猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用

为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。

猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。

超声联合染色体筛查在Down’s综合征诊断中的应用

目的探究超声联合染色体非整倍体无创DNA产前检测(Non-invasive prenatal genetic testing,NIPT)在Down’s综合征(DS)诊断中的应用。方法回顾性收集2020年6月-2023年6月太康县人民医院收治的疑似DS高危患者210例为研究对象,通过超声、NIPT及两项联合对DS进行诊断,与羊水细胞染色体核型分析结果进行对比,采用ROC曲线分析三者诊断敏感度、特异性、准确性与诊断价值。结果在210例疑似DS患者中,经羊水细胞染色体核型分析证实,DS患者26例(12.38%,26/210),非DS患者184例(87.62%,184/210)。以羊水细胞染色体核型分析结果作为金标准,超声诊断DS的敏感度为69.23%(18/26),特异度为92.93%(171/184),超声诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性一般(Kappa=0.574);NIPT诊断DS的敏感度为84.62%(22/26),特异度为97.83%(180/184),NIPT诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.806);两项联合诊断DS的敏感度为92.31%(24/26),特异度为98.37%(181/184);两项联合诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.892)。两项联合检出率明显高于超声检查,且两项联合、NIPT检查诊断误诊率均明显低于超声检查(P<0.05)。ROC曲线分析显示,超声、染色体筛查、两项联合检查诊断DS的AUC为0.811、0.871、0.953,提示两项联合检查对DS的诊断价值更高。结论超声联合染色体筛查进行DS诊断具有高准确性,利于提高孕妇接受度,具有较高临床价值,值得临床推广应用。

1例Lemierre’s综合征患者的药物治疗分析与监护

目的为Lemierre’s综合征的早期诊断、药物治疗及用药监护提供参考。方法医师根据患者病情及血宏基因组二代测序检测结果确诊患者为Lemierre’s综合征,临床药师参与了该患者的治疗全过程。治疗过程中,临床药师针对坏死梭杆菌感染,建议予哌拉西林钠他唑巴坦钠联合甲硝唑抗感染治疗;针对左侧颈内静脉炎并血栓形成,建议予依诺肝素钠注射液抗凝治疗。结果医师采纳临床药师建议,患者病情好转,准予带药出院。结论临床药师通过解读血宏基因组二代测序检测结果,同时结合患者病情,协助医师为该患者制定了个体化抗感染治疗及抗凝治疗方案,并进行用药监护,确保了患者用药的安全有效。

16s rRNA测序分析针灸治疗对腹泻型肠易激综合征(肝郁脾虚证)患者肠道菌群的影响

目的:从肠道菌群角度入手,探究针灸调节腹泻型肠易激综合征(IBS)的临床疗效及作用机理。方法:选取我院针灸科收治的肠易激综合征患者40例,按照3∶1比例随机分为针灸治疗组(30例),对照组(10例)。根据《中医消化病诊疗指南》评价临床疗效,应用16s rRNA测序检测治疗前后肠道菌群α多样性以及肠道菌群组成。结果:针灸治疗组患者治疗有效率高于对照组(93.33%vs 60%,P<0.05),对针灸治疗组中有效的28例患者的肠道菌群α多样性和组成差异进行分析:治疗后,反应物种丰富度的Chao指数、反应多样小的Shannon指数均优于治疗前(P<0.05)。在属水平上,与治疗前相比,治疗后双歧杆菌属、乳杆菌属、直肠真杆菌属、肠球菌属、粪杆菌属、拟杆菌属、毛螺菌属、罗氏菌属成为优势菌属(P<0.05)。结论:针灸治疗对腹泻型肠易激综合征(肝郁脾虚证)患者疗效显著。患者治疗前后肠道菌群的变化,提示针灸治疗可能可以通过调节肠道菌群,对腹泻型IBS发挥临床疗效。

原发性肾病综合征患儿血清LXA4、S100A4水平与病情、疾病转归的关系

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿血清脂氧素A4(LXA4)、S100钙结合蛋白A4(S100A4)水平与病情、疾病转归的关系。方法选取2020年3月至2022年3月南京明基医院收治的168例PNS患儿为研究对象,另选取来南京明基医院体检的150例健康儿童为对照组,将PNS患儿根据疾病活动度分为缓解期组(n=73)与发作期组(n=95)。采用酶联免疫吸附试验检测血清LXA4、S100A4水平。患儿出院后连续随访1年,根据预后情况分为预后良好组(n=138)与预后不良组(n=30)。采用Spearman相关分析血清LXA4、S100A4水平与疾病活动度的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清LXA4、S100A4对PNS患儿预后的预测价值;采用多因素Logistic回归分析PNS患儿预后的影响因素。结果缓解期组、发作期组血清LXA4、S100A4水平高于对照组,且发作期组血清LXA4、S100A4水平高于缓解期组(P<0.05)。PNS患儿血清LXA4、S100A4水平与疾病活动度均呈正相关(r=0.593、0.546,P<0.05)。预后良好组PNS患儿血清LXA4、S100A4水平低于预后不良组(P<0.05)。血清LXA4、S100A4预测PNS患儿疾病转归的曲线下面积(95%CI)分别为0.767(0.756~0.888)、0.846(0.824~0.863),二者联合预测的曲线下面积(95%CI)为0.905(0.879~0.924)。预后不良组病理类型为肾炎型占比、24 h尿蛋白定量、血尿发生占比高于预后良好组,尿蛋白转阴时间长于预后良好组,病理类型为单纯型及总蛋白、IgM水平低于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,有血尿发生(OR=2.300,95%CI 1.598~3.312)、24 h尿蛋白定量≥121.25 mg/24 h(OR=2.098,95%CI 1.489~2.956)、LXA4≥95.64 ng/L(OR=2.627,95%CI 1.737~3.973)、S100A4≥248.15 ng/L(OR=2.729,95%CI 1.777~4.192)是PNS患儿预后不良的危险因素(P<0.05)。结论血清S100A4、LXA4水平在PNS患儿中升高,且与疾病活动度及预后相关,有望作为评估PNS病情及预后的潜在标志物。

