物干扰策略。方法分别将痰热清、清开灵、热毒宁及喜炎平注射液建立实验组,按照不同浓度注入到血培养瓶内,观察和比较实验组与对照组血培养阳性报警时间。结果痰热清注射液100%、50%浓度实验组与对照组比较,产KPC酶肺炎克雷伯菌阳性报警时间延长为41.9%、25.6%;清开灵注射液100%、50%浓度实验组与对照组比较,阳性报警时间延长为9.3%、4.7%;热毒宁注射液100%、50%、25%、12.5%浓度实验组与对照组比较,阳性报警时间延长为62.8%、51.1%、32.6%、27.9%;喜炎平注射液100%、50%、25%、12.5%浓度实验组与对照组比较,阳性报警时间延长均为0%。结论痰热清、清开灵和热毒宁注射液对血培养产KPC酶肺炎克雷伯菌感染报警时间延长,喜炎平注射液不产生干扰;血培养阳性报警延长时间结果热毒宁>痰热清>清开灵>喜炎平;送检血培养避免药物干扰,并且建立应对策略。

徐州地区三级医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的检测与流行状况分析

目的：了解徐州地区三级医院肺炎克雷伯菌产KPC酶流行状况。方法收集徐州地区三级医院临床分离非重复肺炎克雷伯菌130株，予VITEK-32型全自动微生物分析系统鉴定，筛选出对亚胺培南耐药或中介菌株，对初筛阳性菌予改良Hodge试验进行表型确认，PCR方法检测KPC基因。结果初筛41株肺炎克雷伯菌可疑产碳青霉烯酶，经改良Hodge试验测定35株KPC酶阳性，检出率为26.9%（35/130），PCR方法检测有33株KPC酶阳性，检出率为25.4%（33/130）。结论徐州地区三级医院产KPC酶肺炎克雷伯菌发生率相对较高，需引起临床关注。

大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产KPC酶表型筛查与耐药关系

目的了解浙江省人民医院2008年4月至2010年3月大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率及KPC酶表型阳性的菌株检出率。方法采用VITEK32型全自动微生物分析系统、肉汤稀释法进行药敏试验,检测亚胺培南,美罗培南的敏感性;采用改良的Hodge试验,以厄他培南为指示药物进行碳青酶烯酶表型的筛选。结果在528株大肠埃希菌和336株肺炎克雷伯菌中,对亚胺培南耐药的大肠埃希菌21株,肺炎克雷伯菌97株;对美罗培南耐药的大肠埃希菌21株,肺炎克雷伯菌74株。Hodge试验阳性的大肠埃希菌29株,肺炎克雷伯菌67株。结论浙江省人民医院2008年至2010年肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药率及产KPC酶的检出率已较高,临床应加强检测和监测。

22株耐亚胺培南肠杆菌科细菌KPC酶及整合子分布

目的了解耐亚胺培南的肠杆菌科细菌KPC酶(klebsiella pneumoniae carbapenemase)及整合子分布情况。方法收集南京市鼓楼医院22株耐亚胺培南的肠杆菌科细菌,进行改良Hodge试验,PCR扩增检测细菌KPC酶与整合子基因并行序列分析。结果 22株肠杆菌科细菌中,改良Hodge试验阳性15株(68.2%),KPC酶扩增阳性15株(68.2%),整合子PCR扩增阳性6株(27.3%)。结论 KPC酶的流行需引起实验室及临床的关注。

肠杆菌科细菌KPC型碳青霉烯酶的研究

目的了解某院临床分离的肠杆菌科细菌产KPC型碳青霉烯酶情况及其基因型别。方法收集该院2009—2010年临床分离的肠杆菌科细菌1 801株,经药敏试验筛选出耐药性高的菌株,采用改良Hodge试验和聚合酶链反应(PCR)扩增检测细菌产KPC型碳青霉烯酶情况,并测序分析其基因型别。结果 1 801株肠杆菌科细菌中,有783株(43.48%)对第三代头孢菌素耐药,其中4株还对碳青霉烯类抗菌药物耐药;改良Hodge试验初筛出2株耐药菌株,经PCR扩增证实为碳青霉烯酶blaKPC-2基因。结论该院已出现产KPC-2型碳青霉烯酶耐药基因的肠杆菌科细菌,临床与实验室应加强监测和控制。

