PRDM9 KRAB结构域在减数分裂DSB位点决定中的作用

同源重组是减数分裂过程中的关键步骤,对确保同源染色体正确分离和遗传多样性都有重要意义。重组位点并非随机分布于基因组中,而是被限定在特殊区域,被称为重组热点。在大多数哺乳动物中减数分裂重组位点的决定是由PRDM9介导的。PRDM9首先识别染色体上的特异结合序列,然后催化序列附近核小体的H3K4me3修饰,从而指导SPO11产生程序性的DNA双链断裂。PRDM9主要包括三个保守的结构域:锌指结构域,负责特异性DNA结合;PR/SET结构域,催化H3K4me3修饰;以及KRAB结构域,其功能目前尚不清楚。该研究发现PRDM9的KRAB结构域特异敲除小鼠表现为减数分裂前期I阻滞。在机制上, KRAB结构域特异敲除导致H3K4me3无法在重组热点上形成,继而导致DNA双链断裂产生于基因启动子区域而非重组热点区域。因此, KRAB结构域为PRDM9的组蛋白H3K4甲基转移酶活性所必需。

锌指基因ZNF569的转录活性分析

目的构建GAL4-ZNF569和pCMV-Tag2C-ZNF569重组质粒。通过它控制报告基因的表达情况来确定它的转录激活/抑制活性以及它是否参与了细胞信号途径调控。结果GAL4-ZNF569和pCMV-Tag2C-ZNF569重组质粒转染细胞后发现ZNF569具有转录抑制活性并能抑制SRE和AP-1的转录活性。对ZNF569的分段结构域的转录活性分析表明ZNF569的KRAB结构域和C2H2锌指结构域都具有抑制转录因子转录活性的作用。结论由此笔者得出结论认为ZNF569的KRAB框和C2H2锌指都具有抑制因子作用,为进一步研究ZNF569在真核细胞中的信号调控奠定了一定的实验基础。

小鼠胚胎脑特异表达的新基因bsg3的克隆及初步研究

通过消减差异筛选的方法克隆到一个在小鼠胚胎脑特异表达的基因bsg3(brainspecificgene 3) .它编码的蛋白与人的KIAA0 96 1具有 80 .3%的同源性 .bsg3基因包含一个 16 4 4bp的完整阅读框 ,编码一个含 5 4 8个氨基酸 ,具有 1个KRAB结构域 (kruppel associatedbox)和 13个C2H2型锌指结构域的蛋白 .该基因定位在小鼠第 7号染色体上 ,包含 5个外显子 ,4个内含子 .以bsg3基因全长编码区为探针的原位杂交结果显示 ,bsg3在小鼠胚胎脑及鸡胚脑特异表达 .半定量反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)的结果表明 ,在成体小鼠的组织中 ,bsg3基因脑中表达也较强 .这提示bsg3基因可能在小鼠脑发育中起着重要的作用 .