Proteomics Study of Benzene Metabolite Hydroquinone Induced Hematotoxicity in K562 Cells

Objective Hydroquinone(HQ),one of the phenolic metabolites of benzene,is widely recognized as an important participant in benzene-induced hematotoxicity.However,there are few relevant proteomics in HQ-induced hematotoxicity and the mechanism hasn’t been fully understood yet.Methods In this study,we treated K562 cells with 40μmol/L HQ for 72 h,examined and validated protein expression changes by Label-free proteomic analysis and Parallel reaction monitoring(PRM),and performed bioinformatics analysis to identify interaction networks.Results One hundred and eighty-seven upregulated differentially expressed proteins(DEPs)and 279 downregulated DEPs were identified in HQ-exposed K562 cells,which were involved in neutrophilmediated immunity,blood microparticle,and other GO terms,as well as the lysosome,metabolic,cell cycle,and cellular senescence-related pathways.Focusing on the 23 DEGs and 5 DEPs in erythroid differentiation-related pathways,we constructed the network of protein interactions and determined 6 DEPs(STAT1,STAT3,CASP3,KIT,STAT5B,and VEGFA)as main hub proteins with the most interactions,among which STATs made a central impact and may be potential biomarkers of HQ-induced hematotoxicity.Conclusion Our work reinforced the use of proteomics and bioinformatic approaches to advance knowledge on molecular mechanisms of HQ-induced hematotoxicity at the protein level and provide a valuable basis for further clarification.

氯化汞对K_(562)和HEL细胞株作用的实验研究

为探讨中药水银（Hg）和轻粉（HgCl）的抗肿瘤作用，以三氧化二砷（AS2O3）及阿糖胞苷（Ara－c）为对照，应用细胞形态学、流式细胞术、MTT法和药物反应曲线等方法观察3种药物对K562和HEL细胞株的作用。结果表明，HgCl2和As2O3均能诱导562细胞凋亡，而Ara－c无此作用.HgCl2可使K(562)的G0／G1增高，提示激活P53基因可能是氯化汞诱导凋亡机制之一；HgCl2和AS2O3均可显著抑制K(562)增殖；Ara－c抑制HEL增殖作用明显强于HgCl2和As2O3三者对HEL均无诱导凋亡作用，但对K(562)和HEL均有不同程度杀伤和致死作用。HgCl2和As2O3作用相似，其主要机制可能是与Hg(2+)和AS(3+)与巯基（－SH）有极高亲和力，继而与含巯基的活性基结合、降低诸多酶的活性、损害细胞膜有关。HgCl2具有抗肿瘤作用，是一种新的诱导细胞凋亡药物。

绞股蓝总皂甙对小鼠S_(180)肉瘤及K_(562)细胞的抑制作用

目的 绞股蓝总皂甙 (GP)对小鼠S180 肉瘤及K562 细胞的抑制作用。方法 通过动物实验观察绞股蓝总皂甙对小鼠S180 肉瘤生长状况、肿瘤坏死面积 (TNA)与肿瘤总面积 (TTA)的比率、瘤周瘤内免疫活性细胞浸润状况及荷瘤小鼠脾脏的影响 ;通过细胞培养观察绞股蓝总皂甙对K562 细胞生长的抑制作用。结果 经重复实验证实 ,GP能显著抑制小鼠S180 肉瘤的生长 ,TNA与TTA的比率显著增加 ,瘤周尤其是瘤内淋巴细胞、巨噬细胞浸润数量明显增加 ,荷瘤小鼠脾重增加、脾白髓数目增多、体积增大。同时证实 ,GP对K562 细胞株具有明显的生长抑制作用。结论 GP的抑瘤作用主要是直接杀伤瘤细胞 。

雄黄诱导K_(562)细胞凋亡的研究

目的检测雄黄诱导Ｋ５６２细胞的能力。方法应用形态学观察、ＤＮＡ电泳和流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞凋亡。利用ＦＣＭ分析细胞周期并测定Ｋ５６２细胞线粒体膜ＡＰＯ２．７蛋白表达。结果雄黄可以诱导Ｋ５６２细胞产生凋亡现象，并导致Ｓ期细胞降低。

