K562细胞多重耐药机制的实验研究

目的探讨K562细胞多重耐药性形成的分子机制。方法采用MTT法分别测定K562及阿霉素耐药的K562细胞对顺铂的耐药程度,采用RT-PCR检测细胞表面MDR、MRP、GST及MGMT分子表达水平,并确定其与耐药性的关系。结果顺铂对K562细胞的抑制率明显高于阿霉素耐药的K562细胞,同时阿霉素耐药的K562细胞的表面MDR、MRP、GST及MGMT的表达明显增高。结论MDR、MRP、GST及MGMT的高表达是K562细胞形成多重耐药性的重要机制之一。

ABL SH3-T79Y突变体联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响

目的分析慢性粒细胞白血病(CML)BCR-ABL蛋白的SH3结构域突变体(ABL SH3-T79Y)联合伊马替尼(IM)在体内外对CML细胞增殖的影响,并初步探讨其发挥作用的机制。方法构建重组腺病毒载体SH3-T79Y突变体,将其联合IM处理K562/G01细胞后,采用克隆形成实验检测细胞克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期,分析K562/G01细胞体外增殖能力的变化。SH3-T79Y联合IM处理KCL22细胞,构建BALB/c裸鼠皮下实体瘤模型,计算皮下瘤形成率,摘取瘤体进行病理学检查,分析KCL22细胞体内增殖能力的变化。SH3-T79Y联合IM处理K562/G01细胞后,采用Western blotting检测p-BCR-ABL、BCR-ABL、p-Crk L、Crk L、Cyclin D1蛋白的表达水平,分析联合作用影响CML细胞增殖的机制。实验中以PBS、腺病毒空载体及IM单独处理细胞作为对照。结果相较于三个对照组,SH3-T79Y联合IM处理K562/G01细胞后,细胞克隆形成率(28.74%±6.64%)明显降低(P<0.05),细胞周期阻滞于S期。联合处理KCL22细胞后,KCL22-BALB/c裸鼠皮下实体瘤模型成瘤率为16.7%,明显低于IM单独处理组(33.3%)和PBS对照组(100%),瘤体病理学检查见大量增殖的瘤细胞;Western blotting检测结果显示联合处理后K562/G01细胞p-BCR-ABL、p-Crk L、BCRABL、Crk L及Cyclin D1的表达均降低。结论 SH3-T79Y联合IM通过抑制BCR-ABL、Crk L磷酸化和降低Cyclin D1表达,在体内、体外发挥了抑制CML细胞增殖的效应。

人参总皂苷对白血病细胞K562凋亡及生存素表达的影响

目的探讨人参总皂苷（TSPG）对人白血病细胞株K562生长和凋亡的影响及其可能机制。方法采用噻唑兰比色法（Mar）观察TSPG对K562细胞生长的影响；流式细胞仪观察TSPG对细胞凋亡的影响；用RT-PCR检测TSPG诱导K562细胞凋亡中生存素（Survivin）基因的表达情况。结果TSPG对K562细胞生长有抑制作用，呈剂量依赖关系（P〈0．05）；10、100、200μg／ml组细胞凋亡率分别为16．67％、23．78％、33．98％，药物组与对照组差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）；随着TSPG浓度升高，Survivin基因的表达水平逐渐下调（P〈0．05）。结论TSPG可以抑制人白血病细胞的生长并诱导其凋亡，其机制可能与下调Survivin基因的表达有关。