利用酵母双杂交研究铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiB的自身相互作用

从铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)PCC7820中克隆了生物钟基因kaiB,并将其克隆入酵母双杂交系统的两个质粒pGADT7和pGBKT7中。经测序验证后,将重组质粒pGADT7-kaiB和pGBKT7-kaiB转化酵母菌AH109进行自激活性和自身相互作用的检测和验证。结果表明,铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiB无自激活性,KaiB蛋白自身能发生相互作用。因此,可用KaiB蛋白为诱饵利用酵母双杂交系统筛选文库钓取与KaiB发生相互作用的蛋白。

蓝藻生物钟核心振荡器的KaiB-KaiC相互作用机制

蓝藻是已知的具有昼夜节律生物钟调控机制的最简单生物,其生物钟的核心是一个由三个蛋白质(Kai A、Kai B、Kai C)组成的,不依赖于转录翻译水平调控的核心振荡器.研究表明这三个蛋白质仅在体外试管中反应就会表现出周期性磷酸化振荡现象.分子水平研究表明:Kai A加速Kai C的自磷酸化,而Kai B抑制Kai A使Kai C去磷酸化,从而Kai C的磷酸化/去磷酸化形成周期性反复.但是Kai B如何与Kai A,Kai C相互作用,目前还不清楚.本文重点介绍了最近几年来在Kai B-Kai C相互作用机制上的研究进展,并结合我们的一些初步研究,对Kai B-Kai C相互作用的关键问题进行展望,以期为该体系的深入研究提供参考.

KaiB调控蓝藻生物钟振荡的分子机制

蓝藻PCC7942的基因簇Kai ABC编码的Kai A、Kai B及Kai C蛋白对单细胞蓝藻的生物节律非常重要。蓝藻翻译后生物钟是受一系列生物化学反应控制的,其中包括磷酸化反应、ATP水解、单体的交换以及各种分子构象的变化,从而维持了生物振荡的准确与精密。本文对近些年来Kai B在翻译后振荡体系中参与Kai蛋白的相互作用而共同调节生物振荡,对ATP酶的影响及诱导Kai C单体的交换等一系列过程进行了综述,并介绍了Kai B与信号输出蛋白Sas A的竞争关系,这对揭示体外生物钟的工作机制有着非常重要的意义。