利用中压制备液相色谱从蓝莓叶多酚中分离纯化绿原酸

该研究以蓝莓叶为试验材料,采用超声辅助纤维素酶的方法获得蓝莓叶多酚粗提物,然后利用中压制备液相色谱技术对粗提物进行分离纯化,分别考察不同流动相、进样量、流动相流速对绿原酸得率的影响。结果表明,最佳制备条件为乙腈-水溶液为流动相、进样量6 mL、流动相流速10 mL/min,在此条件下,绿原酸得率为21.39%。经高效液相色谱分析,得到的绿原酸纯度可达94.98%。该方法能够快速、高效地分离蓝莓叶中的绿原酸。该方法为研究和应用蓝莓叶中活性成分提供了一种有效的手段。

四氢嘧啶的分离纯化及分析方法的研究进展

在高盐度的环境中,嗜盐微生物通过合成具有特殊作用的化合物来维持细胞内外渗透压平衡,保持其正常的生命活动。四氢嘧啶作为一种独特的相容性物质,可以帮助微生物在盐度较高的不利条件下生存,其在生物保护、化妆品、临床医学、环境修复和新能源应用等领域都具有广阔的应用前景。介绍了目前国内外对四氢嘧啶的制备、分离纯化过程、分析方法等方面的最新研究进展,并对各种方法的优缺点进行总结,以期对四氢嘧啶的进一步研究与应用提供一定的参考资料。

食源抗氧化肽的制备与活性筛选

过多的活性氧自由基会导致细胞凋亡甚至组织损伤,引发慢性疾病,采用食源性活性肽辅助疾病的预防和治疗具有一定的开发潜力。该研究选择α-乳白蛋白、酪蛋白、米糠蛋白、麦谷蛋白和火麻仁蛋白,进行碱性蛋白酶单酶水解、胃蛋白酶与胰液素双酶解两种方式制备抗氧化肽,并测定水解产物的抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶水解条件下的样品活性更高,α-乳白蛋白、酪蛋白、米糠蛋白和麦谷蛋白水解样的抗氧化活性相近且显著高于火麻蛋白(P<0.05)。将4种抗氧化活性较高的蛋白的水解样品进行凝胶色谱分离纯化,测定活性后发现,分子质量越小的分离组分活性越高。利用液相色谱-质谱联用对抗氧化肽进行序列鉴定,获得6条三肽和5条四肽,其中WVC、LFY和YWL具有抗氧化活性潜力。

甘青乌头总生物碱的分离及纯化

为分离纯化制备高纯度的甘青乌头生物碱,通过对甘青乌头总生物碱的提取及含量测定,利用HPLC法测定甘青乌头酯型生物碱含量,单因素试验考察甘青乌头总生物碱和酯型生物碱提取条件。结果表明,以苯甲酸峰面积以及总生物碱的含量为参照标准,选取适宜的总生物碱提取方法,得到85℃为最佳提取温度,1.5 h为最佳提取,90%为乙醇的质量分数。高效液相色谱法精密度、重复性和稳定性良好,且操作简便,对甘青乌头质量控制理想。

西兰花种子中分离纯化萝卜硫素及残留溶剂的方法学验证

目的介绍了一种从西兰花种子中分离纯化天然萝卜硫素高效、低成本方法。方法该方法包括种子自溶后的溶剂萃取、柱色谱分离和半制备高效液相色谱纯化。经MS、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR谱对纯化后的化合物进行了表征。结果与传统的液-液萃取法相比,柱色谱分离法从西兰花种子中提取萝卜硫素的收率更高为(69.02±1.1)%。以SinoChrom ODS-BP柱为半制备高效液相色谱柱,以甲醇-水(体积比1∶4)为流动相,最大装载量小于60 mg,流量应控制在9 mL·min^(-1),可以获得纯度为95%的萝卜硫素。经HPLC、MS、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR检测,结果表明,所得样品为目标化合物,且无有机溶剂残留。结论建立了一种分离纯化西兰花种子中萝卜硫素的方法。本方法经济、高效,有实用价值。

