食管癌Eca9706细胞中KRT19基因的甲基化及表达

背景与目的:KRT19基因位于17q21.2,编码CK19蛋白。KRT19基因启动子的甲基化在肾癌、神经母细胞瘤中已有报道,而在食管癌中鲜见相关报道。本文研究甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对食管癌Eca9706细胞株生长活性的影响,并探讨5-Aza-CdR对食管癌Eca9706细胞株KRT19基因甲基化及其表达的影响。方法:用MTT比色法检测不同浓度5-Aza-CdR处理前后Eca9706细胞的生长活性;用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bi sulfite restriction analysis,C0BRA)检测应用5-Aza-CdR后与未用药对照组细胞的的KRT19基因甲基化状态;用Western blot法检测应用5-Aza-CdR后与未用药对照组细胞的KRT19基因蛋白的表达情况。结果:5-Aza-CdR对食管癌Eca9706细胞系的增殖有抑制作用,且呈时间、浓度依赖性;食管癌Eca9706细胞株存在KRT19基因启动子区的甲基化;对照组无KRT19蛋白的表达,应用5-Aza-CdR后可以恢复其蛋白表达。结论:5-Aza-CdR抑制食管癌Eca9706细胞的增殖;5-Aza-CdR可以逆转KRT19基因启动子区的甲基化,恢复其蛋白表达,KRT19基因启动子区的甲基化可能是其失表达的重要机制。这为食管癌诊疗提供了一个新的靶点。

miR-642a-5p靶向KRT19调控甲状腺癌细胞TPC-1细胞周期的研究

目的:探讨miRNA调控甲状腺癌细胞TPC-1细胞周期的潜在机制。方法:通过过表达甲状腺癌中异常表达的miRNA,检测甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力和细胞周期。通过miRDB在线分析miRNA的潜在靶标。通过siRNA敲低潜在靶标,检测甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力和细胞周期。通过荧光素酶报告实验检测miRNA与潜在靶标之间的关系。结果:过表达miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著下降(P<0.05)。敲低miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著上升(P<0.05)。过表达miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量上升(P<0.05)、G2-M期和S期的细胞数量下降(P<0.05)。敲低miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量下降(P<0.05)、G2-M期和S期的细胞数量上升(P<0.05)。当敲低KRT19后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著下降(P<0.05)。过表达miR-642a-5p后,KRT19的蛋白水平下降(P<0.05)。敲低miR-642a-5p后,KRT19的蛋白水平上升(P<0.05),miR-642a-5p靶向KRT19的3端非编码区(P<0.05)。敲低KRT19后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力下降(P<0.05)。过表达KRT19后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力上升(P<0.05)。敲低KRT19后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量上升(P<0.05)、G2-M期和S期的细胞数量下降(P<0.05)。过表达KRT19后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量下降(P<0.05)、G2-M期和S期的细胞数量上升(P<0.05)。同时敲低KRT19和miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量、G2-M期和S期的细胞数量无显著变化(P>0.05)。同时过表达KRT19和miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量、G2-M期和S期的细胞数量无显著变化(P>0.05)。结论:miR-642a-5p通过靶向KRT19 mRNA的3端非编码区,降低了KRT19的表达,调控甲状腺癌细胞TPC-1的细胞周期。

Krt19在小鼠早期妊娠子宫的表达和调节

角蛋白19(Keratin19,Krt19)是Ⅰ型角蛋白家族中的一员,为研究Krt19在小鼠早期妊娠过程中的表达及调控,本研究利用原位杂交、免疫组织化学、Western blot、real-time PCR等技术,结合小鼠早期妊娠模型、激素处理模型、延迟着床与激活模型和人工诱导蜕膜化模型,研究了Krt19 mRNA以及蛋白在小鼠子宫中的表达情况。结果显示,Krt19 mRNA和蛋白在小鼠早期妊娠1~4 d的腔上皮和腺上皮中强表达,在5~8 d子宫腔上皮、腺上皮及蜕膜中表达;在延迟着床时,Krt19在子宫腔上皮和腺上皮强表达,注射雌激素激活后,Krt19在腔上皮和腺上皮的表达减弱,在激活的胚胎着床位点下基质细胞中有弱表达;雌激素上调Krt19在子宫中的表达;Krt19在人工诱导蜕膜化的子宫基质细胞中表达。结果表明,Krt19参与了胚胎着床过程,并受类固醇激素的调控,与蜕膜化过程密切相关。