阿米卡星与磷霉素治疗产KPC酶细菌的疗效观察

目的了解阿米卡星、磷霉素联合使用和单独使用对产KPC酶细菌的疗效,为临床治疗产KPC酶细菌感染提供依据。方法收集2011年1月-2012年12月检测出产KPC酶20例住院患者资料,采用阿米卡星和磷霉素单用或联用治疗,并对其临床疗效和细菌学清除率进行回顾性统计分析。结果阿米卡星联用磷霉素的临床有效率和细菌学清除率均为71.4%,单用阿米卡星的临床有效率和细菌学清除率分别为57.1和28.6%,单用磷霉素的临床有效率和细菌学清除率分别为33.3%和16.7%。结论阿米卡星、磷霉素单用治疗产KPC酶细菌疗效不佳,但联用后可获得较好的疗效。

产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的检测与耐药状况分析

目的了解该院肺炎克雷伯菌产KPC型碳青霉烯(KPC酶)的情况。方法收集临床分离的肺炎克雷伯菌756株,采用K-B法进行药敏试验,筛选出耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌,采用改良的Hodge试验、PCR检测产KPC酶的肺炎克雷伯菌。结果在756株肺炎克雷伯菌中,检出耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌41株,进行Hodge试验,检出36株KPC酶阳性菌株,阳性率87.8%。PCR扩增检出KPC酶阳性菌株39株。结论该院内发现了产KPC酶的肺炎克雷伯菌,但其分型还有待于进一步检测。

耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌KPC酶检测分析

目的:了解耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌产KPC酶的情况。方法:收集2008年1月-2010年10月浙江省人民医院检验医学中心分离到的亚胺培南和/或美罗培南耐药或中介的肺炎克雷伯菌158株(VITEK-32型全自动微生物分析系统、肉汤稀释法检测),改良Hodge试验进行表型确认,聚合酶链反应(PCR)法检测KPC基因(b laKPC)。结果:158株肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阳性114株,阳性率72.2%;PCR法检测有94株携带b laKPC,阳性率59.5%。结论:本院肺炎克雷伯菌产KPC酶比较多见,应加强监测和检测。

大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产KPC酶表型筛查与耐药关系

目的:了解浙江省人民医院2008年4月-2010年3月大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率及KPC(Klebsiella pneumoniae carbapenemase)酶表型阳性的菌株检出率。方法:采用VITEK32型全自动微生物分析系统、肉汤稀释法进行药敏试验,检测亚胺培南,美罗培南的敏感性;采用改良的Hodge试验,以厄他培南为指示药物进行碳青酶烯酶表型的筛选。结果:在528株大肠埃希菌和336株肺炎克雷伯菌中,对碳青霉烯类药物亚胺培南耐药的大肠埃希菌21株,肺炎克雷伯菌97株;对美罗培南耐药的大肠埃希菌21株,肺炎克雷伯菌74株。Hodge试验结果,大肠埃希菌29株阳性,肺炎克雷伯菌67株阳性。结论:浙江省人民医院2008年至2010年肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药率及产KPC酶的检出率已较高,临床应加强检测和监测。

肺炎克雷伯菌KPC-2酶的临床调查

目的：了解从中国医科大学附属第一医院临床患者分离的肺炎克雷伯菌产生KPC酶的情况.方法：筛选亚胺培南或（和）美洛培南的最小抑菌浓度2~4 μg/mL或（和）抑菌环直径16~21mm肺炎克雷伯菌,采用CLSI推荐的改良Hodge试验进行碳青酶烯类抗菌药物耐药的表型检测,采用聚合酶链反应（PCR）进行KPC-2的基因型检测.结果：从临床分离出的18株肺炎克雷伯菌中有2株Hodge试验阳性,但KPC-2的PCR结果阴性.结论：医大-院临床已经存在对碳青霉烯酶类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌,但具体是哪-类酶尚不清楚,有待进一步研究.