高效液相色谱法分离纯化达托霉素

采用高效液相色谱法对达托霉素粗品进行纯化,对反相硅胶种类、洗脱剂浓度、洗脱速度、上样量进行优选,并对关键杂质进行质量控制。结果表明,以反相硅胶UniSil C18 Ultra装柱、以10%乙醇为洗脱剂、洗脱速度为16~18 mL·min^(-1)、上样量为10~12 mg·mL^(-1),在此条件下,达托霉素精粉的HPLC含量超过99.0%,收率超过70.0%。该方法分离制备效率高,有机溶剂用量少,纯化精粉中的有关物质均满足质量要求,具有产业化应用前景。

杜仲叶中绿原酸提取工艺优化及分离制备

目的:优化绿原酸提取工艺,并进行单体制备。方法:在单因素试验基础上,以料液比、乙醇浓度和pH为影响因素,绿原酸提取收率为评价指标,依据中心组合法则,运用3因素3水平的响应曲面分析法优化提取工艺。以绿原酸提取液为原料,采用高压制备液相色谱法分离绿原酸。结果:最优提取工艺为料液比1∶10(g/mL)、乙醇浓度20%、pH 3.5、提取时间90 min、提取温度75℃,绿原酸的平均提取率为2.78%,模型预测值为2.94%。高压制备液相分离获得的绿原酸单体纯度大于98.75%,收率大于95.0%。结论:建立了一种简便高效的绿原酸提取分离工艺。

离子交换树脂层析纯化菜籽卵磷脂的工艺研究

探讨以菜籽水化脱磷油脚为原料,通过离子交换树脂层析纯化菜籽磷脂酰胆碱(PC)的工艺过程,对工艺条件进行优化。首先通过丙酮、石油醚等溶剂萃取工艺,制备出菜籽粉末磷脂,然后利用离子交换树脂纯化PC。确定高效液相检测方法为PC的定量、定性分析方法,对柱层析工艺进行优化。结果表明,柱层析的最佳工艺条件为:单位树脂上样量0.08 g·mL^(-1);流速3.0 mL·min-1;上样浓度0.1 g·mL^(-1);高径比10∶1;前300 mL用95%乙醇洗脱,后150 mL用含异丙醇40%的异丙醇/水溶液洗脱。经HPLC-ELSD定量分析,产品纯度和回收率分别为72.3%和72.6%。

生漆中C_(15)三烯漆酚的制备及对SKOV3细胞活力的影响

本研究以生漆为原料,乙醇提取、获得总漆酚乙醇提取物,采用高压制备液相色谱分离制备C_(15)三烯漆酚,使用HPLC、NMR进行纯度检测和结构表征,并采用MTT法研究C_(15)三烯漆酚对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制活性。结果制备获得一种三烯漆酚,经鉴定为3-(8’Z,11’E,13’Z-pentadecatrienyl) catechol,纯度大于97.5%,收率大于85.3%,MTT法体外抑制肿瘤增殖活性测试显示C_(15)三烯漆酚对人卵巢癌SKOV3细胞有较好的抑制活性,100μmol·L^(-1)的浓度下抑制率为49.97%,IC50值为71.38μmol·L^(-1)。

蓝莓果实中花色苷单体的色谱分离纯化

为充分开发蓝莓果实的潜在应用价值,主要采用柱色谱法及半制备高效液相色谱法系统研究蓝莓果实中花色苷(花青素的糖苷形式)单体的制备技术。蓝莓花色苷粗提液经超声辅助浸提、乙酸乙酯萃取2次,能够促进花色苷类物质的溶出,并有效去除溶液中的黄酮类杂质。经Amberlite XAD-7HP大孔树脂层析、Sep-Pak C18固相萃取,所得蓝莓花色苷粗品的纯度为62.49%。经Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离,获得的3种花色苷纯化组分纯度在65%~75%之间。运用半制备型高效液相色谱技术从3种花色苷纯化组分中制备出两种蓝莓果实中含量较低的半乳糖苷化的花色苷单体,经分析型高效液相色谱鉴定为飞燕草素-3-O-半乳糖苷和锦葵色素-3-O-半乳糖苷,纯度分别为96.98%和95.63%。本研究为花色苷单体的规模化生产提供了技术参考,同时为实现蓝莓花青素高附加值产品的生产提供良好理论依据。

