KRAS单突变及KRAS/TP53共突变在肺腺癌中的治疗及预后分析

目的:比较Kristen鼠肉瘤致癌基因(kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS)突变型肺腺癌患者不同突变状态、分子分型的治疗及其预后。方法:收集2019年04月-2022年04月于蚌埠医学院第一附属医院确诊且接受一线治疗的晚期KRAS突变肺腺癌患者资料,统计TP53共突变情况、分子分型并分析其治疗预后的相关性。结果:随访至2022年4月,KRAS/TP53共突变患者相较于KRAS单突变的患者,中位无进展生存期(median progression-free survival,mPFS)明显缩短(HR=0.613,95%CI:0.396-0.951,P=0.029),差异有统计学意义;化疗联合抗血管生成治疗对比单纯化疗mPFS明显延长,差异有统计学意义(HR=0.593,95%CI:0.355-0.990,P=0.038);化疗联合免疫治疗组对比单纯化疗mPFS明显延长,差异有统计学意义(HR=0.426,95%CI:0.247-0.736,P=0.02);化疗联合抗血管生成治疗组相较于化疗联合免疫治疗组mPFS对比,差异无统计学意义(HR=0.648,95%CI:0.371-1.130,P=0.126)。结论:TP53为晚期KRAS突变肺腺癌患者不良预后因素;G12C和非G12C不同分子分型间的治疗及预后无明显差异;化疗联合免疫或抗血管生成治疗对比单纯化疗可延长晚期肺腺癌患者的PFS,但联合治疗组之间的PFS无明显差异。

肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控KRAS信号通路影响胰腺癌细胞糖酵解功能

目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体对胰腺癌细胞糖酵解的影响及机制。方法 THP-1细胞诱导分化为M0型和M2型巨噬细胞,并提取二者分泌的外泌体(M0 exo和M2 exo)。将胰腺癌细胞CAPAN-2和ASPC-1分为PBS组、M0 exo组、M2 exo组、M2 exo+siKRAS组,分别与等体积PBS、10μg/mL M0 exo、10μg/mL M2 exo、转染KRAS siRNA+10μg/mL M2 exo共孵育。透射电镜观察外泌体结构;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;试剂盒检测葡萄糖摄取率和乳酸生成水平;Western blot检测外泌体标志物、KRAS蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果 THP-1诱导分化为表达标志蛋白Arg-1和IL-10的M2型巨噬细胞,M0 exo和M2 exo具有双层膜结构,粒径100 nm左右,表达外泌体标志蛋白CD9、CD81、TSG101。与PBS组比较,M2 exo组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率力、乳酸生成水平显著增加(P<0.05),KRAS表达以及ERK1/2磷酸化水平显著增加(P<0.001)。与M2 exo组比较,M2 exo+siKRAS组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率以及乳酸生成水平均显著下降(P<0.05)。结论 肿瘤相关巨噬细胞外泌体可通过激活KRAS信号通路促进胰腺癌细胞糖酵解。

KRAS基因3'UTR多态性与云南汉族人群宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的相关性

目的探究KRAS基因中3′U TR区域的rs712和rs7973450位点与云南汉族人群宫颈癌(cervical cancer,CC)和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的相关性。方法共纳入CIN患者461例、CC患者961例及其健康对照983例,采用TaqMan探针法进行基因分型检测,并分析2个SNP位点与CIN及CC的相关性。结果rs7973450位点的A等位基因可能是CIN(P=0.004,OR=0.651,95%CI 0.487~0.871)与CC(P=7.00×10-4,OR=0.667,95%CI 0.529~0.844)发生的保护性因素。rs712位点在CIN组、CC组和对照组间等位基因和基因型分布频率的差异无统计学意义(P>0.017);单倍型分析的结果显示,单倍型rs712Ars7973450G与更高的CIN(P=4.00×10^(-4),OR=1.714,95%CI1.269~2.314)和CC(P=3.84×10^(-5),OR=1.667,95%CI 1.305~2.131)发生风险相关;单倍型rs712A-rs7973450A则与更低的CC发生风险相关(P=0.012,OR=0.790,95%CI 0.658~0.950)。结论位于KRAS基因3U′TR区域的SNP位点rs7973450的A等位基因可能是云南汉族人群CIN和CC发生的保护性因素。