产ESBLs、AmpC、KPC酶的葡萄糖不发酵细菌的耐药性分析及临床分布

目的了解本地区葡萄糖不发酵细菌中泛耐药菌(代表株铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌)在临床标本中的分离与耐药情况,为临床合理使用抗生素提供指导。方法对临床分离的180株葡萄糖不发酵细菌进行分类鉴定和药敏试验,并用纸片扩散法筛选出产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)及碳青霉烯类水解酶(KPC酶)的耐药菌株。结果在葡萄糖不发酵细菌的构成比中,其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)56株(31.1%),产AmpC酶22株(12.2%),KPC酶2株(1.1%);同时产ESBLs和AmpC酶16株(8.9%),同时产ESBLs、AmpC、KPC酶1株(0.6%)。3种主要葡萄糖不发酵细菌对头孢他啶、头孢三嗪、头孢噻肟、哌拉西林的耐药率最高,其中铜绿假单胞菌对阿米卡星、左氧氟沙星、环丙沙星耐药率较低,鲍曼不动杆菌对亚胺培南、左氧氟沙星耐药率较低,嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明、环丙沙星耐药率较低。结论葡萄糖不发酵细菌中泛耐药菌特别是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌均有较高的多重耐药性,临床上应重视葡萄糖不发酵细菌引起的感染,根据药敏试验结果合理使用抗生素。

产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的检测及耐药状况研究

目的本次研究分析产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的检测方法以及耐药情况研究。方法本次研究样本选取吉林省人民医院和吉大一院临床分离的耐碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌,菌株选取50例,研究时间从2016年1月1日至2018年9月1日,对所有的耐碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌株采用Hodge试验以及PCR检测,然后再对其进行药敏试验,判断其耐药状况。结果从50例耐碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌株的检测情况上看,在Hodge试验中,其中KPC阳性菌株41例,阳性率为82.0%;在PCR检测中,检测出KPC阳性菌株43例,阳性率为86.0%。从药敏试验上看,其中对于头孢类药物耐药率为100%,对于阿米卡星药物耐药率最低,为40.0%。结论在本院50例耐碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌株当中,发现了KPC阳性菌株,并且该病菌对于不同药物的临床耐药性不同,对于头孢类药物耐药率较高,具体耐药性还需要进一步检测。

KPC型碳青霉烯酶研究进展

为了对抗产超广谱β内酰胺酶（Extended-Spectrumβ-Lactamases,ESBLs）细菌的耐药性,碳青霉烯类抗菌药物被大量应用,而这又引起碳青霉烯类耐药细菌在全球的产生与流行[1]。肠杆菌科细菌作为医院感染最主要的病原体类型,其对碳青霉烯类抗生素的耐药给全球公共健康带来了巨大的威胁。引起碳青霉烯类抗生素耐药细菌增多的主要原因之一是碳青霉烯水解酶的产生,其中以肺炎克雷伯杆菌碳青霉烯酶（Klebsiella pneumoniae carbape-namase, KPC ） 最为常见。本研究主要综述KPC型碳青霉烯酶的相关进展。

住院患者产CTX-M型ESBLs和KPC的大肠埃希菌感染分布与耐药基因分析

目的了解住院患者产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和碳青霉烯酶(KPC)大肠埃希菌感染的临床分布与耐药情况。方法收集某院2011—2012年临床送检标本分离的多重耐药大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法检测抗菌药物最低抑菌浓度(MIC);聚合酶链反应(PCR)扩增ESBLs和KPC基因,确定CTX-M和KPC基因型别及MLST分型。结果 48株多重耐药大肠埃希菌中单产ESBLs 45株(93.75%),携带blaCTX-M基因者44株(91.67%),其中blaCTX-M-1组基因20株(41.67%)、blaCTX-M-9组基因32株(66.67%),同时携带两组基因者8株(16.67%)。经基因测序确定的基因亚型有CTX-M-14(65.91%,29/44)、CTX-M-55(31.82%,14/44)、CTX-M-15(11.36%,5/44)、CTX-M-3(2.27%,1/44)、CTX-M-24(2.27%,1/44)和CTX-M-65(2.27%,1/44),其中CTX-M-14+CTX-M-55(11.36%,5/44)、CTX-M-14+CTX-M-15(4.55%,2/44)和CTX-M-55+CTX-M-65(2.27%,1/44)。产ESBLs+KPC菌株中2株(4.17%)经PCR扩增均携带blaKPC和blaCTX-M基因,经测序分析1株为CTX-M-14+KPC-2,1株为CTX-M-3+KPC-2。ST131(53.66%)是主要的MLST型别,检测到ST648、ST405、ST167、ST1193等ST型。结论该院大肠埃希菌产ESBLs基因型中CTX-M-14、CTX-M-55和CTX-M-15亚型最常见,存在多种不同亚型;ST131是主要的MLST型别,检测到产KPC-2型碳青霉烯酶菌。