KSOM无血清培养液在绵羊胚胎体外培养应用的研究

本文利用KSOM、TCM-199+20％人血清和KSOM+20％人血清培养绵羊体外受精胚胎,以研究KSOM作为绵羊胚胎体外培养无血清培养液的可能性。实验结果说明,KSOM支持绵羊胚胎早期发育至囊胚期,而在KSOM中添加血清后,胚胎可发育至孵化囊胚,而且孵化囊胚率高于常用的TCM-199+血清(24％vs 7％)(p<0.05)。说明KSOM可以用于绵羊胚胎早期发育的无血清培养液。

培养液及血清浓度对山羊孤雌胚胎体外培养的影响

试验比较了在SOFaa ,CR1aa ,mCR1aa 3种培养液中添加不同浓度的成年山羊血清 (NGS)对山羊孤雌胚胎进行体外培养的效果。结果表明 :在 3种培养液中 ,添加 10 %的NGS对山羊孤雌胚胎的体外发育效果较好 ,囊胚率分别可达6 2 .79% (81/ 12 9)、5 3.5 2 % (38/ 71)、13.6 4 % (12 / 88) ;mCR1aa组囊胚发育率和囊胚细胞数显著低于SOFaa组和CR1aa组 ,SOFaa组优于CR1aa组 ,但SOFaa组和CR1aa组间无显著差异。在现有试验条件下 ,以在SOFaa培养液中 ,山羊孤雌胚胎的体外培养的第 72小时时加入 10 %的NGS的发育效果较好 ,囊胚率可达 6 2 .79%。

骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖的促进作用

本文通过制备小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液(serum-free murine bone marrow endothelial cell conditioned medium, mBMEC-CM),经超滤分为分子量>10 kDa组分和<10 kDa组分,分别观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞集落生成的影响。用Wright’S Giemsa染色计数内皮细胞集落及检测骨髓内皮细胞的vWF,通过[3H]- TdR掺入量,观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的影响,并用分子杂交方法检测内皮细胞表达的细胞因子,从几个方面来研究mBMEC-CM对骨髓内皮细胞增殖的作用。结果显示,骨髓内皮细胞vWF 检测阳性。mBMEC-CM原液及其分子量>10 kDa组分能刺激骨髓内皮细胞集落增殖,且能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR 掺入量;分子量<10 kDa组分对骨髓内皮细胞集落增殖无明显刺激作用,也不能增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。外源加入IL-6、IL-11、SCF、GM-CSF、VEGF、bFGF 6种细胞因子能明显刺激骨髓内皮细胞集落增殖,SCF、VEGF、bFGF能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。Atlas array膜杂交实验显示骨髓内皮细胞内源性表达GM-CSF、SCF、MSP-1、endothelin-2、thymosin β10、connective tissue GF、PDGF-A chain、MIP-2α、PlGF、neutrophil activating protein ENA-78、INF-γ、IL-1、IL-6、IL-13、IL-11、inhibin-α等细胞因子的mRNA。上述结果提示,骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖具有促进作用。

人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性

目的 :探讨人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性。方法 :用倒置显微镜和MTT法观察人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长和增殖变化。结果 :人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液条件下可以生长和增殖 ,但与含血清培养液相比 ,其增殖速率变缓 ,分化明显。结论 :无血清培养液可应用于人牙周膜成纤维细胞的体外培养和实验研究中。

