AUGMENTATION OF IMMUNE FUNCTIONS AND AUTOLOGOUS TUMOR-KILLING ACTIVITY BY KAPPA-SELENOCARRAGEENAN IN MICE BEARING SARCOMA 180

Objective: To study the enhancement of the immune functions and autologous tumor killing (ATK) activity by kappa selenocarrageenan (KSC) in mice bearing sarcoma 180. Methods: To measure the effects of KSC and/or Cyclophosphamide (Cy) on natural killer (NK) activity, lymphokine activated killer (LAK) activity, the produc tion of interleukin 2 (IL 2), ATK activity and the growth of sarcoma 180 (S 180 ). Results: KSC promoted NK activity, LAK activity and ATK activity in vivo , increased IL 2 production at 40 mg/kg/d×9d. It also enhanced the antitumor action of Cy (20 mg/kg/d×9d) and offset the inhibition of Cy on immunocopetent cells. The ATK activity in splenocytes of S 180 bearing mice could be induced and increased by recombinant interleukin 2 (rIL 2) in vitro . Conclusion: KSC has an up regulating effect on the immune functions and ATK activity in tumor bearing mice. It can be used as a biological response modifier (BRM) in cancer biotherapy.

硒化kappa-卡拉胶对烟民生理损伤的修复作用

本实验选择19例年龄在39—59之间,烟史为15—30a,每日吸烟量为6—20支的男性为对象,连续服用硒化kappa-卡拉胶(100ug硒/d)三个月后,对几项指标的测定结果表明:微核、双链DNA及血硒水平均有明显差异,服硒前,19例烟民中微核淋巴细胞出现率为73.7％,淋巴细胞微核出现率为1.26±1.04‰,服硒后,微核淋巴细胞出现率为42.1％,淋巴细胞微核出现率为0.52±0.70‰,P<0.01;服硒前,双链DNA的含量为7.76±2.59％,服硒后增至10.5±2.19％,P<0.01;血硒水平变化更为明显,由服硒前的76.4±15.1ppb增至服硒后的148.3±44.1ppb,P<0.01.全部病例无任何毒、副反应。实验结果初步表明:硒化kappa-卡拉胶对烟民的生理损伤具有一定的修复作用。

乙醇抑制法提取低钾Kappa-卡拉胶

目的:以乙醇抑制卡拉胶溶解替代钾离子凝胶法提取卡拉胶。方法:对卡拉胶提取过程中的碱处理、清洗残碱及过滤后沉淀卡拉胶等工序的乙醇体积分数进行优化,并探索卡拉胶中钾离子的控制方法。结果:碱处理及清洗残碱过程中抑制卡拉胶溶解的最佳乙醇体积分数为60%,卡拉胶沉淀过程中60%乙醇溶液与胶液体积比(V_(60%乙醇)∶V_(胶液))为5∶1;该工艺下卡拉胶得率为(28.76±1.38)%,显著高于传统工艺的(22.9%);钾离子浓度为0.63%,显著低于传统工艺提取的(16.26%);黏度、硬度、弹性、咀嚼性和回复性与传统工艺提取的无显著差异。结论:乙醇抑制法提取的Kappa-卡拉胶K^(+)浓度和凝胶强度显著低于传统工艺提取的。

Kappa-硒化卡拉胶对老年大鼠心、肝、肾、血清脂质过氧化水平的影响

本文通过给予老年大鼠72mg/kg和12mg/kg两种剂量Kappa-硒化卡拉胶(k-SeC)灌胃四个月以观察其对老年大鼠心、肝、肾及血清脂质过氧化产物MDA含量的影响及心、肝、肾的病理改变。结果发现72mg/kg k-SeC组的大鼠心、肝、肾及血清脂质过氧化产物除雄性的肝脏和雌性的肾脏外均有不同程度的增高,但无统计学意义。12mg/kg k-SeC组的老年大鼠其心脏MDA含量明显高于对照组而肝、肾及血清均明显低于对照组,且除雄性肝脏外均有统计意义。病理切片表明各实验鼠脏器均有不同程度的充血、浊肿和空泡样变性,且以高剂量组为明显;苏丹黑染色胞浆颗粒以72mg/kg组稍多。上述结果表明大剂量k-SeC可能会对机体产生毒性作用,而小剂量k-SeC除心脏外能降低脂质过氧化。