结直肠癌KRAS基因突变与临床病理及实验室特征的关系分析

目的探讨结直肠癌患者克尔斯滕大鼠肉瘤(KRAS)基因突变情况与其临床病理及实验室特征的关系。方法KRAS基因突变检测采用突变扩增系统PCR(ARMS-PCR),将297例结直肠癌患者根据KRAS基因突变情况分为KRAS野生型(KRAS-WT)组与KRAS突变型(KRAS-MT)组。收集患者性别、年龄、原发部位、转移浸润、TMN分期、病理类型、分化程度、免疫组织化学及血清肿瘤标志物等资料,并进行统计学分析。结果297例结直肠癌患者中,KRAS基因总突变率为47.81%(142/297),其中第2号外显子上的位点突变率最高,占35.69%(106/297)。与KRAS-WT组比较,KRAS-MT组原发部位为右半结肠及女性患者占比更高(P<0.05)。第2号外显子突变组、第3、4号外显子突变组和KRAS-WT组在Ki67阳性细胞比例方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。第2号外显子突变组、第3、4号外显子突变组和KRAS-WT组血清CEA、CA199水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论结直肠癌中KRAS基因突变类型与患者不同临床病理与实验室特征之间存在一定的相关性,可为结直肠癌临床诊疗提供线索。

结直肠癌微卫星不稳定状态与KRAS、NRAS、BRAF基因突变和临床病理特征及预后的关系

目的 探讨结直肠癌(CRC)的微卫星不稳定(MSI)状态与KRAS、NRAS、BRAF基因突变、临床病理特征及预后的相关性。方法 选取2015年3月至2020年12月于汕头市中心医院和中山大学肿瘤防治中心收治的经病理确诊为CRC的861例患者作为研究对象,检测其4种错配修复(MMR)蛋白表达、MSI状态,KRAS、NRAS、NRAS基因突变情况。分析MMR蛋白表达、KRAS、NRAS和BRAF基因突变与CRC患者临床病理特征的相关性,MMR蛋白表达与KRAS、NRAS和BRAF基因突变的相关性,并采用COX回归模型探讨CRC患者2年内死亡的独立影响因素。结果 CRC中的MMR蛋白表达总缺失率为12.08%,KRAS基因突变率为42.28%,NRAS基因突变率为2.21%,BRAF基因突变率为6.50%。不同年龄、肿瘤部位、组织学类型、肿瘤最大径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态、CEA水平的患者MMR蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、肿瘤部位、组织学类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态、CA199水平的患者KRAS基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同CEA水平的患者NRAS基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤部位、组织学类型、肿瘤最大径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态的患者BRAF基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MMR蛋白表达与KRAS基因突变呈负相关(r=-0.137,P<0.001)。MMR蛋白表达与NRAS基因突变不相关(r=-0.007,P=0.834)。MMR蛋白表达与BRAF基因突变呈正相关(r=0.162,P<0.001)。淋巴结转移、KRAS突变、BRAF突变、MSI-H是CRC患者2年内死亡的独立影响因素。结论 MSI状态、KRAS、NRAS、BRAF基因突变与CRC的临床病理特征具有相关性,上述指标的检测有助于CRC的生物学行为分析及预后判断。

靶向KRAS蛋白抑制剂的研究进展

KRAS蛋白是由克里斯汀鼠肉瘤病毒基因(Kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS)编码的一种小GTP酶,参与细胞的增殖、分化、迁移和凋亡等活动,被认为是调控细胞生命周期的信号开关。然而KRAS基因容易发生突变导致下游信号通路的过度激活,是肿瘤疾病发生发展的重要因素。KRAS蛋白常见突变位点包括G12、G13和Q61,不同的突变体对蛋白生理功能的影响和主要肿瘤疾病类型具有差异性。KRAS蛋白由于其光滑的表面和对核苷酸的高亲和力一度被认为是“不可成药”的靶点。直到靶向KRAS G12C共价抑制剂索托雷塞(sotorasib)和阿达格拉西布(adagrasib)的上市才打破了KRAS不可成药的现状。文章就KRAS蛋白的结构和功能以及直接靶向KRAS G12C、KRAS G12D、KRAS G12R、KRAS G12S和泛KRAS抑制剂的研究现状、面临的挑战进行综述,旨在为KRAS抑制剂的发展提供有益参考。

