区分肺腺癌和肺鳞状细胞癌的潜在基因分析

目的对非小细胞肺癌(NSCLC)潜在基因进行分析,寻找区分肺腺癌(LUAD)和肺鳞状细胞癌(LUSC)的相关基因,探索NSCLC诊断与治疗的更有效方法。方法利用3个基因表达综合(GEO)数据库(GSE4882、GSE7339和GSE40275)分析LUAD和LUSC组织样本中的差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体(GO)富集分析并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络来寻找关键枢纽基因。最后在临床样本中验证关键枢纽基因的差异表达。结果在GSE4882、GSE7339和GSE40275数据集中发现22个LUAD和LUSC的DEGs,通过构建PPI网络发现了6个关键枢纽基因(KRT18、RAN、NME1、NME2、MIF和CFB),进一步在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中分析枢纽基因表达与生存之间的关系,发现KRT18可能是区分LUAD和LUSC的潜在基因,同时构建了KRT18基因突变与LUAD和LUSC患者预后的风险预测模型。最后采用新乡医学院第一附属医院临床组织样本对KRT18表达进行验证。结论KRT18可能是区分LUAD和LUSC潜在基因。

羊绒、羊毛品质相关基因研究进展

羊绒、羊毛品质不仅影响绒山羊、绵羊养殖的经济效益,还影响绒毛纺织品的质量。目前已有大量的研究筛选和鉴定控制绒毛品质性状的主效基因及其表达机制。该文综述了近年来关于KRTs、KRTAPn、HOX、FGF5和ncRNA等遗传因素对绒毛品质的调控作用,为产绒及产毛羊品种的不断优化提供参考,加快遗传选育的进展。

角蛋白4过表达对喉癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨角蛋白4(KRT4)过表达对喉癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。方法 构建KRT4过表达质粒,转染TU177喉癌细胞。实验共分3组:CON组(空白对照组,未转染),Oe-NC组(阴性对照组,转染对照质粒空载体),Oe-KRT4组(目的基因实验组,转染KRT4过表达质粒)。通过RT-qPCR法及Western blot法验证转染效率,通过CCK-8法、平板克隆实验、细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验和流式细胞术检测KRT4过表达对喉癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。结果 RT-qPCR法及Western blot法结果提示Oe-KRT4组KRT4 mRNA和KRT4蛋白表达水平较CON组与Oe-NC组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.000 1)。CCK-8法结果提示Oe-KRT4组细胞活力较CON组与Oe-NC组显著减弱,差异具有统计学意义(P<0.000 1)。平板克隆实验结果提示Oe-KRT4组克隆数显著低于CON组与Oe-NC组,差异具有统计学意义(P<0.000 1)。细胞划痕实验结果提示Oe-KRT4组迁移率显著低于CON组与Oe-NC组,差异具有统计学意义(P<0.000 1)。Transwell小室侵袭实验结果提示Oe-KRT4组细胞穿膜数显著低于CON组与Oe-NC组,差异具有统计学意义(P<0.000 1)。流式细胞术结果提示Oe-KRT4组细胞凋亡率较CON组与Oe-NC组显著增加,差异具有统计学意义(P<0.000 1)。结论 KRT4过表达能显著抑制喉癌细胞的活力、增殖、迁移和侵袭,并促进喉癌细胞的凋亡,因此KRT4有望成为喉癌治疗的潜在生物标志物。