HSP70高表达对K_(562)细胞热耐力的影响

为探讨HSP70高表达与细胞热耐力的关系 ,用硫酸镉诱导细胞HSP70高表达 ;RT -PCR检测HSP70mRNA水平 ;观察HSP70水平对细胞热耐力的影响。结果 :硫酸镉作用于细胞 1h后 ,细胞的HSP70水平显著增高 ,HSP70水平高的细胞其热耐力明显强于HSP70水平低的细胞组 ;HSP70水平于细胞热耐力间正相关。结论 :化学因素诱导的HSP70表达增高可以保护热暴露细胞 ,提高细胞热耐力。

姜黄素对人类红白血病细胞(K_(562))的抑制及诱导分化作用

用人类红白血病细胞（Ｋ５６２）为材料，通过细胞计数、ＭＴＴ法测定，形态学观察、ＮＢＴ还原试验及联苯胺反应等方法检测了不同浓度姜黄素对体外人Ｋ５６２细胞的作用。结果表明，姜黄素对Ｋ５６２细胞有明显的抑制作用，随浓度增加，抑制作用逐渐增强。形态学观察可见轻微诱导分化作用。鉴于姜黄素对人类红白血病细胞兼有轻微诱导分化和增殖抑制作用，提示姜黄素有可能应用于人类红白血病的治疗。

脐血CD_3AK细胞诱导K_(562)细胞凋亡的实验研究

目的 探讨脐血CD3AK细胞诱导K5 6 2 细胞凋亡的作用。方法 用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖凝胶电泳 ,原位末端标记法检测 2 0例K5 6 2 细胞、2 3例CD3AK细胞诱导的K5 6 2细胞凋亡率。结果 K5 6 2 细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ;经CD3AK细胞诱导的K5 6 2 细胞凋亡率 (2 7.38± 4.91) % ,二者之间具有显著性差异 (t=15 .1 P <0 .0 1)。结论 脐血CD3AK细胞能诱导K5 6 2 细胞凋亡。

HSP70高表达对K_(562)细胞化疗敏感性研究

目的 研究化学因素引起的热应激蛋白 70 (HSP70 )升高对K56 2 细胞化疗药物体外敏感性的影响。方法用氯化镉诱导K56 2 细胞使其HSP70高表达 ,在高表达细胞中分别加入甲氨蝶呤 (MTX)、丝裂霉素C(MitomycinC)、顺氯氨铂 (PDD)、平阳霉素 (Bleomycin)等 4种化疗药物 ,药物浓度以临床一次用量的 1/ 2 5 0为中剂量 ,中剂量的 1/ 10、10倍分别为低剂量和高剂量 ,作用 16h后用MTT比色法检测细胞活力 ;HSP70用RT -PCR检测。结果 氯化镉可诱导细胞HSP70高表达 ,其中作用 4h后表达最高 ;HSP70高表达可以降低细胞对化疗药物的敏感性 ,HSP70表达水平越高 ,细胞对化疗药物的敏感性越低。结论 非热诱导的HSP70高表达可以降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性 。

放射性核素^(89)Sr诱发K_(562)癌细胞凋亡的放射毒理效应的分子机理研究

采用分子病理和定量病理技术研究放射性核素89Sr诱导的K562癌细胞凋亡、剂量效应关系和重要相关基因bcl-2和bax在其中的表达。结果表明,K562细胞经89Sr作用达6h和24h,提取DNA,琼脂糖凝胶电泳图谱上出现典型的“阶梯状”区带,伴有“拖尾”,面对照组未见“阶梯状”区带:荧光双标记流式细胞仪法定量检测见89Sr作用6、9、12、24和48h后,K562细胞凋亡率、K562细胞坏死率均较对照组有明显的升高(p<0.01)。免疫组织化学染色显示,对照组K562细胞中bcl-2、bax均何表达,bcl-2表达阳性细胞率82.8％,bax表达阳性细胞率44.4％,bcl-2/bax比值1.86,89Sr作用24h后的K562细胞中,bcl-2表达阳性细胞率31.4％,bax表达阳性细胞率38.2%,bcl-2/bax比值0.82与对照组相比,差异具有显著性(p<0.05);结果显示,放射性核素89Sr照射K562细胞后,细胞凋亡与细胞坏死并存,且89Sr诱导K562细胞的凋亡可能是通过bcl-2表达蛋白降低,bcl-2/bax比值下降而调控的。