Marc-145细胞无血清培养液组分的优化筛选

目的:对Marc-145细胞无血清培养液组分及浓度进行优化筛选。方法:采用Plackett-Burman设计和中心组合旋转设计对不同的营养成分进行优化筛选。结果:经Plackett-Burman设计,利用20组实验对14种不同营养成分进行考察,发现孕酮、抗氧化试剂、乙醇胺、维生素B6、维生素B12和脂肪酸复合剂对Marc-145细胞无血清悬浮生长的比生长速率有显著影响;针对该6种因素进行中心组合旋转实验设计,利用53组实验筛选出它们的最优使用浓度分别为孕酮5.5 mg/L、抗氧化试剂250μL/L、乙醇胺2.1 mL/L、维生素B122.86 mg/L、维生素B644μg/L和脂肪酸复合剂215μL/L。结论:经2种实验设计方法优化,确定了Marc-145细胞无血清培养液组分及最适浓度,为无血清悬浮培养Marc-145细胞及增殖猪繁殖及呼吸综合征病毒提供了实验基础。

不含人血清培养液在体外淋巴细胞转化试验中的应用

对不含血清培养液与含人ＡＢ型血清培养液进行体外淋巴细胞转化试验（３Ｈ－ＴｄＲ掺入法）比较。结果表明两者无显著差异（Ｐ＞０．０５）。提示用不含血清培养液测定淋巴细胞转化同样能获得良好的结果。

不同犊牛血清配制PBS培养液培养小白鼠胚胎的效果

不同犊牛血清配制ＰＢＳ培养液培养小白鼠胚胎的效果王文英，马世援，仲跻峰，宋杰，刘云波（山东省农业科学院畜牧兽医研究所济南２５０１００）（山东省医学科学院实验动物中心）在体外培养条件下，犊牛血清对维持早期胚胎的生活力是非常重要的。因此在胚胎移植实践中，...

肺癌组织培养液和病人血清对自身T细胞集落形成能力的影响

作者观察了10例肺癌病人围术期的肺癌组织、正常肺组织培养液和血清对自身外周血T细胞集落形成能力的影响,并以14例正常人的血清作为对照。结果显示,肺癌病人在去肿瘤负荷前的T细胞集落产率为160.73土124.02/10~5,既低于正常人的397.81土133.89/10~5,也低于去肿瘤负荷后的306.53土79.86/10~5(P<0.001)。术前病人的血清对T细胞集落的抑制率为46.97±18.06％。术后则下降至26.68土22.67％(P<0.01)。加进肺癌组织培养液时,病人的T细胞集落产率为224.83士104.05/10~5,正常肺组织培养液则为323.12土125.27/10~5(P<0.001),肺癌组织培养液和病人血清两者对T细胞集落产率的抑制活性呈正相关关系(r=0.817,P<0.005)。作者认为,肺癌组织能产生细胞免疫抑制物质进入血循环,导致病人T细胞集落形成能力明显下降。手术根治性切除肺癌组织,能有效地解除T细胞集落形成能力受抑制的情况。

无血清培养液流感病毒分离效果分析

目的对比分析有无血清培养液流感病毒分离效果。方法收集流感哨点医院发病3天内流感样病例咽拭子720份,采用荧光定量PCR法检测流感病毒核酸及分型,犬肾细胞(MDCK)培养法进行病毒分离,细胞病变观察和微量血凝实验(HA)检测病毒是否分离成功并测定HA价。结果720份标本中病毒核酸阳性130份,阳性率为18.06%。130份阳性标本,采用含血清培养液病毒分离阳性68份,阳性率为52.31%(68/130),其中H1N1亚型6份,H3N2亚型2份,BV亚型58份,BY亚型2份;无血清培养液病毒分离阳性100份,阳性率为76.92%(100/130),其中H1N1亚型12份,H3N2亚型21份,BV亚型63份,BY亚型4份。两种方法分离差异有统计学意义(χ2=17.23,P<0.01),其中含血清培养液培养后无血凝滴度标本32份,用无血清培养液培养后血凝滴度在1 1~1 256,且BV和BY亚型血凝滴度较高。结论无血清培养液较有血清培养液流感病毒分离效果更好。

