miR-124通过靶向BECN1基因调控细胞自噬抑制食管癌KYSE170细胞的侵袭和迁移

目的:探讨mi R-124通过调控细胞自噬对食管癌KYSE170细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:食管癌KYSE170细胞转染mi R-124 mimic,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化,双荧光素酶报告基因验证mi R-124对BECN1(Beclin1)基因的靶向调控作用,Western blotting分析对BECN1、P62及LC3蛋白表达水平的影响。向KYSE170细胞中转染BECN1 si RNA沉默BECN1的表达,Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting检测BECN1、P62及LC3蛋白的表达。将mi R-124 mimic与BECN1过表达质粒共转染至KYSE170细胞,Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting检测自噬相关基因表达的变化。结果:转染mi R-124 mimic后,KYSE170细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.05),BECN1蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),自噬相关蛋白P62表达增高,LC3表达水平明显降低(均P<0.01)。沉默BECN1表达抑制食管癌细胞侵袭及迁移(P<0.01),而过表达BECN1使mi R-124 mimic对KYSE170细胞自噬、侵袭和迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01),自噬相关蛋白P62表达降低、LC3蛋白表达水平明显升高(均P<0.01)。结论:mi R-124能够抑制食管癌细胞侵袭及迁移能力,其机制可能与靶向调控自噬相关基因BECN1的表达影响细胞自噬有关。

下调IL-8表达抑制食管鳞状细胞癌KYSE170细胞的迁移能力及其相关机制

目的:研究白介素8(IL-8)对食管鳞癌细胞株KYSE170迁移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:体外合成针对IL-8的si RNA,采用脂质体法转染KYSE170细胞,利用Real-time PCR和Wsetern blotting及ELISA法检测沉默效率,镜下观察细胞形态学改变,划痕实验检测细胞迁移能力,CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化。Wsetern blotting检测IL-8受体及JAK2-STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果:与阴性对照组比较,靶向沉默IL-8处理后的KYSE170细胞,其IL-8基因和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),IL-8分泌量显著减少(P<0.01);IL-8基因沉默后,KYSE170细胞迁移能力明显减弱(P<0.01),而细胞增殖能力无明显变化。IL-8受体2即CXCR2、转移相关蛋白WASF3的表达水平明显降低(P<0.05),而IL-8受体1即CXCR1的表达水平没有明显变化;JAK2-STAT3信号通路关键蛋白p-JAK2和p-STAT3表达明显降低(均P<0.01)。结论:下调IL-8的表达可以抑制食管癌细胞株KYSE170的迁移能力,其机制可能通过介导CXCR2及其下游JAK2-STAT3信号通路活性的改变相关。

miR-627-3p在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-627-3p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其对ESCC细胞生物学行为的影响。方法:收集2015年1月至2015年10月河北医科大学第四医院胸外科手术切除的ESCC组织86例及对应的癌旁组织标本20例。通过qPCR法检测miR-627-3p在86例ESCC组织及癌旁组织中的表达,分析其表达与ESCC患者临床病理学指标及预后的关系;利用Kaplan-Meier Plotter在线数据库进一步分析数据库中hsa-miR-627的表达与ESCC患者预后的关系;通过qPCR法检测miR-627-3p在4株ESCC细胞系中的表达,选取表达水平最低的食管癌细胞转染miR-627-3p mimic,选取表达水平最高的ESCC细胞转染miR-627-3p inhibitor,采用CCK-8法检测细胞的增殖,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;采用KEGG分析探讨miR-627-3p可能介导的信号转导通路,并采用qPCR法验证miR-627-3p对信号通路中关键基因表达的影响。结果:miR-627-3p在ESCC组织中的表达明显低于在癌旁组织中的表达,miR-627-3p的表达与ESCC患者淋巴结转移和临床分期相关(均P<0.05);miR-627-3p高表达的ESCC患者的5年生存率明显高于miR-627-3p低表达的食管癌患者(P<0.05)。ESCC细胞系KYSE170中miR-627-3p表达最低,KYSE30中miR-627-3p表达最高;在KYSE170细胞中转染miR-627-3p mimic后,细胞的增殖能力无明显变化(P>0.05),但细胞的迁移(P<0.05)和侵袭能力(P<0.05)显著降低;在KYSE30细胞中转染miR-627-3p inhibitor后,细胞的增殖能力无明显变化(P>0.05),但细胞的迁移(P<0.05)和侵袭能力(P<0.05)显著增高。KEGG分析结果显示,miR-627-3p介导了多条与肿瘤相关的信号转导通路。结论:miR-627-3p在ESCC组织中的表达明显低于在癌旁组织中的表达,其低表达与ESCC患者的不良预后相关,miR-627-3p抑制ESCC细胞的迁移和侵袭,可能是通过干扰多条与肿瘤相关的信号通路发挥生物学功能。

白桦脂酸抑制食管鳞状细胞癌增殖及相关机制的实验研究

目的研究抗肿瘤药物白桦脂酸(BA)对人食管鳞癌KYSE170细胞的抑制作用及抗肿瘤作用机制。方法采用不同质量浓度(0、5、10、20、40、60、80、100μg.mL-1)白桦脂酸处理KYSE170细胞,作用不同时间(24、48、72 h)后,噻唑蓝(MTT)法检测KYSE170细胞生长的短期抑制作用;不同质量浓度(0、5、20、40μg.mL-1)白桦脂酸作用于细胞24 h后以克隆形成实验检测药物对细胞生长的长期抑制作用;不同质量浓度白桦脂酸(10、60、100μg.mL-1)作用KYSE170细胞24、48 h后以流式细胞仪FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡变化,不同质量浓度白桦脂酸(0、10、40μg.mL-1)作用细胞24 h后以流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果噻唑蓝实验显示,不同质量浓度白桦脂酸对KYSE170细胞均有抑制作用,抑制效果呈时间和剂量依赖性,24、48、72 h的IC50分别为(56.81±2.56)、(39.73±2.77)和(29.28±3.05)μg.mL-1;克隆形成结果显示,0、5、20、40μg.mL-1药物作用细胞后,克隆形成率分别为(89.56+5.00)%、(61.00+2.03)%、(31.33+3.51)%和(15.33+2.33)%,随白桦脂酸质量浓度增大而明显降低(P<0.01)。凋亡结果显示,各实验组KYSE170细胞凋亡率随白桦脂酸质量浓度加大和药物作用时间的延长明显增高(P<0.05或0.01)。细胞周期结果显示,0、1、10μg.mL-1白桦脂酸作用细胞24 h后,随药物质量浓度增大,G1期细胞比例减少,S期细胞比例不断增加,实验组与空白组对比均有统计学差异(P<0.01)。结论白桦脂酸能抑制人食管鳞癌KYSE170细胞的生长,这一作用可能是通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞停留在S期来实现的。