As_2O_3诱导K_(562)细胞凋亡过程中细胞表面电荷变化的研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )诱导K562 细胞凋亡时细胞表面电荷的变化 ,阐明As2 O3 诱导K562 细胞凋亡的可能机制 ,为As2 O3 在临床上的应用提供理论依据。方法 :应用细胞电泳仪检测As2 O3 诱导K562 细胞凋亡中细胞电泳率的变化。通过细胞增殖、活力检测 ,形态学观察 ,亚G1期细胞含量和DNA凝胶电泳等鉴定细胞凋亡。结果 :1.0～ 2 0 μmol·L-1As2 O3 作用于K562 细胞 ,在细胞形态、DNA凝胶电泳、FCM显示出典型的细胞凋亡特征之前 ,试验组细胞表面电荷已在 1.6h左右开始下降 ,6h内降低最明显 ,6h后虽有下降 ,但幅度明显减弱。与对照组比较 ,低于 1.0 μmol·L-1的As2 O3 对细胞表面电荷影响不大。结论 :细胞表面电荷的下降是K562 细胞凋亡的早期事件。细胞表面电荷的下降有一定的时间范围 ,超过此范围 ,细胞表面电荷下降趋向无限大。

三氧化二砷诱导K_(562)细胞凋亡的初步研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３） 治疗慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ） 的机制。方法：以ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２ 为模型，通过细胞增殖、活力检测、形态学观察、肿瘤集落形成的琼脂糖凝胶电泳等检验。结果：经≥２．５μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３ 处理的Ｋ５６２ 细胞可出现增殖受抑和凋亡的形态学改变及ＤＮＡ片段化。结论：Ａｓ２Ｏ３ 能有效地诱导Ｋ５６２ 细胞凋亡。

铁对热暴露K_(562)细胞活力及热应激蛋白的影响

目的 观察微量元素铁对热暴露K56 2 细胞活力及热应激蛋白HSP 70影响 ,探讨铁发挥热保护作用的可能机理。方法 以K56 2 细胞为研究对象 ,在普通培养基RPMI164 0里分别添加了不同浓度的硫酸铁、柠檬酸铁配制成实验培养液 ,MTT法测定细胞活力 ,Tissieres方法测定热应激蛋白HSP 70含量。结果 一定浓度的硫酸铁 (10 0～ 40 0μmol/L)、柠檬酸铁 (10 0～ 2 0 0 μmol/L)能显著提高K56 2 细胞的热耐力 ,且热应激蛋白 (HSP 70 )的合成也明显增加。结论 硫酸铁、柠檬酸铁能显著提高K56 2 细胞的热耐力 ,但它们作用浓度和效果不同 。

光卟啉-光照选择性杀灭白血病细胞株K_(562)的研究

为研究光卟啉（ＹＨＰＤ）加光照对白血病细胞株Ｋ５６２的杀伤作用及对正常造血祖细胞的影响，通过细胞体外液体培养活细胞计数、体外半固体培养集落测定，以探讨该法用于体外净化自体移植骨髓中残留的白血病细胞的可能性。观察不同光敏剂剂量和光照时间的变化对杀伤白血病细胞作用的影响，结果表明，单用ＹＨＰＤ或单独日光荧光照射对Ｋ５６２细胞和正常人造血祖细胞均无明显杀伤作用。二者联合使用表现光敏效应。细胞存活率的对数与ＹＨＰＤ剂量、光照时间呈线性相关。ＹＨＰＤ加光照对Ｋ５６２细胞具有强大杀伤作用，对正常造血祖细胞影响较小，在能够杀伤白血病细胞大于５个对数级，其体外已不能形成集落的情况下，正常人骨髓－巨噬细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）尚有１５．９７％。

丙氧鸟苷对K_(562)细胞抑制增殖和诱导分化作用

目的 研究丙氧鸟苷 (GCV)抑制K562 细胞增殖作用和机制。方法 细胞培养、集落培养、联苯胺染色。结果 0 .6 2 5～ 40 μmol浓度的GCV对K562 细胞有明显的抑制增殖作用 ,作用 4d时的半数抑制量 (IC50 )为 2 .99μmol,作用 7d后克隆形成抑制率达 43% ,联苯胺染色阳性细胞百分率随药物剂量的增加和培养时间的延长而逐渐增加。结论 GCV体外抑制K562