反相高效液相色谱分离纯化天然除虫菊酯

天然除虫菊酯含有6种有效成分,但结构相似,分离困难。本研究以除虫菊酯精油为原料,通过优化反相高效液相色谱分离条件,分离纯化了除虫菊酯6种有效成分,纯度均达到99%。然后用气相色谱-质谱定性分析确证6种成分。本研究所建立的天然除虫菊酯6种有效成分的反相高效液相色谱分离纯化方法,为天然除虫菊酯除虫菊酯残留检测提供了准确的判断标准,为阐明天然除虫菊酯6种单一有效成分的杀虫机理研究奠定了基础,也为除虫菊酯6种单一有效成分纯品的生产提供了重要的方法参考。

苦丁茶中熊果酸的分离纯化研究

目的研究苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)中熊果酸的分离纯化,建立分离纯化工艺条件,以利于苦丁茶资源的开发利用。方法以熊果酸浸出率为考核指标,采用正交实验法考察诸因素对浸出率的影响。乙醇提取液经沉淀富集和大孔树脂柱色谱纯化得到熊果酸,采用HPLC分析检测。结果优化的提取条件为:在85℃水浴中,以体积分数90％乙醇水溶液为提取溶剂。固液比为1:14,提取2次,每次提取2.5 h,熊果酸的浸出率可达到1.44％。D8树脂分离富集的最优条件:样品溶液熊果酸浓度1-2 mg·mL-1,样品溶液pn=6.0-7.0,吸附1 h,洗脱剂pH=11.0,依次用水、4倍体积30％乙醇、4倍体积90％乙醇以2-3mL·min-1的流速洗脱,收集90％乙醇洗脱液,熊果酸回收率为97.82％,纯度为95.0％。结论 该工艺产品纯度高,收率高,可实现工业化。

模拟移动床色谱法分离纯化链甾醇

以羊毛脂中提取的链甾醇为原料,采用模拟移动床色谱法(SMBC)进行了分离纯化。以C18为固定相,甲醇为洗脱液,采用四区SMBC系统,每区有两根色谱柱(150 mm×10 mm×10μm),经过两次SMBC分离,得到高纯度链甾醇产品。以纯度、生产率和溶剂消耗量为指标,确定链甾醇在SMBC中的最佳分离条件为:切换时间6.4 min,四区流量分别为9.97,7.53,8.53和4.97 mL/min,进料流量1.00 mL/min(第一次SMBC分离);切换时间6.0 min,四区流量分别为9.95,7.98,8.53和6.62 mL/min,进料流量0.55 mL/min(第二次SMBC分离)。结果表明,以90.1%含量的链甾醇粗品为原料,在优化实验条件下,先除去吸附能力比链甾醇强的杂质,再除去吸附能力比链甾醇弱的杂质,得到高纯度(≥98.9%)的链甾醇产品,回收率为93.8%。

高产人参发根系的建立及发根中皂苷Rb_1的分离纯化

利用发根农杆菌A4菌株在2年生人参根外植体上直接诱导产生人参发根。对16个人参发根系比生长速率及人参总皂苷含量进行测定,得到3个具有较高比生长速率和人参皂苷含量的发根系。其中发根系R9923具有最高的比生长速率,在连续培养4周后生长量比最初提高了28.8倍。研究R9923发根系的生长曲线和皂苷含量变化规律发现,随着发根生物量的增加,发根中皂苷含量积累得也越多。利用HPLC法测定了R9923发根系中单体皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。生长4周的人参发根总皂苷含量达15.2 mg/g,其中人参皂苷Rb1的含量为68.3%,比3年生栽培人参中Rb1含量高1.3倍,可以用于大规模培养。用硅胶柱层析法从人参发根总皂苷中分离提纯人参皂苷Rb1,当洗脱剂中氯仿∶甲醇=7.5∶2.5(体积比)时洗脱效果较好。用硅胶柱法提取的皂苷Rb1纯度为89.95%,得率为72.7%。