SOX10基因突变致合并耳聋的Kallmann综合征的研究进展

SOX10是神经嵴发育中的关键转录因子,在维持祖细胞多能性、细胞系谱专向分化和神经嵴细胞的发育中发挥着重要作用。研究指出,SOX10基因突变使神经嵴细胞发育不良而导致相应细胞、组织发生病变,包括内分泌系统、周围神经系统、循环系统和骨骼肌系统,所导致的疾病统称为神经嵴病。同时,SOX10基因突变会导致合并耳聋的Kallmann综合征(KS),KS是一种先天性性腺功能低下和嗅觉减退或缺失联合的遗传病,是特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(IHH)中常见的类型。因先天性下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)神经元的不完全迁移导致,具有临床和遗传异质性。本文就SOX10基因及其在合并耳聋的KS发病中作用的研究进展展开综述。

曹伟云教授治疗Good’s综合征合并支气管扩张验案1例

Good’s综合征是一种免疫缺陷性疾病,属于少见病,关于本病的报道并不多,尤其是采用中药治疗的报道少之又少。Good’s综合征患者因免疫力欠佳,易合并感染,尤以合并支气管扩张伴感染偏多。目前,西医治疗多为对症治疗,急性期予抗生素控制感染,但患者病情易反复。本文主要从曹伟云教授对Good’s综合征合并支气管扩张病的中医病因病机和辨证论治等方面展开论述,认为Good’s综合征合并支气管扩张或因初感外邪、侵犯肺系,或因痰热日久、消耗阴液,或因久病体虚、伤及阴阳引起,在治疗上或予以清热散邪,或予以养阴清热、化痰排脓,或予以补阳养阴,同时根据伴随症进行药物加减,通过整体观念辨证论治,扶正与祛邪动态调整,尤以扶正为要,增强患者的免疫力,改善患者体质,迅速缓解患者临床症状,减少病情发作次数和患者住院次数。

Kallmann综合征的MR影像特征

目的描述Kallmann综合征的MR表现,探讨其MR影像特征。方法对5例经临床证实的Kallmann综合征患者进行了MR检查。分析本病磁共振表现特征。结果5例患者MR检查均有嗅觉系统异常MR表现。5例嗅球未见显示,2例嗅沟未见显示,3例嗅沟发育不全,2例伴垂体前叶发育不全。结论Kallmann综合征的MR表现具有一定特征性,结合临床,可做出正确诊断。

Kallmann综合征的诊断与鉴别诊断

目的:研究Kallm ann综合征的诊断与鉴别诊断。方法:对Kallm ann综合征男性患者进行染色体核型分析、性激素检测、促性腺激素释放激素(GnRH)兴奋试验和磁共振成像(MR I)检查。结果:患者外周血淋巴细胞染色体检查为正常男性核型,兴奋试验提示对GnRH反应良好。睾酮、促卵泡生成素、促黄体生成素水平低下,MR I显示嗅球部缺失。结论:染色体核型分析、性激素检测、GnRH兴奋试验和MR I检查对于Kallm ann综合征的诊断和鉴别诊断是很重要的。

Kallmann综合征致病基因与诊疗研究进展

Kallmann综合征为低促性腺激素型性腺功能减退症,常伴有嗅觉丧失或减退。该综合征为先天性遗传性疾病,与成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)、成纤维细胞生长因子8(FGF8)、前动力蛋白受体2基因(PROKR2)、前动力蛋白2基因(PROK2)和KAL1等致病基因相关。文章就Kallmann综合征致病相关基因、临床诊疗、基因型与表型的关系以及基因蛋白生物学活性、功能和相互作用等方面的研究进展进行综述。

Kallmann综合征的影像学表现

目的提高Kallmann综合征(KS)的影像学诊断水平。方法回顾性分析2例KS患者的临床资料、腕关节X线片和头颅MR影像学特点。结果2例均表现为性发育迟缓,第二性征缺乏,嗅觉障碍;X线片提示腕部骨骺发育迟缓,骨龄延迟;MR冠状面T1WI和T2WI均发现嗅球、嗅束缺如,嗅沟消失。结论KS的影像表现具有一定特征性,能为临床诊断提供重要的依据;临床应注意对KS与Klinefelter综合征进行鉴别。