虚拟现实中键盘平曲类型及尺寸对文本输入的影响

目的探究键盘的平曲类型以及键盘尺寸对用户的输入绩效和主观体验的影响。方法采用平、曲两种显示类型,并应用在三种键盘尺寸(39 cm×15 cm、52 cm×20 cm、65 cm×25 cm)得到了六种虚拟键盘。随后招募30名被试对这六种键盘进行了文本输入的被试内实验。结果曲面键盘在沉浸感的真实性维度上显著高于平面键盘(P=0.05),但降低了用户的输入绩效,体现在显著增加了用户的按键触发时间(Keystroke Reaction Time-KRT),P=0.007,并减少了每分钟单词输入数(Words Per Minute-WPM),P=0.001。不同按键尺寸对虚拟键盘也存在显著影响:与小尺寸相比,大尺寸按键键盘会显著提升用户的KRT(P=0.002)并显著降低错误率(P=0.002),但尺寸变化对WPM影响没有显著差异。结论本实验结果将为未来的虚拟现实键盘在样式和尺寸上的设计提供理论依据。

柯乐猪KRT10基因多态性及其与繁殖性状的关联分析

【目的】研究角蛋白10(keratin 10,KRT10)基因多态性对柯乐猪繁殖性状的影响,以提高柯乐猪的繁殖力。【方法】以255头柯乐猪为研究对象,采用PCR产物测序、DANMAN序列比对软件及人工校对相结合的方法鉴定KRT10基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点,利用SHEsis在线软件分析SNP位点的群体遗传特性,通过RNAfold在线工具对SNP位点进行生物信息学分析,使用SPSS 22.0软件中的一般线性模型分析KRT10基因SNP位点与柯乐猪繁殖性状的关联性。【结果】在柯乐猪KRT10基因中共鉴定到3个SNPs位点:第4内含子的g.21643703 C>T和g.21643714 G>A;第5外显子的g.21643741 G>A。g.21643741 G>A突变导致密码子由AAG突变为AAA,编码氨基酸均为赖氨酸(K),为同义突变,引起编码的mRNA二级结构发生改变。3个SNPs位点均检测到3种基因型,g.21643703 C>T和g.21643741 G>A属于中度多态位点(0.25A)属于低度多态位点(PIC<0.25)。g.21643703 C>T和g.21643741 G>A位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),g.21643714 G>A位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05);3个SNPs位点间均不存在强连锁不平衡。KRT10基因3个SNPs位点共产生4种单倍型和10种双倍型。关联分析结果表明,g.21643703 C>T位点对柯乐猪初生窝重、断奶仔数和断奶窝重的影响均达到显著水平(P<0.05);g.21643714 G>A位点对柯乐猪总产仔数和断奶窝重的影响均达到显著水平(P<0.05);g.21643741 G>A位点对柯乐猪总产仔数、产活仔数、断奶仔数和断奶窝重的影响均达到显著水平(P<0.05)。双倍型H3H3对柯乐猪总产仔数、产活仔数、断奶仔数和断奶窝重的影响最明显。【结论】KRT10基因中存在的3个SNPs位点对柯乐猪繁殖性状有显著影响,其中H3H3为有利双倍型,可作为柯乐猪繁殖性状选择的遗传标记。

KRT23激活AKT信号通路促进肝癌细胞增殖

目的探讨角蛋白23(KRT23)高表达促进细胞增殖对肝癌的影响。方法通过生物信息学分析KRT23在肝癌中的表达,过表达及抑制KRT23后采用噻唑兰(MTT)、克隆形成实验分析KRT23对肝癌细胞增殖能力的影响。通过软件预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白免疫印迹法实验分析KRT23与AKT信号通路的调节关系。结果肝癌中KRT23的表达水平明显高于正常对照组织。MTT、克隆形成实验显示KRT23过表达后促进细胞增殖,而下调KRT23后抑制细胞增殖;通过基因富集分析(GSEA),qPCR及蛋白免疫印迹法检测发现KRT23可激活AKT信号通路进而促进细胞增殖,同时在过表达KRT23细胞中抑制AKT信号通路后细胞增殖能力明显下调。结论KRT23调控AKT信号通路影响肝癌细胞增殖,提示KRT23在肝癌的恶性进程中具有重要的作用,在肝癌的发生发展中可能扮演重要角色。

