大豆Kti基因ihpRNA种子特异性表达载体的构建及转化

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,Kti)是大豆品质的主要营养抑制因子之一,培育低Kti含量的大豆品种是提升大豆品质的关键。本研究采用RT-PCR技术克隆得到大豆Kti基因的核心保守序列,并构建成种子特异性表达的、具有Kti基因反向重复结构的RNAi载体,利用农杆菌介导法侵染大豆品种吉林30子叶节,通过潮霉素筛选和PCR检测,获得4株转基因阳性植株。RT-PCR检测表明,构建的种子特异性RNAi载体可以在转基因植株的种子中特异表达,且Kti基因表达量均有降低;通过胰蛋白酶抑制剂活性检测发现,转基因大豆籽粒中胰蛋白酶抑制剂活性平均降低了77.5%。为进一步评价RNAi技术对大豆Kti基因的表达调控效果奠定良好基础。

单晶体KTi_(0.93)Sn_(0.07)OPO_4的结构研究

采用熔盐法自发成核生长出单晶体KTi0 .93Sn0 .0 7OPO4 ;使用X射线四圆衍射仪测定了该晶体的结构为 :斜方晶系 ,空间群Pna2 1 ,晶胞常数a =12 .83 1 ,b=6.410 ,c=10 .5 84 。部分Sn4 + 离子替代Ti4 + 离子导致该晶体中氧八面体更趋于对称性 ,进而改变了晶体的物理性质。

美商KTI投资1亿美元正达攻智慧节能变色玻璃

玻璃加工厂正达宣布与美商Kinestra Technologies Inc.（KTI）结盟,合攻智慧型节能变色玻璃市场。KTI将在台湾投资1亿美元,租用正达苗栗的厂房,于台湾量产Halio智慧型节能变色玻璃,抢攻全球千亿美元的建筑玻璃市场。正达国际光电董事长钟志明表示,正达对于变色玻璃的研究以及生产开发历时多年,也一直在积极寻找真正效率高、价格合理的技术进行生产合作。经过将近一年的测试,

基于Exo Ⅲ信号放大的荧光适配体传感器检测Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制因子

Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制因子(Kunitz Soybean Trypsin Inhibitor,KTI)是一种很关键的抗营养因子,不仅对动物消化系统和生长发育有不良影响,还制约各个行业对大豆的利用率,因此快速有效的检测方法是非常必要的。该研究建立一种基于核酸外切酶Ⅲ(Exonuclease Ⅲ,Exo Ⅲ)和碳纳米颗粒(Carbon Nanoparticles,CNPs)的信号辅助放大荧光传感体系用于KTI的检测。具体体系包括KTI适配体(Aptamer,APT)、互补链(Complementary DNA,c DNA)、信号探针(Signal Probe,SP)、Exo Ⅲ和CNPs共5个部分。通过可行性分析和CNPs浓度优化试验,测得KTI在100~600 ng/mL范围内呈线性相关,检测限为12.59 ng/mL。以豆浆作为样品,采用加标回收测得回收率为97.42%~102.85%,RSD在0.61%~2.36%之间,该方法可对实际样品中的KTI进行测定。

马铃薯kunitz型蛋白酶抑制子基因片段的分离及表达分析

以马铃薯高抗青枯病基因型ED13为材料,利用cDNA-RGA方法获得了青枯病菌处理和水对照处理之间的差异表达片段(KTI-likeEST)。该EST与kunitz-type抑制子基因高度同源,属于kunitz-type抑制子基因家族,是马铃薯半胱氨酸蛋白酶抑制子基因家族的重要成员。半定量RT-PCR分析表明该基因受青枯病菌的诱导,12h内启动表达,48h内表达量达最高。马铃薯半胱氨酸蛋白酶抑制子基因参与马铃薯对病原的抗病防御,推测所获得的KTI-likeEST也可能参与了马铃薯的抗病防御。

一种基于极大团的关键时间段挖掘方法

针对带有时间属性的海量事务处理问题,提出了一种求最大相关性的最小时间区间(关键时间段KTI)的算法。通过利用极大团把海量的数据项进行有效的划分,降低了后续数据挖掘和决策选择的复杂度。针对特定的含有时间参量的极大团,通过寻找关键时间段(KTI),提高了决策的准确度,同时可以减小分析数据的规模,降低对计算资源的需求。假设事务中各项出现的事件具有相同的概率分布,得到了一种寻找关键时间段(KTI)的算法。从理论上证明了算法的正确性,并对其进行了复杂度分析,通过实际数据验证了算法的可行性。

高压下KT_(i2)(PO_4)_3晶体相变的Raman光谱研究

用Raman光谱技术研究快离子晶体化合物KTi2(PO4)3在高压下的结构相变,通过对样品在不同压力下Raman光谱带的变化及振动峰半宽度和γ-P曲线发生突变现象的分析,确定该晶体分别在3 GPa和6 GPa附近发生两次结构相变。

两种大型硫磺回收装置工艺技术的比较

介绍了镇海石化工程股份有限公司的ZHSR硫磺回收工艺和KTI公司的CLAUS加RAR硫磺回收工艺,并以镇海10万吨/年硫磺回收装置及天津20万吨/年硫磺回收装置为例,从工艺流程、装置能耗、占地面积等方面对比这两种工艺的优缺点,提出大型硫磺回收装置工艺技术的认识和见解。