培养液中不同浓度的小牛血清对前列腺癌细胞增殖的影响

目的 培养液中不同浓度的小牛血清对前列腺癌细胞增殖的影响。方法 用含有不同浓度小牛血清的细胞培养液培养人前列腺癌细胞系(PC-3)和人雄激素非依赖型前列腺癌细胞系(PC-3M),培养3天后,进行细胞记数并用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清液中血管生成素的含量。结果 (1)不同浓度的小牛血清对前列腺癌的增殖有不同的影响,浓度越高增殖速度越快;(2)上清中的血管生成素与细胞增殖结果呈正相关。结论 培养液中血清含量高细胞的增殖速度快;外源血管生成素的缺乏能够刺激细胞分泌更多的血管生成素来维持细胞的增长。

无血清培养液培养大肠癌病人外周血来源树突状细胞

目的使用无血清培养液培养大肠癌病人外周血来源树突状细胞（DC）。方法采集大肠癌病人外周血分离出单核细袍。加入分重组人白细胞介素-4和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子的无血清培养液进行体外诱导培养，培养7d后获得DC。显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测细胞表型CD1a，CD14，CD80，CD83，CD86和HLA—DR的表达。结果无血清培养液培养的细胞呈毛刺状，流式细胞仪检测细胞表达CD1a、CD80、CD86和HLA-DR，不表达CD14、CD83，符合DC的典型特征。结论无血清培养液可以从大肠癌病人外周血诱导培养出DC。

杂交瘤细胞在无血清培养液中的长期培养

应用补充了胰岛素,转铁蛋白、二氧化硒、乙醇胺和2-巯基乙醇的无血清培养液(IT-SEM),以培养杂交瘤细胞系AU_(14-1)获得成功。该细胞在这种培养液中生长并分泌单克隆抗体已有四年余,可与在含血清培养液中相比;亲本细胞小鼠骨髓瘤NS-1在ITSEM中存活不超过五天。杂交瘤细胞的无血清培养上清经一步硫酸铵沉淀,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析证明为IgG;;经免疫莹光(IF)鉴定该抗体仍具有抗小鼠宫颈癌,(U_(14))的结合特异性。

培养液中血清的含量对原代兔婴肾细胞生长的影响

组织培养技术应用广泛,但是组织培养成本高,特别是小牛血清,即价格昂贵又日趋短缺。培养原代兔婴肾细胞通常用含10%小牛血清的199培养液,培养2天左右换液,4~7天长成单层细胞。我们在实践中观察到细胞贴壁和生长速度似乎与培养液中血清含量关系密切,特进行本实验,探索节省血清的培养方法。按常规取出兔婴双侧肾脏,将肾皮质组织放入10 ml小瓶中,剪成约1mm^(3)大小的碎块,加入0.25%胰酶-0.02%EDTA液,于37℃消化20~30分钟。然后倾去消化液,用Hank′s液洗一次,加2~3 m1培养液,以毛细吸管将碎块吹打成乳糜状,再加培养液至10ml,静置数分钟,待未吹散的组织块沉降后,收集上部的细胞悬液。按此方法重复2次后,弃去沉降物,将几次收集的细胞悬液混合均匀,计数。培养采用含15%小牛血清的199培养液,其中含100u/ml青霉素和10ug/m1的链霉素。

视网膜神经节细胞无血清上清培养液诱导大鼠视网膜干细胞的分化

目的探讨视网膜神经节细胞无血清上清培养液对视网膜干细胞分化的影响。方法分离大鼠视网膜干细胞和视网膜神经节细胞;采用免疫荧光法鉴定体外培养的大鼠视网膜干细胞与视网膜神经节细胞,视网膜干细胞以Nestin抗体进行鉴定,视网膜神经节细胞以Thy-1抗体进行鉴定;以视网膜神经节细胞无血清上清培养液培养视网膜干细胞,以不加入条件培养液培养的视网膜干细胞为对照组,收集分化细胞,采用q PCR法检测Nestin、Pax6、Thy-1及Brn-3的基因表达。结果培养的视网膜干细胞Nestin抗体染色阳性,视网膜神经节细胞Thy-1抗体染色阳性。培养视网膜干细胞72 h后,与对照组相比,无血清上清培养液组细胞Nestin和PAX6基因相对表达量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.000 1);Thy-1和Brn-3基因相对表达量升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论视网膜神经节细胞无血清上清培养液能够诱导视网膜干细胞分化为视网膜神经节样细胞。