健脾为主的中药干预对KRAS突变型Ⅱ~Ⅲ期结直肠癌患者预后的影响

目的观察以健脾为主的中药治疗对KRAS突变型Ⅱ~Ⅲ期结直肠癌患者预后的影响。方法采用回顾性非随机同期对照研究方法,收集2015年1月-2021年12月就诊于上海中医药大学附属龙华医院、复旦大学肿瘤医院闵行分院的116例KRAS突变型Ⅱ~Ⅲ期结直肠癌患者资料,以持续接受中药治疗≥3个月的患者为治疗组,以未接受中药规范治疗或持续时间<3个月的患者为对照组。比较2组患者的中位无病生存期(采用Kaplan-Meier法计算)及1,2,3,5年无病生存率,分析影响患者无病生存期的危险因素。结果治疗组中位无病生存期为23.13个月,较对照组的16.90个月明显延长(P<0.05);治疗组1,2,3,5年无病生存率分别为83%,46%,40%,30%,对照组分别为67%,38%,18%,6%,治疗组无病生存率明显高于对照组(P<0.05)。中药治疗为患者无病生存期的独立保护因素(P<0.05),脉管内癌栓是患者复发转移的独立危险因素(P<0.05),淋巴结分期为N1期的患者相比于N2期患者复发转移的风险更低(P<0.05)。结论健脾为主的中药治疗可有效延长KRAS突变型Ⅱ~Ⅲ期结直肠癌患者的无病生存期,降低复发转移率;脉管内癌栓及区域淋巴结是KRAS突变型Ⅱ~Ⅲ期结直肠癌患者复发转移的高危因素。

基于直肠腔内超声的影像组学模型预测直肠癌KRAS基因突变的应用

目的:探讨基于直肠腔内超声(endorectal ultrasound,ERUS)图像的影像组学模型对直肠癌患者KRAS基因突变的预测价值。方法:本研究共纳入225例就诊于福建医科大学附属协和医院的直肠癌患者,按17∶3随机将患者分为训练组(191例)和测试组(34例)。选择每例患者的清晰且肿瘤浸润最深的ERUS图像,进行手动分割和特征提取,经过降维和筛选后,分别采用logistic回归(logistic regression,LR)、支持向量机(support vector machine,SVM)、随机森林(random forest,RF)3种算法构建模型。绘制受试者工作曲线、校准曲线和决策曲线分析(decision curve analysis,DCA),分别用于评估模型的预测效能、拟合优度和临床价值,并通过DeLong检验比较3个模型的效能差异。结果:经筛选后得到了8个最佳的影像组学特征,训练组和测试组中SVM、LR和RF的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.94、0.93、0.91和0.82、0.88、0.85。经DeLong检验,3个模型的AUC差异无统计学意义(均P>0.05)。DCA结果显示,3个模型均具有一定的临床效益,其中测试组LR模型的临床效益最高。校准曲线显示3个模型均有良好的拟合效果。结论:ERUS图像的影像组学模型对直肠癌KRAS基因突变有良好的预测价值,可作为无创预测直肠癌患者KRAS基因突变的补充方法,有助于指导临床决策。