脐血CD_3AK细胞和其培养上清诱导K_(562)细胞凋亡

目的 探讨脐血CD3 AK细胞和其培养上清 (CS)诱导K562 细胞凋亡。方法 用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖电泳 ,原位末端标记法检测K562 ,CD3 AK细胞诱导的K562 ,CS诱导的K562 细胞凋亡率。结果 K562 细胞自然凋亡率 3.5 0± 0 .97% ;CD3 AK细胞诱导的K562 细胞凋亡率 2 7.38± 4.91% ,P <0 .0 1,CS诱导的K562 细胞凋亡率为 33.0 9± 5 .2 2 % ,P <0 .0 1。结论 脐血CD3 AK细胞和其培养上清能诱导K562 凋亡。

TNF-α对K_(562)细胞细胞毒作用的实验研究

为探讨肿瘤坏死因子 α(TNF- α)对 K5 6 2 细胞的细胞毒作用 ,应用原位末端标记法、细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳检测分析 K5 6 2 ,经 TNF- α(5 0 ng/ml、1 0 0 ng/ml、1 0 0 0 ng/ml)诱导的 K5 6 2 。结果显示 ,K5 6 2 细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ,TNF- α(5 0 ng/m l、1 0 0 ng/ml)诱导的 K5 6 2 细胞凋亡率分别是 (2 1 .35± 4.46 ) %、(2 7.38±4.91 ) % ,差异有显著性 (P<0 .0 1 ) ;TNF- α(1 0 0 0 ng/ml)诱导 K5 6 2 细胞坏死。说明小剂量 TNF- α诱导 K5 6 2 细胞凋亡 ,大剂量 TNF- α诱导 K5 6 2

超声对人红白血病细胞系K_(562)作用的研究

超声对人红白血病细胞系Ｋ５６２作用的研究齐浩１马玉英２谭声江１宋存牛２（１陕西师范大学生命科学学院，西安７１００６２；２陕西师范大学应用声学研究所，西安７１００６２；第一作者，女，４２岁，讲师）光动力学（ＰＤＴ）问世以来，实验已证实超声（ＵＳ）也可激...

土贝母诱导K_(562)细胞凋亡

目的 :探讨土贝母诱导分化 K562 细胞的作用机制。方法 :将土贝母制剂加入到在体外培养的 K562 细胞中 ,观察 K562 细胞增殖水平 ,并检测土贝母制剂作用前后细胞对噻唑蓝还原能力 ,同时应用流式细胞仪测定 K562 细胞增殖周期。结果 :土贝母制剂对 K562 细胞增殖有明显的抑制作用 ,且呈剂量依赖性 ;K562 细胞增殖 G0 /G1期细胞比率明显增加 ,S期细胞比率明显减少。结论 :土贝母制剂能阻止 K562 细从 G0 、G1期向 S期转化 ,抑制 K562 细胞增殖 ,促进 K562

肝癌瘤苗激活的TIL对K_(562)细胞杀伤活性的研究

目的：为了提高ＴＩＬ的抗肿瘤细胞活性。方法：使用冷冻方法制成肝癌瘤苗，用于激活ＴＩＬ，观察其杀伤Ｋ５６２细胞活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养扩增１０天、２０天、３０天和４０天对Ｋ５６２细胞的杀伤率增多有明显提高，其中以培养扩增３０天时为最高。结论：经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ具有更强的杀伤Ｋ５６２细胞的能力。

预热对K_(562)细胞肿瘤坏死因子α敏感性的影响

为探讨预热对肿瘤细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)敏感性的影响及其机理,将白血病患者胸腔渗出细胞系(K562细胞)在40℃预热不同时间(0、30、60、90、120、150和180min),使细胞热应激蛋白70(HSP70)高表达;然后将预热60min细胞和未预热细胞分别暴露于50、100、200和400U/ml的TNF-α16小时,用MTT比色法检测细胞活力。保持TNF-α浓度为100U/ml不变,观察预热时间对细胞TNF-α敏感性的影响,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞HSP70的含量。结果:40℃预热后细胞的HSP70含量升高,在预热120min达到最高,以后缓慢下降;预热细胞对相同浓度TNF-α的敏感性明显低于未预热细胞;对于相同浓度的TNF-α,预热120min的细胞对TNF-α敏感性最低。结果提示,预热可以引起细胞HSP70表达增高,降低细胞对TNF-α的敏感性。