开心散治疗抑郁症与抑郁合并心肌梗死差异机制网络药理学研究及关键靶点验证

目的:采用网络药理学方法探讨开心散治疗抑郁症和抑郁症合并心肌梗死(myocardial infarction,MI)的主要成分、作用靶点、传导通路和作用机制的异同并对关键靶点进行实验验证。方法:基于公共数据库结合ADME算法筛选开心散有效成分和作用靶点;通过DisGeNET数据库筛选抑郁症和MI及其共病靶点;利用STRING 11.0数据库构建蛋白-蛋白互作(protein-protein interactions,PPI)网络;通过核心靶基因导入基因功能注释数据库(the database for annotation,visualization and integrated discovery,DAVID)进行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)靶点相关通路分析;通过Cytoscape构建“药物成分-靶点-通路”网络;分析药物成分血脑屏障通过性,并采用Autodock Vina软件进行分子对接验证;建立抑郁症体外模型,采用蛋白质免疫印迹法(western blot,WB)对关键蛋白表达进行验证。结果:筛选出抑郁症与MI共同靶点28个;开心散主要成分30种,治疗抑郁症潜在靶点36个,其中关键靶点为Akt1、TNF、MAPK8、JUN、PTGS2、IL1B、IFNG、GSK3B、NOS2、DRD1等;开心散治疗抑郁症合并MI的主要成分14种,共同作用关键靶点为Akt1、TNF、IL1B、GSK3B、NOS2、BAX、NR3C2、NOS3、ESR1、ADRB1;开心散治疗抑郁症的成分较治疗抑郁症合并MI共同成分具有更强的血脑屏障通过性;分子对接结果显示山柰酚作用于Akt1靶点,参与调控PI3K/Akt通路;体外实验证实山柰酚可上调抑郁模型细胞Akt1蛋白表达。结论:开心散治疗抑郁症和抑郁症合并MI成分和靶点既有相同之处也有不同之处,体现“异病同治”的特点,且其治疗抑郁症主要侧重于对中枢神经系统和内分泌系统的调节,验证实验证实开心散对于治疗抑郁症和抑郁症合并MI具有有效性。

高温瞬时灭菌对开心散有效成分含量及微生物学指标的影响

目的:比较不同高温瞬时灭菌条件下开心散的灭菌效果,结合灭菌后样品中有效成分含量的变化,确定最佳灭菌条件。方法:采用高温瞬时灭菌法对2~8目的远志、人参、茯苓和石菖蒲4味中药的粗颗粒进行灭菌,分别考察160、165、170℃3个温度水平,灭菌时间分别为5、7、9 s。在洁净区对灭菌粗颗粒分别进行粉碎,过六号筛后均匀混合,制得开心散。参照《中华人民共和国药典》2020年版进行微生物限度检测,并采用高效液相色谱法对开心散灭菌前后的样品进行含量检测。结果:9个灭菌条件下开心散样品的需氧菌总数均小于1×104CFU·g^(–1)、霉菌和酵母菌总数均小于1×102CFU·g^(–1)。同时,控制菌项下的大肠埃希菌、沙门菌、耐胆盐革兰阴性菌均未检出,所有开心散灭菌样品均符合口服散剂的微生物限度要求。开心散中8个有效成分(远志[口山]酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、茯苓酸、β-细辛醚和α-细辛醚)的含量受不同灭菌温度和时间影响。结论:结合需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌结果和有效成分含量变化情况,最终确定灭菌温度160℃、灭菌时间5 s为开心散最佳高温瞬时灭菌条件。