多巴胺改性水凝胶荷载顺铂抑制KRAS突变肺癌细胞增殖的研究

目的:观察荷载顺铂的多巴胺改性水凝胶对KRAS突变肺癌细胞增殖的影响。方法:以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)与壳聚糖为材料合成注射用水凝胶,化学交联法引入多巴胺形成多巴胺改性水凝胶;细胞共培养研究多巴胺改性水凝胶的溶胀性、生物安全性及载药释放能力;体外共培养研究多巴胺改性水凝胶荷载顺铂对KRAS突变肺癌细胞增殖的影响;裸鼠体内异种移植瘤研究多巴胺改性水凝胶荷载顺铂对移植瘤增殖的抑制作用。结果:多巴胺改性水凝胶具有很强的溶胀性、良好的生物安全性、强大的药物荷载释放能力及敏感的pH组织环境识别力,多巴胺改性水凝胶荷载顺铂给药较单独顺铂给药对体内外KRAS突变肺癌细胞的增殖均具有更强的抑制作用。结论:传统细胞毒药物与多巴胺改性水凝胶结合具有更强的抗肿瘤作用,可能为将来细胞毒药物抗肿瘤治疗提供新的给药模式。

Apc⁃Kras⁃Cre肠腺瘤转基因小鼠模型构建

目的探讨构建Apc⁃Kras⁃Cre肠腺瘤小鼠模型最佳他莫昔芬诱导方式,建立小鼠模型。方法以C57BL/6J野生型小鼠为健康的对照组。以不同浓度、剂量、给药时长他莫昔芬腹腔注射于转基因小鼠,即组1以低剂量他莫昔芬(5 mg/kg)给药1 d,组2以低剂量他莫昔芬(5 mg/kg)给药3 d,组3以高剂量他莫昔芬(50 mg/kg)给药1 d,组4以高剂量他莫昔芬(50 mg/kg)给药3 d,给药4周后观察各组小鼠生存率、体重变化,药物诱导4周后观察各组小鼠肠道长度变化、肠内腺瘤生长数量以及大小,再通过苏木精伊红染色、显微镜下观察肠道组织、腺瘤的生理情况。结果第一部分实验发现雌鼠生存率低于雄鼠(P<0.001),死亡率高于雄鼠(P<0.05),各组不同浓度与剂量之间比较生存率差异具有统计学意义(P<0.01)。各组小鼠体重变化与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.001),组1与组2,组2与组3,组1与组4之间差异各具统计学意义(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。各组小鼠大肠长度与对照组相比未具统计学意义(P>0.05),组1与组3差异具有统计学意义(P<0.05)。各组小鼠大肠内都长有腺瘤,多数于结肠远端,组3与组4腺瘤较多也较大。给药组小鼠大肠病理情况与健康对照组相比出现腺瘤生长,腺体组织排列紊乱、上皮细胞排列不齐,肠道黏膜屏障松散,隐窝分歧不规则,组3、组4也有炎症发生,组4部分区域发现细胞坏死。结论他莫昔芬诱导Apc⁃Kras⁃Cre肠腺瘤转基因小鼠造模成功,并且由此判断,他莫昔芬浓度10 mg/mL、5 mg/kg的剂量诱导1 d的诱导方式最为合适。

KRAS G12C突变胰腺癌1例病例报道及文献回顾

KRAS G12C突变已被证实为多种实体瘤的致癌驱动因子,相关靶向抑制剂近年来取得了突破性进展。本文报道了1例KRAS G12C突变胰腺癌患者应用化疗联合sotorasib治疗,显著延长了患者的无进展生存时间。该病例提示了对胰腺癌患者应用高通量测序技术检测KRAS突变的必要性和化疗联合靶向治疗的有效性及可能性。此外本研究回顾了既往文献中KRAS G12C突变在胰腺癌中的研究进展。

KRAS G12C突变在结直肠癌中的耐药机制及联合治疗策略

KRAS突变是人类肿瘤中最常见的致癌突变之一,占RAS突变的85%左右。人类35%~49%的结直肠癌(colorectal cancer,CRC)和20%~30%的非小细胞肺癌均是KRAS基因突变驱动的。在KRAS G12C突变的研究中发现一个可靶向的半胱氨酸位点,靶向KRAS G12C的新药sotorasib、adagrasib相继开展了临床研究,但在治疗过程中发现肺癌和CRC患者对药物的应答情况不同,治疗相关的耐药机制也存在差异。本文旨在阐述KRAS G12C突变在CRC的固有耐药机制和获得性耐药机制,包括治疗后继发KRAS改变、KRAS上下游信号通路反馈激活、上皮间质转化、细胞周期失调以及免疫抑制等获得性耐药机制,以及克服CRC耐药的多种联合治疗方案,以期实现临床最大获益和改善患者预后。