Mu-、kappa-、delta-阿片受体在成年大鼠正常胃组织的免疫组织化学定位研究

目的观察mu-、kappa-、delta-阿片受体在成年大鼠正常胃组织中的分布与定位。方法选用成年雄性wistar大鼠胃组织切片进行免疫组织化学染色,用免疫组织化学技术对Mu-、kappa-、delta-阿片受体在大鼠胃组织的分布进行定位分析。结果mu-阿片受体免疫阳性物质主要分布于胃黏膜上皮及黏液层、胃主细胞、肌间神经丛等部位;kappa-、delta-阿片受体免疫阳性物质主要分布于胃主细胞、肌间神经丛等部位。结论mu-、kappa-、delta-阿片受体在胃主细胞膜和胞浆、肌间神经丛等部位均有分布,但仅mu-阿片受体还存在于胃黏膜上皮及黏液层,提示阿片受体参与了胃各种生物学功能及胃粘膜的损伤、修复与再生。

水合温度、胶用量和氯化钾用量对kappa-卡拉胶胶液黏度的影响

目的:实现kappa-卡拉胶在肉类制品、乳制品、甜点和果冻等食品工业领域以及药用无缝胶囊、烟用爆珠等领域的精准应用。方法:采用数显式黏度计对在不同水合温度、不同卡拉胶用量以及不同氯化钾用量下制备的kappa-卡拉胶胶液的黏度进行测定。结果:①水合温度对kappa-卡拉胶胶液的黏度具有较大的影响。随着水合温度的升高(固定水合时间1 h),kappa-卡拉胶胶液黏度下降。总体而言,kappa-卡拉胶用量越高,其黏度下降幅度越大。②kappa-卡拉胶胶液黏度随胶用量的增大而呈指数规律增加。③在低kappa-卡拉胶用量下,在试验所选用的KCl用量范围内,KCl用量对样品黏度的影响不大,但在高kappa-卡拉胶用量下,随着氯化钾用量的增大,样品的黏度有所增大。结论:水合温度、胶用量对kappa-卡拉胶的胶液黏度具有重要影响,氯化钾用量对黏度的影响相对较小。

牦牛kappa-酪蛋白基因第4外显子的克隆测序及多态性研究

依据普通牛的kappa-酪蛋白基因序列设计引物进行PCR扩增,测定了牦牛kappa-酪蛋白基因第4外显子全序列及部分第4内含子序列,用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ切割PCR产物发现,在牦牛群体中具有和普通牛相同的单倍体型。进一步对60个牦牛个体进行群体分析后发现,牦牛群体中的基因频率和基因型频率与普通牛的群体有着很大的差异。

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的:观察硒酸酯多糖(Kappaselenocarrageenan,KSC)对K562ADM耐药细胞的诱导凋亡效应,并探讨其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、WrightGiemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)观察K562ADM细胞凋亡;FCM测定K562ADM细胞Fas、P53和Bcl2蛋白表达水平;RTPCR检测Caspase3mRNA的表达。结果:50～500mg·L-1KSC抑制K562ADM细胞增殖,并诱导K562ADM细胞凋亡,细胞出现呈典型凋亡形态改变,DNA电泳可见DNA梯状条带(DNAladder);FCM分析出现亚G1期细胞群,S期细胞比例增高。Fas蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调,Caspase3mRNA表达显著增强,但P53蛋白表达无明显改变。结论:KSC通过Fas依赖性Caspase3激活途径诱导K562ADM细胞凋亡。