KRT6C在肺腺癌中的表达及临床意义

目的:探究肺腺癌中角蛋白6C(KRT6C)的表达水平及其临床意义。方法:通过数据库UALCAN,分析KRT6C的表达水平及与预后生存的关系,收集临床确诊为肺腺癌患者(未进行过放化疗)75例的癌组织和癌旁组织,制作病理蜡块及切片,通过免疫组化分析KRT6C的表达水平,并分析KRT6C与MKI67及CD39的相关性。结果:KRT6C在LUAD癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.001)。癌组织的KRT6C高表达与不良预后密切相关(P<0.001)。LUAD癌组织KRT6C表达水平高于癌旁正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.05)。KRT6C与MKI67、CD39呈正相关(r=0.3700、0.3058,P<0.05)。结论:KRT6C可作为肺腺癌的一种新型诊断标志物,与临床增殖分子MKI67联合应用,具有很高的临床应用价值。与此同时,KRT6C可能通过影响腺苷通路,影响肺腺癌的进程。

KRT6A调控胰腺导管腺癌细胞生物学行为的作用及作为诊断与预后判断靶标的研究

目的:通过生物信息学分析以及细胞生物学实验研究角蛋白6A(KRT6A)对胰腺导管腺癌(PDAC)诊断、预后判断、免疫微环境以及PDAC细胞PANC1增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法:通过GEPIA平台整合TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库与GTEx(Genotype-Tissue)数据库中的数据,分析KTRT6A在PDAC组织中的表达情况,并通过CIBERSORT工具分析KRT6A表达与PDAC组织中免疫细胞浸润的关系,然后通过GSEA方法研究与KRT6A基因表达相关的肿瘤信号通路。选取长海医院病理科保存的60例PDAC组织与癌旁组织标本进行免疫组化分析,验证KRT6A在肿瘤组织中表达情况;通过干扰RNA敲减PANC1细胞中KRT6A的表达,采用CCK-8实验以及流式细胞术检测敲减KRT6A对细胞的增殖、凋亡的影响。结果:利用TCGA与GTEx数据库数据分析发现,KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,且与患者较差的生存期存在关联(P=0.015)。利用CIBERSORT软件以及GSEA分析发现,KRT6A高表达的PDAC组织中M2型巨噬细胞浸润性升高(P=0.034),且与Wnt通路(NES:1.7359272,P<0.05)、磷酸戊糖途径(PPP)(NES:1.5613053,P<0.05)等信号通路上调有关联(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果进一步验证了KRT6A在PDAC组织中呈高表达(P<0.001)。增殖和凋亡实验发现,干扰KRT6A能够显著抑制PANC1细胞的增殖(P<0.05)以及凋亡(P<0.001)。结论:KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,敲减其表达能够抑制PANC1细胞的增殖和凋亡,具有作为PDAC诊断与预后判断新靶标的潜力。

KRT18与mRNA及长链非编码RNA互作调控椎间盘髓核细胞损伤的机制

背景:椎间盘中差异表达的RNA结合蛋白在椎间盘退变中发挥着关键作用,其中RNA结合蛋白KRT18水平的降低与椎间盘退行性病变相关,但其在椎间盘髓核细胞中的具体作用尚未完全确定。目的:探讨KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合互作对椎间盘髓核细胞的影响及机制。方法:对因腰部骨折或椎间盘退行性病变而接受椎间融合术的患者进行人体髓核组织取样获得正常髓核细胞和退变髓核细胞,并进行iRIP-seq、功能富集分析以及DNA微阵列分析,随后根据分析结果在髓核细胞中敲低KRT18,通过蛋白免疫印迹及qRt-PCR在蛋白和RNA水平检测相关基因水平的表达。结果与结论:通过iRIP-seq分析发现GUAAUC和AGCCUC序列中存在大量的KRT18结合位点,表明KRT18可参与调控RNA的转录、翻译、稳定性或在细胞信号传导途径中发挥作用。其能够与成熟的mRNA稳定结合,其中表达较高的基因包括CRLF1及IGFBP4等,同时与其结合的长链非编码RNA的峰值基因包括SNHG25、SNHG12、NEAT1、USP32、EIF4A2和CDH4,这些基因多涉及细胞凋亡、炎症等多种生物过程,并且能介导细胞外基质代谢的相关通路,KRT18能够调控它们的稳定性、转运、翻译、剪接等多个方面的功能,进而影响基因的表达和细胞功能。实验结果验证了在髓核细胞中敲低KRT18,细胞外基质代谢水平被抑制出现失衡,导致体外椎间盘退变。该研究首次从KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合的角度探讨其调控机制,并推测了KRT18在椎间盘退变发病机制中的潜在功能,为今后KRT18关键功能的研究奠定了基础。