KRAS基因突变对中晚期原发性肝癌患者经DEB-TACE治疗后生存期的预测价值

目的 探讨Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)基因突变对中晚期原发性肝癌(PHC)患者经药物微球经肝动脉化疗栓塞(DEB-TACE)治疗后生存期的预测价值。方法 回顾性分析2020年1月至2022年1月收治的158例行DEB-TACE治疗的中晚期PHC患者的临床资料,DEB-TACE前均已获取肿瘤组织标本并石蜡包埋,检测KRAS基因突变状态,分析KRAS基因突变状态与患者临床病理特征、DEB-TACE近期疗效及预后生存期的关系。结果 158例患者中检出携带KRAS基因突变的有41例(25.95%),其中2号外显子(exon 2)第12密码子突变38例,第13密码子突变3例。KRAS基因突变与患者肿瘤分化程度、中国肝癌分期(CNLC)、AFP水平、肝内转移明显相关(均P<0.05)。突变型(KRAS-MT)患者的DEB-TACE治疗客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)明显低于野生型(KRAS-WT)患者,分别为31.71%(13/41)比71.79%(84/117)和68.29%(28/41)比86.32%(101/117),差异均有统计学意义(均P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,KRAS基因突变状态预测DEB-TACE疗效的灵感度为78.80%,特异度为76.40%,曲线下面积为0.873(95%CI:0.764~0.936)。KRAS-MT患者中位总生存期(OS)短于KRAS-WT患者(P<0.001)。多因素Cox风险回归分析结果显示,肿瘤低分化(OR=2.014)、CNLC分期Ⅲa期(OR=4.742)、有肝内转移(OR=3.861)、KRAS-MT(OR=5.137)的患者在接受DEB-TACE治疗后死亡风险较大(均P<0.05)。结论 KRAS基因突变与中晚期PHC患者DEB-TACE近期疗效和预后生存期有关,可作为DEB-TACE疗效和预后生存期的预测指标。

KRAS和TP53共突变对肺腺癌生物学行为的影响

目的研究TP53共突变状态对KRAS突变肺腺癌转移倾向、基因组特征及对免疫检查点抑制剂应答等的影响。方法从cBioPortal数据库中下载肺腺癌转移、基因组、免疫治疗相关研究数据,使用R语言筛选出KRAS突变病例并根据TP53突变状态进行分组,使用SPSS统计分析以比较合并野生型TP53或突变型TP53两组患者远处转移倾向、基因组特征、及对免疫检查点抑制剂应答情况的差异。结果研究共纳入KRAS突变肺腺癌2304例,包括1456例TP53野生型和848例TP53突变型。远处转移分析发现,合并TP53共突变显著增加了KRAS突变肺腺癌远处转移发生率(84.6%vs 76.3%,P<0.001)、远处转移病灶个数(3.5 vs 3.0,P=0.009)、远处转移器官的个数(2.9 vs 2.4,P=0.001)。其中,骨(38.7%vs 31.8%,P=0.008)、胸膜(32.5%vs 27.3%,P=0.041)、中枢神经系统(28.2%vs 21.1%,P=0.003)、肝(18.1%vs 13.9%,P=0.040)、远处淋巴结(17.4%vs 13.3%,P=0.034)、肾上腺(15.2%vs 10.2%,P=0.006)、腹内(7.1%vs 4.1%,P=0.013)、胆道(6.9%vs 3.5%,P=0.004)的转移风险大大增加。基因组分析发现,TP53共突变显著增加KRAS突变肺腺癌肿瘤突变负荷、基因组改变分数,以及KRAS突变等位基因的频率。TP53共突变常合并细胞周期相关基因改变(31.9%vs 21.0%,P=0.001);而KRAS单突变则常合并NRF2(33.6%vs 18.1%,P<0.001)及PI3K(45.6%vs 30.9%,P<0.001)通路基因改变。对免疫检查点抑制剂应答的分析发现,合并TP53共突变显著延长了患者的中位无进展生存期(5.0个月vs 2.5个月,P=0.012)。进一步对PD-L1表达进行分析,发现共突变患者PD-L1表达≥1%(78.0%vs 42.0%,P<0.001)或≥50%(54.0%vs 23.2%,P=0.001)的比例显著高于KRAS单突变者。结论TP53共突变显著增加KRAS突变肺腺癌远处转移发生率,显著增加其肿瘤基因组的突变负荷,增加其免疫检查点抑制剂治疗获益。

