肺炎克雷伯菌乙酰基转移酶类毒素蛋白的表达与纯化

KacT是肺炎克雷伯菌乙酰基转移酶类毒素-抗毒素系统中的毒素蛋白。KacT对大肠杆菌有生长抑制作用,因而难以在大肠杆菌中对其进行过量表达。KacA是与KacT对应的抗毒素蛋白,可中和KacT的毒性。为获得高纯度的KacT蛋白,本研究首先在大肠杆菌中表达KacAT蛋白复合物,并在KacA蛋白的N端引入六聚组氨酸标签以进行镍亲和层析;在30℃、IPTG浓度为0.2 mmol/L时KacAT蛋白复合物的表达最优。然后使用含有5 mol/L盐酸胍的变性缓冲液来解离KacA与KacT蛋白之间的相互作用。最后,经分管收集和温和梯度复性获得纯度较高的KacT蛋白。结果显示,在大肠杆菌中通过表达纯化复合物蛋白再变性解离的方法,成功分离得到KacT毒素蛋白,建立了KacT分离纯化的完整流程。