抗纤益心方对去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨抗纤益心方对去甲肾上腺素(NE)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法采用CCK-8法筛选抗纤益心方最佳给药浓度。大鼠H9c2心肌细胞常规培养,饥饿8 h后细胞进行分组,正常组未做处理,模型组加100μmol/L的NE 100μl,抗纤益心方组加入筛选最佳浓度抗纤益心方溶液2μl+100μmol/L的NE 100μl、卡托普利组加入2×10^-5mol/L卡托普利5μl+100μmol/L的NE 100μl,各组设3个复孔,作用24 h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,并检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果最终筛选以0.25 mg/ml的抗纤益心方为干预浓度进行实验。与正常组比较,模型组细胞凋亡率升高,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组比较,抗纤益心方组和卡托普利组细胞凋亡率降低,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论抗纤益心方可抑制NE诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达有关。

抗纤益心方对扩张型心肌病模型小鼠心肌组织线粒体质量控制的影响

目的 探讨抗纤益心方治疗扩张型心肌病(DCM)的可能作用机制。方法 30只cTnTR141W转基因DCM小鼠随机分为模型组、抗纤益心颗粒组、辅酶Q10组,每组10只,另设10只C57BL/6J小鼠为正常组。辅酶Q10组、抗纤益心颗粒组分别给予辅酶Q10片1.5 mg/(kg·d)、抗纤益心方配方颗粒20.4 g/(kg·d)灌胃,正常组、模型组给予生理盐水7.5 ml/(kg·d)灌胃。干预8周后检测各组小鼠心功能[包括左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)、左室轴缩短率(FS)],观察心肌组织病理学形态及心肌超微结构,检测心肌组织三磷酸腺苷(ATP)和磷酸肌酸(PCr)含量,线粒体质量控制相关蛋白Drp1、Mff、Mfn1、Opa1、Pink1、Parkin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)表达水平。结果 与正常组比较,模型组LVEDD、LVESD增大,LVEF、FS降低(P<0.05);心肌细胞排列紊乱,纤维化明显,心脏超微结构损伤明显;PCr含量、PCr/ATP值降低(P<0.05),Drp1、Mff、Pink1、Parkin及PGC-1α蛋白表达均减少(P<0.05)。与模型组比较,抗纤益心颗粒组、辅酶Q10组LVEDD、LVESD降低,LVEF升高(P<0.05);抗纤益心颗粒组、辅酶Q10组心肌细胞形态均有所改善,病理纤维化程度减轻,心脏超微结构损伤减轻;抗纤益心颗粒组PCr含量、PCr/ATP值升高,Mff、Pink1、Parkin、PGC-1α蛋白表达增加(P<0.05),辅酶Q10组Pink1、PGC-1α蛋白表达增加(P<0.05)。与抗纤益心颗粒组比较,辅酶Q10组Parkin蛋白表达下降(P<0.05)。结论 抗纤益心方能有效改善DCM小鼠心功能,其机制可能与调控心肌组织线粒体质量控制有关。

抗纤益心方通过调节Drp1活性抑制去甲肾上腺素诱导大鼠H9c2细胞肥大

目的:探讨抗纤益心方对去甲肾上腺素(NE)诱导大鼠H9c2细胞肥大的影响及作用机制。方法:H9c2细胞培养24 h,用NE诱导建立H9c2细胞肥大模型,将细胞分为空白对照组、模型对照组、抗纤益心方250 mg/mL组、线粒体动力分裂蛋白1抑制剂1×10^(-5)mol/L组、线粒体动力分裂蛋白1抑制剂1×10^(-5)mol/L+抗纤益心方250 mg/mL组,药物作用24 h后,显微镜下观察细胞形态及检测单个心肌细胞表面积;RT-PCR法检测细胞肥大因子心房钠尿肽(Anp)、脑钠肽(Bnp)mRNA表达;电镜检测细胞线粒体超微结构;JC-1检测细胞线粒体膜电位(MMP)水平;Western blot法检测细胞ANP、BNP、发动蛋白相关蛋白1(DRP1)及其p-DRP1(s616)蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞相对表面积增大,Anp、Bnp mRNA表达均上调,线粒体结构损伤,MMP水平明显下调(P<0.05),ANP、BNP、p-DRP1蛋白表达上调(P<0.05);与模型对照组比较,抗纤益心方组及抗纤益心方+线粒体动力分裂蛋白1抑制剂组,细胞相对表面积减小、Anp、Bnp mRNA表达下调(P<0.05),线粒体结构损伤改善,MMP水平上调(P<0.05),ANP、BNP及p-DRP1蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01)。结论:抗纤益心方能够抑制NE诱导H9c2细胞肥大,其机制可能与改善线粒体结构与功能,下调DRP1去磷酸化表达有关。