698例结直肠癌KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变与临床病理特征之间的关系

目的:探讨结直肠癌患者KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA常见的突变类型比例,分析其与临床、病理特征之间的相关性。方法:采用突变扩增阻滞系统技术(ARMS)检测甘肃两家三甲医院收集的698例结直肠癌患者标本的KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变情况,并探究其与临床病理特征之间的联系。结果:KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA突变率分别为51.43%、4.01%、4.87%、3.58%,KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA双突变率为2.9%。KRAS突变与BRAF突变负相关(r=-0.233,P<0.001)、与PIK3CA突变正相关(r=0.172,P<0.001);KRAS在男性、高级别患者中的突变率降低(P<0.05);BRAF突变在右半结肠癌、高级别、有区域淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期患者中更常见(P<0.05);右半结肠癌PIK3CA突变的比例显著升高(P<0.05);KRAS和PIK3CA双突变率在右半结肠癌、有区域淋巴结转移患者中升高(P<0.05)。结论:KRAS、BRAF、PIK3CA突变与性别、原发部位、分化程度、病理分期、区域淋巴结转移存在一定的相关性;KRAS和PIK3CA双突变更易发生区域淋巴结转移。临床工作中应常规检测以上基因突变情况,以明确患者分型及指导治疗方案。

非小细胞肺癌中PD-L1的表达与EGFR、ALK、KRAS基因突变的相关性及预后分析

目的探讨PD-L1在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达状态,分析PD-L1与EGFR、ALK、KRAS的相关性及其与NSCLC预后的关系。方法收集2017年1月-2022年4月第一师医院病理科确诊的164例NSCLC患者,采用免疫组化法及运用二代测序技术分别检测PD-L1的表达和EGFR、ALK、KRAS基因状态,分析NSCLC患者中PD-L1的表达与EGFR、KRAS、ALK基因的相关性及预后。结果PD-L1表达与年龄、性别、吸烟、种族、组织学、分期等均无关(P>0.05);根据相关性分析,PD-L1表达与EGFR基因突变呈负相关(R=-0.251,P<0.01),与ALK基因突变呈正相关性(R=0.232,P<0.01),与BRAF基因突变不相关(R=-0.036,P>0.05);通过1年期的生存性分析,PD-L1表达阳性的患者为67.9%,阴性的患者为84.1%。Kaplan-Meier生存分析:PD-L1阳性表达组的患者低于阴性表达组(χ^(2)=4.505,P<0.05)。结论NSCLC患者中PD-L1表达与肿瘤分期、EGFR和ALK基因突变相关,并且PD-L1阴性表达者相对于阳性表达者有更长的生存期。

KRAS、NRAS、BRAF基因与肠道菌群相互作用在结直肠癌发病机制及诊疗中的研究进展

结直肠癌(CRC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着人类的健康,其发病率和死亡率在我国逐年升高。近年来,随着分子生物学和微生物组学的发展,研究发现KRAS、NRAS、BRAF基因突变以及肠道菌群在CRC的发生、发展及治疗中发挥着重要的作用。本文综述了KRAS、NRAS、BRAF基因在CRC中的作用,探讨了肠道菌群失调对CRC的影响,并分析了KRAS、NRAS、BRAF基因突变与肠道菌群失调的相互作用对CRC发病机制的影响及其潜在的临床应用价值,旨在为CRC的预防、诊断和治疗提供新的思路。