Kallmann综合征的研究进展

Kallm ann综合征是一种罕见的遗传病,它表现为促性腺激素分泌不足的性腺功能减退伴嗅觉丧失或嗅觉减退。目前研究已发现Kallm ann综合征的3种遗传方式及其相关的疾病基因。现对Kallm ann综合征的临床诊治及疾病基因的研究进展作一综述。

Kallmann综合征的诊断及治疗

目的探讨Kallmann综合征的的诊断及治疗方法。方法对21例Kallmann综合征患者的临床资料作回顾性分析。结果本组21例均为男性,以男性不育为主要就诊原因者2例,其余19例以小阴茎、小睾丸等外生殖器发育异常就诊;10例嗅觉减退、11例无嗅觉;血清性激素水平低,染色体核型检查均正常。给予HCG、尿促性腺激素（HMG）、睾酮治疗2个月~3 a,20例阴茎长度、周径、睾丸体积、性激素均较治疗前明显改善。结论Kall-mann综合征临床表现有促性腺激素缺乏、性腺功能低下和嗅觉缺失三大特点,HCG、HMG、睾酮替代疗法是有效的治疗方法。

改良腮腺筋膜瓣术式对预防Frey’s综合征的作用

目的:为了提高腮腺浅叶良性肿瘤区域性切除术的手术效果,减少术后味觉性出汗综合征(Frey’s综合征)的发生。方法:治疗组选择32例腮腺浅叶良性肿瘤行保留腮腺筋膜的区域性切除术,常规筋膜上翻瓣,然后切开筋膜制作腮腺筋膜瓣,切除肿瘤及瘤周部分腺体组织,对位缝合筋膜瓣,复位分层缝合皮瓣。对照组选择30例腮腺浅叶良性肿瘤行常规筋膜上翻瓣的区域性切除术,比较两种术式的手术效果。结果:治疗组的32例病人,无1例发生Frey’s综合征,对照组的30例病人,有6例发生Frey’s综合征(占20%),两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:腮腺筋膜瓣在腮腺浅叶良性肿瘤区域性切除术中的应用,对预防术后Frey’s综合征的发生有重要的临床作用。

产蛋下降综合征病毒纤突蛋白Knob-S区原核表达及其活性分析

通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫鸡制备抗血清,通过血凝试验、Western blot和血凝抑制试验分析,表明该融合蛋白不能凝集鸡红细胞,无血凝活性;但可与EDSV阳性血清发生特异反应,并诱导机体产生特异性抗体,具有很好的抗原性。

核基因参与人类线粒体12S rRNA突变相关非综合征耳聋的临床表型

人类线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变可引起母系遗传性非综合征耳聋,并提高氨基糖甙类药物对该类耳聋的诱导作用。我们在江苏淮阴发现了一个非综合征耳聋大家系,家系个体发病呈典型的母系遗传特征,临床可表现为先天性耳聋、中年进行性耳聋乃至完全正常的表型。对家系个体进行研究后发现A1555G突变是引起该家系耳聋的主要原因。我们用EB病毒转化的方法对该家系部分个体行建系工作后,对家系中17个个体的类淋巴母细胞进行分析,其中包括具有耳聋症状的个体7人(患者组),具有同质性A1555G突变但表型正常的个体6人(携带组),正常婚配对照 5人,与正常婚配对照相比,患者组与携带组在线粒体蛋白合成速率及在葡萄糖或半乳糖培养基中的生长速度出现了不同程度的下降,且突变细胞系中线粒体功能缺陷的严重程度与个体的临床表型相关．这些发现强有力地支持了核基因参与了该疾病临床表型的形成。

猪繁殖呼吸综合征病毒S3毒株的分离及其免疫特性研究

从某猪场仔猪体内分离到一株 PPRSV毒株 ,该毒株能在 Marc-1 4 5细胞上增殖产生致细胞病变 ,该病变能被 PPRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型 PPRSV荧光抗体染色呈阳性反应 ,电镜观察到直径 55～ 60 nm的病毒粒子 ,接种阴性仔猪未见临床症状异常 ,但抗体检测阳性。命名该分离毒为 PPRSV-S3毒株。在 S3弱毒株分离鉴定的基础上 ,进一步在猪体上对其致病性和免疫力进行研究。S3毒株接种仔猪后 ,仔猪不表现任何症状 ,也不向外排毒。4～ 5周龄的仔猪接种 S3株后可产生坚强的免疫力 ,免疫后 4～ 6个月能抵抗强毒攻击。后备母猪配种前 2～ 3周免疫接种 S3株 ,怀孕 90～95d攻强毒 ,未发生流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等繁殖障碍现象。结果表明 ,S3是一株自然分离的弱毒株 ,且具有良好的安全性和免疫力。