肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控KRAS信号通路影响胰腺癌细胞糖酵解功能

目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体对胰腺癌细胞糖酵解的影响及机制。方法 THP-1细胞诱导分化为M0型和M2型巨噬细胞,并提取二者分泌的外泌体(M0 exo和M2 exo)。将胰腺癌细胞CAPAN-2和ASPC-1分为PBS组、M0 exo组、M2 exo组、M2 exo+siKRAS组,分别与等体积PBS、10μg/mL M0 exo、10μg/mL M2 exo、转染KRAS siRNA+10μg/mL M2 exo共孵育。透射电镜观察外泌体结构;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;试剂盒检测葡萄糖摄取率和乳酸生成水平;Western blot检测外泌体标志物、KRAS蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果 THP-1诱导分化为表达标志蛋白Arg-1和IL-10的M2型巨噬细胞,M0 exo和M2 exo具有双层膜结构,粒径100 nm左右,表达外泌体标志蛋白CD9、CD81、TSG101。与PBS组比较,M2 exo组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率力、乳酸生成水平显著增加(P<0.05),KRAS表达以及ERK1/2磷酸化水平显著增加(P<0.001)。与M2 exo组比较,M2 exo+siKRAS组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率以及乳酸生成水平均显著下降(P<0.05)。结论 肿瘤相关巨噬细胞外泌体可通过激活KRAS信号通路促进胰腺癌细胞糖酵解。

肺腺癌组织FAM83A基因表达与预后相关性

目的肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,人类编码的FAM83A基因在肺癌中高表达。本研究探讨FAM83A基因表达与肺腺癌进展和转移关系,为临床肺腺癌治疗提供潜在靶点。方法所有用于生物信息分析的数据均来自癌症数据库TCGA,Bioedit软件用于不同物种FAM83A蛋白保守型对比和分析;信号通路分析软件GSEA预测FAM83A基因调控KRAS信号通路是否参与肺腺癌进展。结果生物信息分析显示FAM83A蛋白有一个300碱基左右的保守功能区域。肺腺癌患者中FAM83A基因表达量排在所有升高基因第2位。A-431细胞染色结果提示该基因主要位于细胞核;RNA-seq表达数据分析提示FAM83A基因在肺腺癌患者中表达高于正常对照组,差异有统计学意义,t=5.46,P<0.001。随着肿瘤级别增加FAM83A表达逐渐增加,但差异无统计学意义,FAM83A基因高表达患者预后差于低表达患者,Z=2.16,P<0.001;吸烟患者FAM83A基因表达高于正常对照组,t=3.45,P<0.001。吸烟与非吸烟患者中FAM83A基因表达差异无统计学意义,FAM83A高表达合并吸烟患者中预后较一般患者更差,t=3.84,P<0.001。通路"Singh KRAS dependency signature"在肺腺癌患者组织明显富集(NES=1.79,P=0.004,FDR q=4.79×10-4),富集分数为0.6。结论 FAM83A基因表达可能与肺腺癌进展及预后密切相关,并可能成为临床肺腺癌治疗的重要干预靶点。

黄芪甲苷保护胃癌前病变大鼠胃黏膜损伤研究

目的:观察黄芪甲苷对胃癌前病变(GPL)大鼠Kras/p53信号通路对程序性细胞死亡调控效应,进而保护GPL大鼠胃黏膜。方法:采用MNNG+饥饱失常法复制GPL大鼠模型,于16周时分组灌胃给药,空白组和模型组(蒸馏水),黄芪甲苷高、低剂量组(80、20mg/kg),连续给药10周,观察各组胃黏膜组织超微结构;Western blot法检测Kras、p53、Caspase-3、Bcl-2、Bax、Beclin1蛋白表达;实时定量PCR检测ATG5、ATG12、Beclin1、LC3基因表达。结果:与空白组比较,模型组GPL大鼠胃黏膜p53、Kras、Bcl-2和Beclin1蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷高、低剂量组大鼠胃黏膜Kras、Beclin1表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。与空白组比较,模型组GPL大鼠胃黏膜Beclin1、ATG5、ATG12和LC3基因表达均显著升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷高、低剂量组胃黏膜Beclin1、ATG5基因表达均显著降低(P<0.01)。结论:黄芪甲苷可通过Kras/p53信号通路调控GPL大鼠胃黏膜上皮细胞程序性细胞死亡,延缓GPL向肿瘤的进展。