无血清细胞培养液的表面增强Raman及偏振光光谱研究

使用表面增强喇曼光谱技术得到了无血清和有血清的ＨＢｓＡｇ基因重组ＣＨＯ细胞培养液在代谢前后的ＳＥＲＳ和偏振荧光光谱。讨论了两种培养液光谱带在位置和强度方面的差别。据此，调整培养液的成份及其含量的配比。结果细胞在无血清培养液中生长时间成倍延长。同时，ＨＢｓＡｇ的分泌量也有增加。

无小牛血清外周血淋巴细胞培养液的研究

为避免因小牛血清成分复杂、有效期短等弊端对外周血淋巴细胞染色体制备的不良影响，研究出一种与传统培养液效果相当的无小牛血清的外周血淋巴细胞培养液。采用“转化淋巴细胞百分率”和“分裂指数”二项指标进行了２８例次外周血标本的对照分析，结果显示两种培养液间的差别无显著性意义（Ｐ＞００５和Ｐ＞０５）。淋转率的变异系数（ＣＶ）提示“无血清培养液”稳定性较好（５１０％；５９５％），表明“无血清培养液”已完全可以替代传统培养液用于外周血淋巴细胞染色体制备。“无血清培养液”配制方便，成本低，培养时间仍为７２小时，效果稳定，适于推广应用。

培养液中加入鼠血清可提高融合物中鼠脾细胞杂交瘤的抗体产量

在5％正常鼠血清（NMS）培养液中加入FBS或无血清生长因子，经3 次融合，可使鼠杂交瘤分泌的单克隆抗体增加7－10倍，用SP2／0或P3×63Ag8U.1骨髓瘤细胞与A／J和129GIX脾细胞融合，效果较好。

奶牛卵丘细胞无血清体外培养液的优化

采集奶牛卵巢表面卵泡中的卵丘一卵母细胞复合物，通过胰蛋白酶消化获得卵丘细胞，分别利用对照组DMEM／F12培养液和4个试验组McCoy，s5a培养液对卵丘细胞进行原代及传代培养。试验1组用McCoy，s5a基础培养液，试验2组在McCoy＇s5a基础培养液中添加29ng·mL-1的睾酮，试验3组同时添加29ng·mL-3叫的睾酮和15μg·mL-3的绿茶多酚，

长程无血清培养人乳腺癌细胞球的生物学特性

目的:从人乳腺癌原代细胞中分离培养乳腺癌干/祖细胞,并通过体外连续传代培养,研究其体外增殖、分化等生物学特性。方法:应用非黏附性乳腺球(mammosphere,MS)悬浮培养法富集乳腺癌干/祖细胞后,通过连续的单克隆实验检测乳腺球细胞(mammosphere-derived cells,MSDC)的克隆形成和自我更新能力,并经血清诱导后观察其分化能力。FCM法检测CD44+/CD24-/low细胞的含量。结果:接种于含生长因子无血清培养液的原发乳腺癌标本细胞均有MS生成,内含具有干细胞特征的肿瘤细胞。随着培养中传代次数的增加,贴壁分化的细胞增多,形成的MS减少,球体变小,且更易贴壁分化。CD44+/CD24-/low细胞仅存在于基底样乳腺癌标本。来自不同标本的MS的生物学特性表现出一定差异。结论:具有自我更新、无限增殖和多向分化等干细胞样特性的肿瘤细胞在人乳腺癌组织中广泛存在,其生物学行为可能因标本来源不同有所差异,也会因环境因素的作用而改变。