防城港二期核电厂KRT报警功能定位与阈值研究

针对KRT系统报警功能的定位及报警阈值设置问题,在防城港二期工程设计中开展了一系列分析研究,确立了“工况梳理-功能及策略确定-后果评估-报警定值”KRT报警阈值设计及论证流程,并基于设计逻辑,合理保守地确定多个综合性KRT报警阈值,提升了电厂辐射监测安全性。

地榆槐花汤沉默KRT17基因调控结肠癌细胞迁移、侵袭、糖酵解的机制研究

目的:探究地榆槐花汤通过沉默KRT17基因对人结肠癌细胞活力、迁移侵袭能力和糖酵解的影响。方法:用空白对照组和低、中、高(10 %、15 %、20 %)体积分数(V/V)地榆槐花汤含药血清作用于体外培养的人结肠癌HCT116细胞,CCK8法检测细胞的活力,Transwell检测迁移和侵袭,糖酵解试剂盒检测葡萄糖及乳酸水平;通过GEO、GEPIA数据库筛选结肠癌中的差异表达基因KRT17,检测地榆槐花汤对KRT17的影响及KRT17对结肠癌细胞活力、迁移、侵袭和糖酵解水平的影响;检测地榆槐花汤/KRT17轴对细胞的活力、迁移、侵袭及糖酵解水平的影响;结果:地榆槐花汤可抑制结肠癌细胞活力、迁移、侵袭及糖酵解水平(P<0.05),且呈剂量依赖性;KRT17基因在结肠癌中高表达并可以促进结肠癌细胞活力、迁移、侵袭及糖酵解水平(P<0.05);地榆槐花汤可以抑制KRT17的表达(P<0.05),且过表达KRT17可以逆转地榆槐花汤对结肠癌细胞活力、迁移、侵袭及糖酵解的抑制作用(P<0.05)。结论:地榆槐花汤可以通过调控KRT17基因表达抑制结肠癌细胞活力、迁移、侵袭,促进糖酵解。

自发突变致先天性厚甲症-K6a

患儿女,4个月。因双手指甲增厚4个月就诊。患儿出生后3 d即开始出现双手指甲增厚、变黄;4个月龄时,双手足20甲均增厚,呈爪状;随访至8个月龄时,双手指甲下充满硬性角质样物质,呈楔形增厚,右手食指、左足拇趾掌侧出现角化;基因检测:KRT6A基因第7外显子存在一个杂合突变c.1390A>C(p.T464P),患儿父母及其他家属均无相关症状,且其父母基因检测回报未发现该突变位点,结合本患儿临床表现和基因结果,诊断先天性厚甲症(PC-K6a)。