抗纤益心方对扩张型心肌病模型大鼠心肌纤维化相关因子及心肌组织β-catenin/PPARγ信号通路的影响

目的探讨抗纤益心方治疗扩张型心肌病(DCM)心肌纤维化的可能作用机制。方法100只Wistar大鼠随机分为正常组8只及造模组92只。造模组大鼠采用自主饮用呋喃唑酮水溶液法制备DCM大鼠模型,将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、卡托普利组及抗纤益心方低、中、高剂量组,每组8只。抗纤益心方低、中、高剂量组分别给予抗纤益心方0.9、1.8、3.6g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利片10.13mg/(kg·d)灌胃,正常组与模型组给予生理盐水5.3ml/(kg·d)灌胃。干预4周后检测各组大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)和左室轴缩短率(LVFS),观察大鼠心肌组织病理变化情况,检测纤维化相关指标α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白表达,β连环蛋白(β-catenin)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)蛋白及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD升高,LVEF、LVFS降低(P<0.05),心肌病理损害加重,心肌组织α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、β-catenin蛋白及mRNA表达升高,PPARγ蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,抗纤益心方中、高剂量组及卡托普利组大鼠LVEDD、LVESD降低,LVEF、LVFS升高(P<0.05),心肌病理纤维化程度减轻,心肌组织α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达降低(P<0.05);抗纤益心方中、高剂量组大鼠心肌组织β-catenin蛋白及mRNA表达降低,PPARγ蛋白及mRNA表达升高(P<0.05)。与卡托普利组比较,抗纤益心方中、高剂量组大鼠心肌组织β-catenin蛋白及mRNA表达降低(P<0.05),LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS、Ⅰ型胶原蛋白、PPARγ蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。与抗纤益心方低剂量组比较,抗纤益心方中、高剂量组LVEDD、LVESD降低,LVEF、LVFS、PPARγmRNA表达升高,抗纤益心方高剂量组Ⅰ型胶原蛋白表达降低(P<0.05),抗纤益心方中、高剂量组组间各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抗纤益心方能够有效改善DCM大鼠心功能,抑制心室重构及心肌纤维化发展,以中、高剂量效果更好,其作用机制可能与调控心肌组织β-catenin/PPARγ通路有关。

参附益心方对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞凋亡及线粒体含量、膜电位的影响

目的探讨参附益心方对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2心肌细胞损伤的干预作用及相关机制。方法采用CCK-8法筛选参附益心方、辅酶Q10、氯沙坦钾实验药物浓度,MTT法筛选AngⅡ实验药物浓度。以H9c2心肌细胞为研究对象,以AngⅡ诱导H9c2心肌细胞损伤为模型,将细胞分为正常对照组、模型组、辅酶Q10组、氯沙坦组和参附益心方低、高剂量组。正常对照组正常培养24 h;模型组用含筛选浓度的AngⅡ的培养基培养24 h;参附益心方低、高剂量组及氯沙坦组、辅酶Q10组用含筛选出相应药物浓度及AngⅡ的培养基培养24 h。检测各组H9c2心肌细胞活性、线粒体含量及膜电位、活性氧簇(ROS)含量、细胞凋亡率,凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2基因表达,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白活性。结果最终选择参附益心方低、高浓度为0.25、0.5 mg/ml,辅酶Q10研究浓度为1×10^-4mol/L,氯沙坦钾研究浓度为1×10^-4mol/L,AngⅡ建立实验模型浓度为1×10^-5mol/L。与正常对照组比较,模型组大鼠心肌细胞活性、线粒体数量及膜电位、Bcl-2基因表达降低,ROS含量、细胞凋亡率及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax基因表达升高,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白活性亦升高(P<0.05);与模型组比较,参附益心方高剂量组和氯沙坦组、辅酶Q10组细胞活性、线粒体数量及膜电位升高,ROS含量、细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、Bax基因表达降低,Caspase-3、Caspase-9蛋白活性亦降低(P<0.05)。结论参附益心方可能通过改善心肌细胞线粒体功能,降低ROS含量,从而减少AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞发生凋亡。