补肾健脾开心散通过TLR4/NF-κB通路改善AD大鼠炎症的机制

目的观察补肾健脾开心散对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及脑皮质区Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB通路相关炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β表达的影响,探讨其作用机制。方法60只SD大鼠随机分为空白(Ctrl)组、模型(AD)组、补肾(BS)组(3.6 g/kg补肾方)、健脾(JP)组(4.05 g/kg健脾方)、开心(KX)组(2.34 g/kg开心方)、补肾健脾开心(BSJPKX)组(9.99 g/kg补肾健脾开心散),每组10只。采用D-半乳糖(D-gal)注射制备AD大鼠模型,BS组、JP组、KX组、BSJPKX组分别以相应药物灌胃,Ctrl组、AD组给予等量生理盐水,1次/d。给药4 w后,Morris水迷宫实验检测学习记忆能力,分别用免疫组化法、实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测脑皮质组织TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β表达。结果与Ctrl组比较,AD组空间学习记忆能力明显下降(P<0.05,P<0.01),TLR4/NF-κB通路被激活,IL-1β、TNF-α表达显著增高(P<0.05,P<0.01);经补肾健脾开心散治疗后,与AD组比较,BSJPKX组空间学习记忆能力显著改善(P<0.05,P<0.01),TLR4/NF-κB通路被抑制,IL-1β、TNF-α表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论补肾健脾开心散可以保护AD大鼠神经元,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB信号通路减轻神经炎症有关。

开心散抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的机制

目的:研究开心散(Kaixin San,KXS)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法:以过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析,荧光染色观察及流式细胞技术,考察KXS对凋亡的保护作用;采用比色法测定caspase活性、Western blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,RT-PCR技术分析Bcl-2和Bax mRNA的表达,考察KXS抗凋亡的机制。结果:KXS可以有效地改善H2O2诱导的PC12细胞的凋亡,抑制caspase-3、caspase-9的活性,降低胞浆中细胞色素C的水平,增加Bcl-2mRNA的表达,减少BaxmRNA的表达,从而导致Bcl-2/Bax比值的增加。结论:KXS可能通过线粒体途径抑制H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。

开心散和当归芍药散对高脂饲料喂养的慢性应激大鼠糖脂代谢的影响及HPA轴相关机制

目的:探讨开心散和当归芍药散对高脂饲料喂养的慢性应激大鼠糖脂代谢的影响及潜在机制。方法:50只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、高脂加应激模型组、褪黑素组(20 mg/kg)、开心散组(445 mg/kg)和当归芍药散组(3 360 mg/kg),灌胃给药。除正常对照组外,各组大鼠给予高脂饲料喂养,并于每日给药1 h后进行应激处理,连续6 w。每日记录大鼠体质量,给药3 w后收集24 h尿液,测定皮质酮水平。给药6 w后进行大鼠腹腔糖耐量(IVGTT)试验,后处死大鼠,测定血清空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胰岛素(INS)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)、褪黑素(MLT)水平,并测定大鼠肾上腺质量、肝糖原和肌糖原水平,计算肾上腺指数、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI)。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量、IVGTT(120min)及血清CORT水平显著降低,血清TG、TC、LDL-C及尿液CORT水平显著升高。开心散和当归芍药散对上述指标具有调节作用。结论:开心散和当归芍药散可能通过促进MLT分泌和调节HPA轴活性改善模型大鼠的糖脂代谢紊乱。

开心散对小鼠抑郁样行为及海马中脑源性神经营养因子的影响

目的观察开心散对悬尾模型小鼠行为学、脑内单胺类递质及海马中脑源性神经营养因子(BDNF)水平的影响,探究开心散的抗抑郁效果与海马中BDNF含量的相关性。方法采用小鼠悬尾实验,观察不同剂量开心散对小鼠不动时间的影响;HPLC法测定脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)的含量;蛋白质印迹法检测小鼠海马中cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB、BDNF的表达;RT-PCR检测海马中BDNF mRNA的表达,Pearson相关性检验确定开心散的抗抑郁作用与海马中BDNF蛋白和mRNA水平的相关性。结果开心散可缩短悬尾小鼠不动时间(P<0.05),可增加小鼠脑内单胺类递质(DA、5-HT)和海马中CREB、p-CREB、BDNF的含量(P<0.05),其抗抑郁作用与海马中BDNF水平呈良好相关性(蛋白质:r=-0.694,P<0.01;mRNA:r=-0.547,P<0.01)。结论开心散对小鼠的抗抑郁作用与海马BDNF水平呈正相关性,提示开心散可能通过增加海马中BDNF表达发挥抗抑郁作用。