KRAS条件突变小鼠肺腺癌模型的构建

目的:旨在建立基因编辑的小鼠肺腺癌模型,探究肺腺癌在不同时间点的发展情况以及不同性别小鼠成瘤的差异。方法:利用KRAS^(LSL-G12D)条件突变的C57BL/6J小鼠,通过繁衍扩增鉴定后,采用气管插管递送载有环化重组酶的腺病毒(Ad-Cre)到小鼠肺组织,诱导KRAS基因的突变表达,从而引发肺部肿瘤。分别在感染后1~8个月收集小鼠全肺,石蜡包埋切片后进行HE染色,比较不同时间段及不同性别小鼠肺腺癌成瘤情况。结果:随着递送Ad-Cre的时间增加,小鼠肺腺癌成瘤比例增加,在递送Ad-Cre后6个月成瘤率达100%,同时成瘤的数量和大小也随着时间延长而增长。在成瘤的小鼠肺腺癌中,除感染Ad-Cre后1个月的病变表现为不典型增生外,在感染2个月后的成瘤肿块中均形成了浸润性肺腺癌。此外,不同性别的小鼠在肺腺癌成瘤的表现上无明显差异。结论:KRAS^(LSL-G12D)条件突变小鼠通过气管插管递送Ad-Cre能有效构建肺腺癌模型,且不同性别小鼠肺腺癌的成瘤率没有显著差异。

PD-1单抗联合顺铂或吉西他滨化疗对KRAS突变非小细胞肺癌A549细胞移植瘤小鼠模型的治疗作用

目的:探讨程序性死亡受体-1(PD-1)单抗联合顺铂或吉西他滨在KRAS基因突变非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞移植瘤小鼠模型治疗中的作用。方法:构建免疫系统-肿瘤双人源化A549细胞小鼠移植瘤模型,将60只小鼠按随机数字表法分成6组(10只/组),分别为对照组(200μL/kg PBS)、PD-1单抗组(20 mg/kg PD-1单抗)、顺铂组(3 mg/kg顺铂)、PD-1单抗+顺铂组(20 mg/kg PD-1单抗+3 mg/kg顺铂)、吉西他滨组(30 mg/kg吉西他滨)和PD-1单抗+吉西他滨组(20 mg/kg PD-1单抗+30 mg/kg吉西他滨)。TUNEL和DAPI双染色法检测移植瘤组织中细胞凋亡水平,测量移植瘤体积和质量并计算肿瘤生长抑制率,免疫组化法检测移植瘤微血管密度(MVD)。结果:成功构建免疫系统-肿瘤双人源化NSCLC A549细胞小鼠移植瘤模型,PD-1单抗+顺铂组移植瘤的细胞凋亡率、肿瘤生长抑制率均最高,移植瘤体积、质量和MVD均最小,与其他5组小鼠比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:顺铂与PD-1单抗具有协同活性,而吉西他滨拮抗PD-1单抗的治疗作用。提示PD-1单抗联合顺铂对KRAS突变NSCLC A549细胞移植瘤小鼠的疗效更好。

基于Taqman荧光ARMS-PCR技术检测KRAS基因突变方法的建立

一种新型的基于Taqman荧光的ARMS-PCR检测技术用于人石蜡包埋组织样本KRAS基因突变的技术已成功构建,该方法有望为临床用药提供参考依据。针对KRAS基因,研究人员设计了两种特异性引物以及探针,分别针对KRAS的常见突变位点序列和内参基因(GAPDH)的保守序列。随后,他们构建了KRAS Taqman荧光ARMS-PCR检测体系以及测序体系。对200例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)病人体组织样本进行石蜡包埋的检测,并与金标准sanger测序进行对比,以验证结果的统计分析,探讨KRAS基因突变在两种检测方法中的表现。结果显示,该方法能够准确检测石蜡包埋组织样本中的KRAS基因突变,该检测方法的准确度高达100%,与传统的Sanger测序结果完全一致。本研究基于Taqman荧光ARMS-PCR技术构建的检测方法,具有简便、高效、精确的特点,能够有效识别KRAS基因突变。此外,该方法在临床应用方面具有较高的参考价值,适用于推广使用。