子宫内膜癌中lncRNA KRT7-AS的表达及其对HEC-1A细胞增殖的影响

目的:探索子宫内膜癌(EC)中长链非编码RNA KRT7-AS的表达及其对HEC-1A细胞增殖的影响。方法:采用在线数据库检测分析KRT7-AS在EC及癌旁正常组织中的表达;用RT-qPCR法检测人子宫内膜癌细胞系HEC-1A、HEC-1B、KLE、B-MD-1C细胞中KRT7-AS的表达;分别构建KRT7-AS敲低(shKRT7-AS)和对照(shCtrl)慢病毒。慢病毒感染HEC-1A细胞并培养5 d后,采用RT-qPCR检测敲低效率,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期和凋亡。结果:在EC组织中,KRT7-AS表达高于癌旁组织(P<0.05),KRT7-AS高表达患者的总生存数低于低表达患者(P<0.05)。KRT7-AS敲低组的HEC-1A在第5天增殖速率显著降低(P<0.05)。KRT7-AS敲低导致HEC-1A细胞停滞于G0/G1期(P<0.05);细胞凋亡比例则显著增加(P<0.05)。结论:KRT7-AS异常高表达促进EC的发展。

KRT16在长毛兔毛囊发育过程中的表达规律及功能探究

旨在探究KRT16在长毛兔毛囊发育过程中的表达规律及功能。本试验选取12只健康的6月龄皖系长毛兔,于剪毛后在生长期、退行期和休止期选取背部皮肤采样。通过克隆得到兔KRT16基因的编码序列,利用生物信息学软件对KRT16编码序列(CDS)的生物学特性进行初步分析。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析KRT16在毛囊不同时期表达量。在毛囊毛乳头细胞(dermal papilla cell, DPC)中过表达和敲低KRT16,探究KRT16对毛囊生长发育相关基因的调控作用,以及对DPC增殖的影响。结果显示,KRT16基因的编码序列全长1 431 bp,可编码476个氨基酸,在不同哺乳动物中表现出高度同源性。实时荧光定量PCR结果显示,在毛囊发育周期中,KRT16在毛囊发育周期呈现出不同的表达水平,在生长期高表达。通过在兔毛乳头细胞中过表达与敲减KRT16,检测毛囊发育相关基因的表达水平变化,过表达KRT16后,SFRP2和TGFβ1基因的mRNA表达量极显著下降(P<0.01),BCL2、CCND1、EGF、LEF1和CTNNB1基因的mRNA表达量极显著提高(P<0.01);而敲降KRT16后,SFRP2和TGFβ1基因的表达量极显著提高(P<0.01),BCL2、CCND1、EGF、LEF1和CTNNB1基因的表达量极显著下降(P<0.01)。同时,KRT16能够显著促进毛乳头细胞增殖。综上表明,KRT16参与毛囊周期性发育过程,并能够调控毛囊生长发育相关基因,促进毛乳头细胞增殖。该研究通过对KRT16基因功能的初步研究,为长毛兔毛囊发育的基础研究提供参考,同时为毛囊发育相关基因的功能研究提供依据。

KRT15通过Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞增殖与侵袭并抑制铁死亡

乳腺癌是女性最常见的癌症类型。既往研究表明,角蛋白15(Keratin 15,KRT15)参与调控多种恶性肿瘤的发生发展。然而,目前KRT15在乳腺癌中的调控机制尚不清楚。本研究中,我们发现在乳腺癌细胞过表达KRT15可促进其增殖、侵袭和上皮-间质转化,并抑制凋亡,而敲减KRT15则表现出相反的表型。此外,通过Western blot和铁比色检测发现KRT15抑制乳腺癌细胞铁死亡,KRT15过表达的乳腺癌细胞Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达量增加。因此,KRT15可能通过增强Wnt/β-catenin通路抑制铁死亡在乳腺癌发展中发挥作用,提示KRT15是乳腺癌的潜在驱动基因。