Synapsin1磷酸化参与开心散改善Aβ诱发的小鼠记忆障碍

目的观察开心散(Kaixin-San,KXS)对β淀粉样蛋白(amyloidβ,Aβ)所致小鼠记忆障碍的影响并探索其突触前膜机制。方法将小鼠随即分为3组,对照组、模型组(Aβ组)及开心散组(Aβ/KXS组)。Aβ组和Aβ/KXS组小鼠侧脑室注入5μL的Aβ1-42(1μM),对照组注射等体积生理盐水。Aβ/KXS组于实验开始前7天连续灌胃开心散(0.15 g·kg^-1)。采用Morris水迷宫和新奇事物认知方法评价各组小鼠学习记忆能力,电生理学测定高频刺激后第一分钟的PS振幅,蛋白质免疫印迹(Western-blot)法检测各组小鼠海马突触前膜突触蛋白1(Synapsin1,SYN1)及磷酸化突触蛋白1(phospho-SYN1,p-SYN1)的蛋白表达水平。结果 Morris水迷宫结果表明,与对照组比较,Aβ组小鼠逃避潜伏期明显延长(P <0.05),穿越平台次数明显减少(P <0.05);与Aβ组比较,Aβ/KXS组小鼠逃避潜伏期明显缩短(P <0.05),穿越平台次数明显增加(P <0.05)。新奇事物认知,与对照组比较,Aβ组小鼠对C物体的探索偏好指数b明显降低(P <0.05);与Aβ组比较,Aβ/KXS组小鼠探索偏好指数b明显增加(P <0.05)。电生理学测定,与对照组相比,Aβ组小鼠PS振幅降低(P <0.05);与Aβ组相比,Aβ/KXS组小鼠PS振幅明显增加(P <0.05)。且Aβ/KXS组小鼠海马区p-SYN1/SYN1灰度比值明显增加(P <0.05)。结论开心散增加突触前膜Synapsin1磷酸化可能是开心散改善Aβ诱发小鼠记忆障碍的机制之一。

开心散对抑郁模型大鼠海马CX3CL1-CX3CR1信号轴的影响

目的:从CX3CL1-CX3CR1信号轴的角度探讨开心散的抗抑郁功效及其作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、开心散低剂量组(2.7 g/kg)、开心散高剂量组(10.8 g/kg)、氟西汀组(10.8 mg/kg),每组12只。采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)的方法建立抑郁大鼠模型,每天随机采用1种应激方法,连续4周。应激造模1周后开始灌胃给药,给药21 d。采用旷场测试和强迫游泳实验评价大鼠的抑郁样行为,ELISA试剂盒检测海马区组织匀浆液中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)的含量,HE染色观察海马区组织形态,免疫组化法和Western blotting法检测海马组织CX3CL1、CX3CR1蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠自主活动评分降低(P<0.01),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),海马组织中5-HT、DA含量降低(P<0.01),神经元密度降低,整体损伤明显,CX3CL1和CX3CR1平均光密度值及相对表达量均显著增加(P<0.01);与模型组比较,开心散高剂量组大鼠自主活动评分增加(P<0.01),游泳不动时间减少(P<0.01),抑郁样行为明显改善,海马组织中5-HT、DA含量升高(P<0.05),神经元损伤明显缓解,CX3CL1和CX3CR1平均光密度值及相对表达量均降低(P<0.01或P<0.05)。结论:开心散能够通过抑制CX3CL1-CX3CR1信号轴的激活发挥抗抑郁作用。