金枪鱼皮胶原蛋白肽分离纯化工艺的研究

采用超滤法、凝胶层析柱法、离子交换法、高效液相分析法等研究金枪鱼皮胶原蛋白肽(TSCP)的分离纯化工艺。结果表明:通过超滤分离分子量越低TSCP组分DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子清除率越高,且分子量小于3kDa的TSCP-IV组分的清除率最高,IC50值分别为0.17,0.20,1.64mg/mL。对TSCP-IV进行Sephadex G-25凝胶柱过滤层析后得到4个峰,峰GP-I的得率较高,且峰GP-I对DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子的清除率较高,IC50值分别为50.01,86.56,623.75μg/mL。将凝胶过滤组分GP-I经离子交换柱用不同pH值溶液梯度洗脱后得到4个峰,pH 5.61时的洗脱峰IP-II的得率较高,且IP-II对DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子清除率较高,IC50值分别为21.59,20.28,121.23μg/mL。用高效液相色谱分析表明,IP-II为纯度较高的金枪鱼皮胶原抗氧化肽段。

制备型高效液相色谱在天然产物分离中的应用

制备型高效液相色谱法在天然产物的分离纯化中得到广泛应用。从制备型高效液相色谱法的技术分类及其在天然产物研究中的实际应用方面对目前国内外制备型高效液相色谱技术研究现状进行了综述,对其发展动态进行了展望。

藜麦糠黄酮的分离纯化及成分测定

以超声辅助法提取藜麦糠黄酮粗提物为原料,采用大孔树脂进行吸附与解吸附。考察了7种树脂对藜麦糠黄酮的吸附与解吸附性能,借助静态吸附动力学实验筛选最优纯化藜麦糠黄酮的树脂。结合静态与动态吸附解吸实验得出最优纯化条件:样液浓度0.5mg/mL,上样量35mL,上样液pH 6.0,乙醇浓度75%,乙醇溶液体积180mL。在此条件下分离纯化后,藜麦糠中黄酮纯度从13.0%增加到68.0%,回收率为77.4%。表明用HPD950大孔树脂对藜麦糠黄酮分离纯化有良好的效果。对纯化后的藜麦糠黄酮样品进行高效液相色谱分析,样品中槲皮素、槲皮苷、芦丁和异槲皮素4种成分得到确认。

‘紫娟’茶花色苷的分离鉴定

依次以MCI gel CPH 20P(75~150μm)树脂和Sephadex^(TM) LH-20葡聚糖凝胶为层析柱填料,对‘紫娟’茶花色苷进行分离纯化,采用5%乙酸-甲醇溶液和5%乙酸溶液对花色苷提取液梯度洗脱,得到6种花色苷组分。采用薄层层析、高效液相色谱及高效液相色谱-电喷雾-串联质谱对‘紫娟’茶花色苷组成成分进行研究。结果表明:从‘紫娟’茶鲜叶中分离出的花色苷为飞燕草素-3-O-半乳糖苷、矢车菊素-3-O-半乳糖苷、飞燕草素-3-O-(6-(Z)对香豆酸)吡喃半乳糖苷、矢车菊素-3-O-(6-(Z)对香豆酸)吡喃半乳糖苷、飞燕草素-3-O-(6-(E)对香豆酸)吡喃半乳糖苷、矢车菊素-3-O-(6-(E)对香豆酸)吡喃半乳糖苷。

中压制备色谱在天然产物分离纯化中的应用

中压制备色谱（medium pressure liquid chromatography, MPLC）是相对于常压色谱和高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）而言,其压力介于0~200 psi之间,主要应用于天然产物化学、生物化学、药物化学、有机合成以及生命科学等领域产品的分离与纯化。MPLC 一般由计量泵、检测器、收集器和工作站组成。MPLC最大特点是分离速度快、效率高,可短时间内制备毫克到数十甚至百克的样品,可应用于正相填料和反相填料。与常压柱色谱相比,它具有分辨率高、分离速度快的优势和制备量大、时间短的特点。近年来, MPLC已逐渐发展为一种备受欢迎的分离和纯化方法。本文主要介绍了MPLC的特点、与高速逆流色谱的比较以及反相MPLC在分离纯化中的应用等。

蛋白质提取及分离纯化研究进展

蛋白质的分离纯化是蛋白质研究领域的关键技术之一。介绍了从动植物原料中提取蛋白质的方法。综述了各类不同的分离提纯技术,其中重点介绍了高效液相色谱法。指出了蛋白质分离纯化面临的问题及其解决方法。