敲减KRT19基因表达对膀胱癌T24细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨敲减KRT19基因表达对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、集落形成的影响。方法对数生长期T24细胞分为shKRT19组和对照组,分别转染shKRT19慢病毒质粒和空载慢病毒质粒,转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测2组细胞KRT19 mRNA相对表达量,采用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率;转染后培养0、24、48、72、96 h时采用CCK-8法检测2组细胞增殖率;转染72 h采用克隆形成实验观察2组培养11 d细胞克隆形成数目。结果转染48 h,shKRT19组细胞KRT19 mRNA相对表达量(0.02±0.00)低于对照组(1.00±0.01)(t=169.741,P<0.001),细胞凋亡率[(18.97±2.12)%]高于对照组[(4.89±0.17)%](t=—10.847,P<0.001),G_(0)/G_(1)期[(57.72±3.59)%]、S期[(9.69±0.49)%]、G_(2)/M期[(32.59±3.65)%]细胞比率与对照组[(52.84±1.76)%、(11.01±0.85)%、(36.15±2.29)%]比较差异均无统计学意义(P>0.05)。shKRT19组转染后培养24、48、72、96 h时细胞增殖率[(181.5±2.1)%、(248.9±4.5)%、(337.9±23.4)%、(421.7±3.2)%]均低于对照组[(206.3±4.9)%、(375.4±6.3)%、(546.3±27.9)%、(778.8±4.4)%](P<0.05)。培养11 d,shKRT19组细胞克隆形成数目[(115±3)个]少于对照组[(147±11)个](t=4.861,P<0.001)。结论敲减KRT19基因表达可抑制膀胱癌T24细胞生长、增殖和集落形成,促进细胞凋亡。

外周血癌细胞中多种肿瘤标记物基因检测预测乳腺癌患者转移和预后的意义

目的:筛选一组可检测乳腺癌循环癌细胞的标记物基因,分析乳腺癌患者相对循环癌细胞数(Lc)与临床病理特征的关联。方法:收集乳腺癌患者142例(乳腺癌组)和正常女性60人(正常对照组)外周血标本。利用CGAP提供的SAGE Genie数据库中数字基因表达演示工具,筛选一组可用于检测乳腺癌循环癌细胞的标记物基因(FAM83A、NPY1R和KRT19)。应用定量巢式PCR方法检测研究对象外周血中标记物基因的表达水平,并通过公式计算患者Lc值。结果:在乳腺癌组患者外周血中肿瘤标记物基因FAM83A、NPY1R和KRT19的表达水平均明显高于正常对照组(P<0.001)。142例乳腺癌患者中有113例(79.6%)至少表达1个肿瘤标记物基因。乳腺癌患者Lc值与其临床分期和远处转移有关联(P<0.001)。Kaplam-Meier生存曲线,Lc值小于2的患者生存时间明显长于Lc值大于2者(P=0.005)。结论:筛选了一组检测乳腺癌外周血循环癌细胞的标记物基因,联合该组基因计算的Lc值与患者临床分期和远处转移有关联,并可辅助判断乳腺癌预后。

基于GEO数据库、TMT蛋白组学筛选绞股蓝对膀胱癌的蛋白靶点

绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)是传统的中药材,对于多种癌症具有显著的疗效。为筛选绞股蓝对膀胱癌的作用靶点,本研究将30只SPF级SD大鼠随机分为模型组、给药组和空白组,通过膀胱灌注N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)建立膀胱癌模型并通过相同的方式进行膀胱灌注绞股蓝干预治疗,在第10周进行取材,通过H&E染色病理切片观察各组膀胱内肿瘤情况以明确药效。通过蛋白质组学串联质谱标签(TMT)10重标记法检测各组膀胱组织的蛋白差异表达情况,结合GEO数据库中3组膀胱癌数据集对作用靶点进行筛选。结果显示,绞股蓝反向调节膀胱癌335种蛋白质,其中包括55种上调和280种下调。GEO的3个膀胱癌表达谱中汇集的差异蛋白(DEGs)包含20种上调和50种下调。将GEO中DEGs与TMT蛋白质组学中膀胱癌趋势相同的蛋白进行汇集,结合绞股蓝反向调节数据,总共筛选获得了3个反向调节靶点,其中包括1种下调的靶点CNN1和2种上调的靶点KRT19、PCP4,并通过蛋白免疫印迹法进行验证。本研究结果表明,CNN1、KRT19和PCP4可能是绞股蓝治疗膀胱癌的潜在靶点,绞股蓝可能通过调节CNN1、KRT19和PCP4来抵抗膀胱癌,这为绞股蓝治疗膀胱癌提供分子机制依据。