加味开心散对多因素神经损伤痴呆小鼠学习记忆能力的影响

目的研究加味开心散对多因素神经损伤痴呆小鼠学习记忆能力的影响及作用机制。方法利用多因素神经损伤构建痴呆小鼠模型,给以加味开心散水提物与水醇共提物,以石杉碱甲(0.05mg/kg)作为阳性对照药物,连续灌胃10d;采用Morris水迷宫与主动避暗实验等行为学实验,评价加味开心散对多因素神经损伤痴呆小鼠学习记忆能力的影响。同时测定受试小鼠大脑皮层中胆碱酯酶(ChE)、超氧化物歧化酶(SOD)活力,神经生长因子(NGF)及其前体蛋白表达水平,探索其作用机制。结果行为学测试结果显示加味开心散可明显缩短小鼠Morris水迷宫定位导航潜伏期,增加空间探索中穿越平台次数,减少上台前游泳距离;降低主动回避实验中明暗箱穿梭错误次数。降低ChE活性,提高NGF的表达水平。水醇共提物效果优于水提物。结论加味开心散可明显增强多因素神经损伤痴呆小鼠的学习记忆能力,其作用的机制可能与抑制乙酰胆碱降解,提升神经因子表达有关。

开心散含药血清对β-淀粉样蛋白致SH-SY5Y细胞损伤的影响

目的:研究开心散含药血清对β-淀粉样蛋白所致人神经母细胞瘤SH-SY5Y损伤的影响及其机制。方法:SD大鼠灌胃给予开心散(0.58 g/Kg,1.16 g/Kg,2.32 g/Kg),连续7天,每天2次,第8天末次给药后1 h腹主动脉取血,制备开心散含药血清,将不同浓度的开心散含药血清加入SH-SY5Y细胞孵育2 h后,加入Aβ_(25-35)(10μmol/L),共同培养24 h。采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,活性氧表达及线粒体膜电位。结果:与正常对照组细胞比较,Aβ_(25-35)(10μmol/L)可以明显降低SH-SY5Y细胞的细胞存活率,增加细胞凋亡率,升高细胞内活性氧的含量,降低线粒体膜电位;开心散含药血清可以明显抑制细胞凋亡,提高细胞存活率,降低活性氧表达及提高线粒体膜电位(P<0.01)。结论:开心散含药血清能减轻Aβ25-35所致的细胞损伤,可能与保护线粒体,减少细胞凋亡有关。

开心散神经系统作用现代研究

开心散源于《备急千金要方》,由人参、远志、茯苓和石菖蒲4味药组成,是中医益智安神的基本方剂之一。现代药理研究表明,开心散具有保护神经细胞、改善记忆、增强学习能力、抗抑郁和抗老年痴呆等作用。近年来,随着抑郁症和老年痴呆症患者数量的增加,开心散凭借其独特的优势,受到越来越多的关注,故该文对近年来关于开心散的文献进行了梳理,围绕开心散中的主要活性成分和开心散全方对于神经系统调控这一方面展开综述,以期为后续的研究提供参考。

