大叶南五味子中水溶性多糖提取工艺条件优化

以大叶南五味子果实为原料,采用3因素5水平响应曲面分析法对南五味子多糖提取工艺进行了优化。通过响应曲面试验及回归分析得出最佳工艺条件为:提取时间2.4 h,提取温度95℃,料液比1 28,南五味子多糖提取率为3.50%,南五味子多糖含量为76.01%。

大叶南五味子多溶剂分步提取物的抗菌活性研究

为了探讨大叶南五味子果实的体外抗菌活性。将大叶南五味子依次以石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇,水为溶媒,每种溶剂均先用超声波提取20min,再加热回流提取2h,采用微管-平板法测定4种溶剂的提取物对鸡大肠杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示:有机溶媒提取率在0.35%～5.50%,水提取率达到51.2%;有机溶媒提取物对鸡大肠杆菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌的MIC为0.44～34.08mg/mL,水提取物对鸡大肠杆菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌的MIC分别为204.63、329.13、232.5mg/mL。说明大叶南五味子果实有机溶媒提取物虽然得率少,但其化学成分具有较高的抗菌活性。该研究为大叶南五味子临床应用、抗菌活性成分的分离奠定基础。

大叶南五味子果实化学成分研究

目的:研究大叶南五味子果实的化学成分。方法:采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20、HPLC等色谱技术进行分离纯化,NMR和EI-MS等波谱学方法进行结构鉴定,结果:从中分离得到9个化合物,分别鉴定为:4,5-二羟基-3-甲氧基二苯(Ⅰ)、eriobofuran(Ⅱ)、3β,16β-二羟基-12-烯-乌苏烷(Ⅲ)、2α,3β,6β,23-tetrahydroxy urs-12,18-dien-28-oic acid(Ⅳ)、2α,3β,23-trihydroxy urs-12-en-28-oic acid(Ⅴ)、芦丁(Ⅵ)、2-乙基己酸(Ⅶ)、2-月桂酸单甘油酯(Ⅷ)、单蓖麻油酸甘油酯(Ⅸ)。结论:以上9个化合物均为首次从南五味子属植物中分离得到。

大叶南五味子多糖的分级与纯化

为了从大叶南五味子多糖(KPS)中获得单体,将其进行分级与纯化。用乙醇为沉淀剂对KPS进行分级,Sephadex柱色谱梯度洗脱分离各级多糖,蒽酮-硫酸比色法测定糖含量及洗脱液吸光度值。乙醇分级沉淀结果显示KPS分为Ⅰ～Ⅴ级分,糖含量分别为76.51%、78.36%、95.13%、92.41%、88.35%;Sephadex柱色谱分离结果显示,KPSⅡ、Ⅲ、Ⅴ中所含多糖分子量基本一致,为纯一多糖;KPSⅠ、Ⅳ中含有不同分子量多糖,其中KPSⅠ-1、KPSⅡ-1、KPSⅢ-1、KPSⅣ-6、KPSⅤ-1均为纯多糖。分级纯化的大叶南五味子多糖单体为其化学结构的分析奠定基础。

大叶南五味子多糖纯化工艺优化

优化大叶南五味子干燥果实粗多糖(KPS)的纯化工艺。用三氯醋酸(TCA)法、Sevage法脱蛋白,单因素和正交试验法优化活性炭脱色工艺参数,比色法测定蛋白含量和脱色率。TCA法脱蛋白率达到72.6%,极显著高于Sevage法(P<0.01);TCA法多糖损失率显著低于Sevage法(P<0.05);活性炭脱色的最佳工艺参数:脱色温度60℃,脱色时间80min,溶液pH1,活性炭用量1.5%,脱色率达到86.83%±3.93%(n=6),多糖含量达到19.39%±7.21%(n=6)。纯化KPS粗品最优工艺是用TCA法除蛋白质,1.5%的活性炭脱色。

大叶南五味子多糖对鸡免疫细胞增殖的影响

试验将5种浓度大叶南五味子多糖（KPS）5个组分单独加入鸡的T、B淋巴细胞及腹腔巨噬细胞（PMφ）培养体系中，培养44h时用MTT法测定免疫细胞增殖（OD599值）的变化。结果显示，在150～250μg／mL时，KPSⅡ、KPSⅢ组T淋巴细胞增殖OD599值显著高于空白对照组、ConA对照组（P〈0．05）；在50～100μg／mL时，KPSⅡ、KPSⅢ组B淋巴细胞增殖OD599值显著高于空白对照组、PHA对照组（P〈0．05）；在50～150μg／mL时，KPSⅡ、KPSⅢ、KPSⅣ-6组腹腔巨噬细胞增殖OD599值显著高于空白对照组、LPS对照组（P〈0．05）；KPS各组分在50-250μg／mL时均能促进鸡T、B淋巴细胞及PMφ细胞增殖，且在同等剂量下KPS促进B淋巴细胞增殖OD599值高于其他细胞。结果表明，KPS在合适的剂量能单独刺激鸡的T、B淋巴细胞及PMφ细胞增殖，从而增强鸡的细胞免疫能力。

毛细管GC法测定南五味子多糖的单糖组成

目的:研究南五味子多糖中单糖的种类和组成比例。方法:以2moL.L-1硫酸溶液水解南五味子多糖,用吡啶溶解干燥的水解产物,硅烷化衍生;采用毛细管气相色谱法测定南五味子多糖的单糖组成:色谱柱为SE-30石英毛细管(30m×0.25mm×0.25μm),进样口温度为220℃,检测器温度为230℃,柱温为195℃。结果:南五味子多糖中含有甘露糖、木糖、半乳糖、果糖、葡萄糖和半乳糖醛酸6种单糖成分,已确定的6种单糖的摩尔比为19.78:2.75:0.149:1:0.381:0.127。结论:该方法简便、灵敏,可以准确测定出南五味子多糖中含有的各种单糖。