人源Krt5促进斑马鱼成纤维细胞丝状伪足形成和伤口愈合

目的:探究斑马鱼角蛋白Krt5和M1/M2型巨噬细胞极化因子调节斑马鱼下颌和心脏芽基可塑性再生过程的机制。方法:在斑马鱼胚胎成纤维细胞PAC2中过表达人源Krt5,添加4个代表性的巨噬细胞极化因子蛋白。在检测蛋白表达情况后,免疫荧光法观察Krt5和F-actin在PAC2细胞的分布变化;细胞划痕实验检测PAC2细胞迁移能力;转录组测序和免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析Krt5调控网络。结果:Krt5围绕着细胞核,在胞浆成束成网分布并扩展到细胞质膜;过表达Krt5增加鬼笔环肽标记的F-actin代表的细胞丝状伪足形成,并加快细胞迁移愈合;转录组分析显示,Krt5明显增加Rac2/Rhov、NF-κB、Mylkb、Ifnphi1、IL-13和IL-11的转录,降低多个胶原蛋白、肌动蛋白和TGF-β家族基因转录,同时IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10诱导处理总体上与Krt5作用一致;IP-MS证实Krt5与α-辅肌动蛋白(Actn1)和非肌肉肌球蛋白重链(Myh9b,Myh10)紧密结合。结论:Krt5可能通过与肌动蛋白相互作用激活Rac/Rho机制从而促进细胞生成丝状伪足,重塑细胞因子受体结构与巨噬细胞极化因子的相互作用。

长链非编码RNA KRT7-AS在子宫内膜癌中的表达及对HEC-1A细胞增殖的影响

目的 探索长链非编码RNA KRT7-AS在子宫内膜癌中的表达及对HEC-1A细胞增殖的影响。方法 在线数据库分析KRT7-AS在子宫内膜癌及癌旁(正常)组织中的表达;用实时定量PCR(RT-qPCR)检测人子宫内膜癌细胞系KLE、HEC-1A、HEC-1B、B-MD-1C细胞中KRT7-AS表达;分别构建KRT7-AS敲低(shKRT7-AS)和对照(shCtrl)慢病毒。慢病毒感染HEC-1A细胞并培养5 d后,采用RT-qPCR检测敲低效率,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期和凋亡。结果 子宫内膜癌肿瘤组织中KRT7-AS表达明显高于癌旁组织(P<0.05),KRT7-AS高表达患者的总生存数低于KRT7-AS低表达患者(P<0.05)。KRT7-AS在HEC-1A、HEC-1B、B-MD-1C中高表达,而在KLE细胞系中低表达。MTT结果显示,KRT7-AS敲低组的HEC-1A在第5天增殖速率显著降低(P<0.01)。流式细胞检测结果表明,KRT7-AS敲低导致HEC-1A细胞停滞于G0/G1期(P<0.01);而细胞凋亡比例则显著增加(P<0.01)。结论 KRT7-AS在子宫内膜癌中的异常高表达可能促进了子宫内膜癌的发展。

基于PC的运动视觉一体化开放控制平台设计

为了更方便地在运动控制系统中集成机器视觉,简化系统复杂程度,节约控制系统成本,借助Windows操作系统的实时拓展套件KRTS(Kithara real-time suite),在一台多核PC上,建立运行实时任务的实时子系统.该系统能够与运行非实时任务的Windows系统并行运行.使用通用的以太网卡进行运动控制数据与图像数据的传输,取代了运动控制卡、图像采集卡等专用硬件.开发了运动控制与机器视觉一体化解决方案,实现了控制平台的标准化、通用性和网络化,系统最大实时响应时间为36.96μs.基于该平台,开发了视觉引导的DELTA高速分拣系统.

一个表皮松解性掌跖角化症家系的KRT9基因突变研究

目的对1例表皮松解性掌跖角化症患者进行家系调查及基因突变分析。方法收集患者临床资料,提取家系中患者及父母的外周血DNA,进行全外显子组高通量测序,Sanger测序验证位点基因。结果基因检测显示先证者及其母亲的KRT9基因1号外显子发生c.482A>G(p.Asn161Ser)错义突变,其父亲未检测到突变。结论KRT9基因1号外显子发生c.482A>G(p.Asn161Ser)错义突变为该家系表皮松解性掌跖角化症的发病原因。