开心散对双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)致AD大鼠的治疗作用及机制研究

目的考察开心散对双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)致AD大鼠的治疗效果,初步明晰其作用机制。方法以“β-淀粉样蛋白毒性学说”为依据,使用脑立体定位仪在SD大鼠双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)寡聚肽段,从而复制AD大鼠模型。将痴呆大鼠随机分为模型组、石杉碱甲组、开心散低剂量组、中剂量组与高剂量组,每组10只。另取10只大鼠颅内注射等量的生理盐水为假手术组,正常大鼠10只作为空白对照组。连续灌胃给药30 d。通过Morris水迷宫行为学测试观测大鼠学习记忆成绩的变化;HE染色及Nissl染色观察脑组织病理形态;ELISA法检测脑组织中胆碱能神经递质(ACh、AChE、ChAT)、炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)及β-淀粉样蛋白(APP、Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42))的含量;IHC法解析皮层、海马组织中tau蛋白及GSK-3β的表达水平;Western blot法察看脑组织中BAX与BCL-2的表达程度。结果与模型组相比,开心散干预组大鼠逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数增多,在目标象限的停留时间及游泳路程所占百分比均有增加(P<0.05或P<0.01);皮层、海马组织神经元数量增多,形态结构趋于正常,且尼氏小体数量增加,胞浆着色变深;脑组织中AChE活性减弱,ChAT及ACh含量明显升高(P<0.05或P<0.01);TNF-α、IL-6、IL-1β、APP、Aβ_(1-40)及Aβ_(1-42)的含量显著下降(P<0.05或P<0.01);皮层、海马组织中tau蛋白及GSK-3β的阳性表达量皆有下调(P<0.05或P<0.01);BAX蛋白的表达水平趋于下降,且BCL-2/BAX的比值有不同程度的升高趋势(P>0.05)。结论开心散对AD损伤大鼠的痴呆症状与脑组织损伤有较好的治疗效果,其作用机制涉及到胆碱能系统的修复、炎症因子释放的抑制、β-淀粉样蛋白的清除及tau蛋白磷酸化水平的调控。

开心散对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响

目的:探讨开心散对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响。方法:清洁级Wistar大鼠60只,随机分为5组,空白组、模型组、开心散低剂量组、开心散中剂量组、开心散高剂量组,每组12只,采用Aβ1-42寡聚体注射大鼠双侧海马区进行造模,造模成功后进行4周的治疗,开心散组给予开心散低、中、高剂量灌胃治疗,空白组及模型组给予等量蒸馏水灌胃。各组经过治疗后,记录其逃避潜伏期、第2象限时间百分比、穿越次数的变化。结果:自定位航行实验第2天开始,开心散各剂量组逃避潜伏期均显著缩短,高剂量组下降趋势明显快于中、低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);第2象限时间百分比及穿越次数变化中,开心散各剂量组均有提高,但开心散高剂量组提高幅度较中、低剂量组显著,差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组与中剂量组相比无显著差异(P>0.05)。结论:开心散能够有效提高大鼠学习记忆能力,且高剂量开心散疗效最优。

开心散提取物抗焦虑作用及其化学成分研究

目的:探索开心散提取物对大鼠的抗焦虑作用以及药效物质基础。方法:将大鼠随机分为模型组(Con)、阳性组(地西泮)、开心散提取物高剂量组(12 g/kg)、中剂量组(6 g/kg)、低剂量组(3 g/kg),并通过足刺激(0.5 mA)建立大鼠焦虑模型,分别灌胃给药7 d。采用高架十字迷宫试验(EPM)和旷场实验(OFT)进行行为学实验,为进一步确证开心散的抗焦虑作用,以ELISA法检测大鼠5-羟色胺(5-HT)的含量。同时,通过UPLC-DAD-ESI-MS n初步推断其功效成分组的化合物。结果:行为学数据表明,在高架十字迷宫实验,与对照组相比,开心散给药组(12 g/kg,6 g/kg)的大鼠均表现得更加活跃好动(P<0.05);5-HT检测结果显示,与对照组相比,给药组显著提高大鼠脑内神经递质5-HT的含量,并具有统计学意义(P<0.05)。建立开心散提取物的UPLC色谱图以及UPLC-MS-MS n总离子流图,根据质谱裂解信息以及文献对比,共解析图谱得到39个化合物。结论:开心散提取物具有显著的抗焦虑作用,主要含远志寡糖酯、远志酮、远志皂苷、人参皂苷和茯苓三萜类等成分。