抗虫相关基因KTI对青花菜的转化及其对小菜蛾抗性的分析

以青花菜(Brassica oleracea L.ssp. italica)下胚轴为外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法将来源于杨树的Kunitz型丝氨酸胰蛋白酶抑制剂(KTI)基因导入青花菜品系‘09LR-11’中,获得13株卡那霉素抗性植株。以KTI特异引物对转基因植株进行PCR检测,其中8株为KTI阳性植株。Southern blot分析进一步表明,基因KTI已成功整合到青花菜基因组中。RT-PCR检测表明,KTI在转基因青花菜中已成功表达。通过室内叶片离体试验和田间观察,初步证明转KTI青花菜对小菜蛾幼虫具有一定抗性。

大豆KTI1基因表达方式分析及其启动子预测

为明确大豆胰蛋白酶抑制剂基因(KTI1)在不同逆境、ABA条件下及大豆不同组织中的表达方式,本研究采用实时荧光定量PCR技术检测,结果表明KTI1基因受低温、盐、干旱和ABA诱导,分别在处理10、5、24和1 h时获得诱导最高值,相对表达量分别是未处理的288.65,274.35,136.04和56.48倍;KTI1基因在大豆种子中的表达量相对较高,叶中的表达量为1时,种子中的表达量为8.70。根据大豆基因组序列,扩增KTI1基因ATG上游启动子序列1 831 bp;生物信息学预测分析表明启动子中存在多种常出现在逆境胁迫诱导型启动子中的顺式调控元件,推测大豆KTI1基因启动子可能是受低温、盐、干旱和ABA诱导的诱导型启动子。本研究为进一步研究和应用大豆KTI1基因及其启动子提供理论基础。

酿酒酵母中Kti11参与铁代谢及调控机制的研究

Kti11是一个只有约9kDa,有锌指结构的小蛋白。最初作为酿酒酵母对一些毒素起致敏作用的蛋白被发现。并且通过串联亲和纯化,可以发现它可与多种蛋白质相互作用,

大豆KTi基因和BBi基因双价RNAi表达载体的构建

以KTi基因的ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GUS-KTiS为模板,采用PCR技术克隆含有KTi基因的完整ihpRNA构件,并将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并进行序列比对;然后以BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS为基础,利用限制性内切酶BstⅪ单酶切,将KTi基因的完整ihpRNA构件连入其中。最后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。结果表明:PCR扩增得到含有KTi基因的完整ihpRNA构件,构建成重组克隆载体pMD18-T-KRNAi,并构建成双价ihpRNA种子特异性表达载体pKTi-BBi-RNAi,并转化得到含有pKTi-BBi-RNAi的农杆菌EHA105。成功构建同时具有大豆胰蛋白酶抑制剂KTi基因和BBi基因的双价RNAi种子特异性表达载体,KTi基因和BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入农杆菌中。

大豆KTi基因和SBA基因双价RNAi表达载体的构建

本研究采用RT-PCR技术克隆大豆KTi和SBA基因的核心保守序列,序列分析表明,KTi基因片段为324bp,SBA基因片段为515bp;利用RNAi技术,结合种子特异性启动子,构建同时具有KTi基因和SBA基因反向重复结构的双价RNAi种子特异性表达载体pCAMBIA3301-KTi-SBA(pKTi-SBA)。通过酶切检测及测序,证明双价RNAi种子特异性表达载体构建成功。本研究为通过RNAi技术同时降低大豆种子中胰蛋白酶抑制剂和凝集素含量,改良大豆品质奠定基础。

大豆胰蛋白酶抑制剂Bowman-Birk基因家族新等位变异分析

大豆胰蛋白酶抑制剂主要有Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(KTi)和Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂(BBI).BBI家族已经克隆的有BBI-A,BBI-C和BBI-D三类抑制剂,而KTi型家族包含有Tia,Tib,Tic,Tid,Tie,Tif,Tis和ti共8个多基因共显性控制单位点的多态类型及KTi1/2,KTi3等成员.本研究对大豆品种"绥农14"鼓粒期籽粒cDNA文库随机测序,组装出的175个contigs(或singletons),大豆胰蛋白酶抑制剂有关的contigs有17个,其中12个序列组装成的4个contigs,如contig5,contig35,contig8和contig9分别与BBI家族成员BBI-A1,BBI-A2,BBI-C和BBI-D有关,序列之间的相似性达到98%以上,均包含完整的可读框(ORF),并且存在新的等位变异,通过cDNA和基因组PCR扩增,克隆了BBI家族4个成员,证实了新等位变异的存在.通过比较分析籽粒形成时期的cDNA文库,发现大豆胰蛋白酶抑制剂基因表达随籽粒的发育和成熟而呈现由低到高变化趋势.大豆、水稻、花生、玉米和豇豆的Bowman-Birk蛋白酶抑制剂基因的序列聚类分析,表明禾谷类和豆科植物BBI家族具有共同的祖先.

高压下快离子导体KT_(12)(PO_4)_3相变的Raman光谱研究

在0——IOGPa 压力范围对 KT_i(PO_4)_3多晶样品进行 Raman 光谱实验.通过对样品在不同压力下 Raman 移动及谱线半宽度变化的分析,可基本确定该晶体的结构相变压力点在3GPa和6GPa 附近.