开心散联合盐酸多奈哌齐片对阿尔茨海默病的初步临床研究

目的:初步观察口服开心散联合盐酸多奈哌齐片治疗阿尔茨海默病的效果。方法:将104例阿尔茨海默病患者,随机分为两组,每组52例,对照组给予盐酸多奈哌齐片口服治疗,试验组给予开心散联合盐酸多奈哌齐片,疗程为24周。观察两组治疗主要症状和简易精神状况检查量表评分。结果:试验组总有效率为80.77%,对照组总有效率为61.54%,两组临床总疗效比较,经χ2检验,P<0.05,有显著性差异。结论:开心散联合盐酸多奈哌齐片对阿尔茨海默病有良好治疗效果。

开心散通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制阿尔茨海默病小鼠神经炎症的作用机制

目的:探究开心散对阿尔兹海默病(AD)小鼠神经保护作用及对NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路的影响。方法:40只小鼠随机分为4组:正常组、模型组、开心散组和盐酸多奈哌齐组,每组10只。经过3个月的干预,Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力,ELISA法检测血清中白细胞介素(IL)-18、IL-1β、β-淀粉样蛋白_(1-42)(Aβ_(1-42))的表达水平。尼氏染色和免疫组化观察海马CA1区病理形态及IL-18、IL-1β表达。Western Blot法检测海马中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数及目标象限停留时间明显减少(P<0.01),血清中Aβ1-42、IL-18、IL-1β水平显著升高(P<0.01);海马区尼氏体数量明显减少,NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和开心散组小鼠逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间明显延长(P<0.05,P<0.01),血清中Aβ1-42、IL-18、IL-1β水平显著降低(P<0.05,P<0.01),海马区尼氏体数量增加,NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达显著减少(P<0.05,P<0.01)。结论:开心散可能通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制炎症小体活化,抑制细胞焦亡,从而发挥神经保护作用。

基于整合药理学结合GEO数据集分析开心散防治阿尔茨海默病分子机制

目的基于整合药理学平台联合GEO芯片差异基因分析的方法,分析开心散治疗AD的作用机制。方法通过检索中医药整合药理学研究平台(TCMIP)和Drugbank数据库,获得开心散组方药物活性成分和相关分子靶点。通过GEO数据库获取GSE4757芯片数据,使用R语言获取其差异基因,绘制热图和火山图。通过Cytoscape 3.7.2构建开心散与AD的差异基因分子靶点图,使用Bisogenet和CytoNCA绘制靶点拓扑网络,并进行开心散与AD基因的GO功能富集和KEGG通路富集分析。结果获得开心散治疗AD的活性成分86个,与GEO共有的差异基因29个,构建PPI拓扑网络,筛选出核心的候选基因6个,与KEGG通路富集基因合并,获得治疗疾病的重要基因为CHRM1、CHRM2、ACHE、CHRM3、CASP8、PTGS2、DRD1、CACN1S、ADRB1。GO功能条目获得375条,主要涉及血管收缩、突触后膜可塑性,神经递质传递等。KEGG富集分析主要涉及胆碱能突触信号通路、cAMP信号通路、钙信号通路、神经-配体-受体相互作用信号通路等。结论开心散治疗AD具有多成分、多靶点、多通路的特点,可通过抑制炎症反应、降低乙酰胆碱酯酶活性、调节钙离子浓度等通路发挥治疗AD的作用。

开心散抗抑郁作用的靶点群发现及分子机制研究

基于靶点“钩钓”策略鉴定开心散在脑组织中的抗抑郁靶点群,探索靶点群相关药理学信号通路,诠释开心散抗抑郁的分子机制。通过慢性不可预见性温和应激(CUMS)方式建立Balb/c小鼠抑郁模型,以糖水偏好及强迫游泳行为学实验评价开心散抗抑郁作用;进而利用光交联反应将开心散药效组分键合到磁性微球表面,形成开心散成分芯片,从抑郁小鼠脑皮层、丘脑、海马组织中捕获直接作用靶点蛋白,并通过液相色谱高分辨质谱联用(LC-MS/MS)进行鉴定;利用Cytoscape软件进行靶点蛋白通路富集分析,同时通过免疫组化和蛋白免疫印记等方法对可能的靶点生物学功能进行验证。研究发现,开心散对抑郁小鼠的行为学指标有明显改善作用;靶点鉴定实验发现开心散药效组分在皮层、丘脑和海马组织中的潜在作用靶点分别有64、91和44个,靶点功能主要与加压素调控的水重吸收、沙门菌感染、甲状腺激素合成等信号通路相关。免疫组化和免疫印记等分析表明,开心散上调了抑郁小鼠脑皮层中加压素(AVP)的表达,上调了小鼠丘脑中热休克蛋白60(HSP60)、细胞色素C氧化酶4(COX4)、促甲状腺激素释放激素(TRH)的表达,并下调了丘脑中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)及NF-κB p65的表达。因此,开心散可能调控了皮层中的加压素信号通路,以及丘脑中的能量代谢、甲状腺激素、炎症反应等信号通路发挥抗抑郁作用,而对海马影响较弱。

开心散对慢性应激抑郁模型大鼠学习记忆的影响

目的:研究经典古方开心散对慢性应激抑郁模型(CMS)大鼠学习记忆能力的影响及可能的作用机制。方法:将大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组(盐酸氟西汀10 mg.kg-1)、开心散各剂量组(1 000,500,250,125 mg.kg-1),建立CMS大鼠模型,连续灌胃21 d;采用糖水消耗试验、旷场试验评价开心散抗抑郁行为学活性,采用Morris水迷宫评价开心散对CMS大鼠学习记忆能力的影响,并测定各组大鼠全脑中单胺类递质、乙酰胆碱(Ach)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性和海马中脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白水平。结果:行为学测试结果表明开心散能明显提高CMS大鼠的糖水偏嗜度和旷场试验总路程,明显缩短Morris水迷宫定位导航的潜伏期,增加空间探索中的穿越平台次数、原平台所在象限游泳距离和时间;增加动物全脑中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和Ach的含量,并提高海马内BDNF的水平,减少AchE。结论:开心散可明显改善CMS大鼠的抑郁行为,增强CMS大鼠学习记忆的能力,其作用的机制可能与增加全脑中单胺递质和Ach含量,提高海马神经营养能力有关。

开心散类方对慢性应激大鼠行为学及中枢单胺类神经递质的影响

开心散类方治疗抑郁症的疗效已得到多项研究证实,为研究组方相同、配比不同的6个开心散类方对慢性应激大鼠大脑单胺类神经递质的影响,并结合类方的入血成分差异,比较其抗抑郁作用,探讨药效-配伍的关系及可能的药效机制。利用经典孤养结合慢性不可预知性温和应激(CUMS)抑郁模型,并建立HPLC和UPLC-Q-TOF-MSE检测方法,研究大鼠海马和皮层单胺类神经递质(NE,DA,5-HT)的含量变化和部分类方的入血成分。结果显示,《备急千金要方》之定志小丸显著增加了模型大鼠的行为学得分,并且明显增加了模型大鼠海马NE,5-HT的含量以及皮层NE,DA,5-HT的含量,抗抑郁作用最显著;《古今录验》之定志丸明显增加了模型大鼠的糖水偏嗜度和旷场得分,显著增加了模型大鼠海马NE的含量以及皮层NE,DA,5-HT的含量,显示了一定的抗抑郁作用;《医心方》之开心散显著增加了模型大鼠的体重,明显增加了模型大鼠海马NE和皮层DA的含量;《千金翼》之补心汤明显增加了模型大鼠海马5-HT和皮层DA的含量;《医门方》之开心丸只显著增加了模型大鼠皮层DA的含量;《千金要方》之开心散未见抗抑郁作用。结果表明,类方抗抑郁作用的不同可能与入血成分的差异有关。