Kappa－硒化卡拉胶对阿霉素毒性的预防作用

Ｋａｐｐａ－硒化卡拉胶给大鼠ｉｇ５．１５．４５ｍｇ·ｋｇ－１．ｇｄ．共１４次．在１５．４５ｍｇ·ｋｇ－１剂量组能显著提高注射阿霉素（ｉＰ３ｍｇ·ｋｇ－１，隔日１次．共４次）之大鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶活性（Ｐ＜０．０５）．在３个剂量组不同程度改善心电图变化。对阿霉素引起的白细胞、血小板的减少也有抑制（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）．大剂量卡拉胶组．还可改善阿霉素所致心脏与肝脏的形态改变。Ｐ＜０．０１表３各组大鼠血小板计数值（×１０９·Ｌ－１，）各组均与阿霉素组比较．＊Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１＊Ｐ＜０．００１２．２，４对心及肝脏病理切片形态观察给药结束后第５周处死动物，取心、肝脏以３．３×１０３μｍｏｌ·Ｌ－１福尔马林固定，石蜡切片（５μｍ厚），ＨＥ染色，光镜检查。结果表明，阿霉素对心脏有明显的毒性作用，表现为心肌明显的空泡变，灶性肌溶解，而加亚硒酸钠和Ｋａｐｐａ－硒化卡拉胶，其变性程度及范围有改善，表现为肌细胞空泡变性及肌溶解的数量有较明显的减少。阿霉素对肝脏的毒性作用，表现为肝细胞明显的空泡变性及少量的点状坏死，如用硒化卡拉胶或亚硒酸钠肝细胞变性范围程度有不同改善，表现为空泡变性范围缩小，点状坏死减少，尤?

硒对猪细小病毒体外增殖抑制作用的研究

本文以PK-15细胞为模型,研究了亚硒酸钠、硒蛋氨酸和海藻硒多糖等三种硒化合物对猪细小病毒体外复制 的抑制作用,以及还原型谷胱甘肽、D-甘露醇等氧自由基清除剂对不同来源硒的抑制病毒作用的影响。结果表明: 三种硒化合物对猪细小病毒在PK-15中的复制呈现不同程度的抑制作用,在相同浓度时其强度依次为硒蛋氨酸、 亚硒酸钠、海藻硒多糖,随着浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,呈剂量依赖性关系。还原型谷胱甘肽和甘露醇均 有增强硒的抑制病毒复制作用,两者同时添加时,协同增强硒的抑制病毒复制作用。

硒化卡拉胶在小麦粉及其制品中的应用研究

以GB 14880—1994中规定的谷物食品强化硒化卡拉胶(硒酸酯多糖)标准下限值的1.1倍(0.154 mg/kg)为基准,设计在小麦粉中分别强化相当于0.154 mg/kg的0.5倍、1倍和1.5倍的硒化卡拉胶稀释预混料,与空白对照组比较,进行了粉质、拉伸等基础分析,并制作了馒头、面条及面包。研究结果表明:在小麦粉中适量强化硒化卡拉胶对面团粉质特性没有明显影响,而对小麦粉拉伸特性有一定的改良影响,面团的粉力和延伸度有随硒化卡拉胶添加量的增加而增加的趋势;在小麦粉中强化硒化卡拉胶后对馒头、面条和面包的色泽、滋味、气味等感官品质及内部质构无不良影响,强化硒化卡拉胶所制作的面包总评价比对照组好。因此,硒化卡拉胶作为营养强化剂在小麦粉及馒头、面条和面包中是适用的。

硒酸酯多糖对癌症患者血清MDA含量及CuZn-SOD活性的影响

目的：了解硒酸酯多糖对肿瘤患者体内ＭＤＡ及ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性的影响。方法：对６０例肿瘤病人随机分成３组：不服硒组，服硒４００μｇ／ｄ组及服８００μｇ／ｄ组并与１５名正常人对照比较。结果：癌症患者血清ＭＤＡ明显高于正常人（Ｐ＜０．０１），血清Ｓｅ及ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性明显低于正常人（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）；服硒酸酯多糖者化疗后血清Ｓｅ较不服者明显升高（Ｐ＜０．０５），ＣｕＺｎ－ＳＯＤ也明显升高（Ｐ＜０．０１），ＭＤＡ含量显著下降（Ｐ＜０．０５）；服４００μｇ／ｄ组与服８００μｇ／ｄ组之间上述各指标均无明显差异。结论：肿瘤病人摄入适量（４００μｇ／ｄ）硒酸酯多糖可能增加体内ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性，减轻了化疗药物对正常细胞的过氧化损伤。

硒酸酯多糖通过下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM细胞凋亡抑制

目的:研究硒酸酯多糖(Kappa-selenocarrageenan,KSC)对多药耐药K562/ADM细胞的诱导凋亡效应及其分子机制。方法:以白血病多药耐药细胞K562/ADM为KSC作用的靶细胞,用MTT比色法检测细胞增殖活性,形态学、DNA片段化和流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡;RT-PCR检测mdr1基因和Caspase-3基因mRNA的表达;FCM测定P-gp蛋白表达水平和Caspase-3活性。结果:KSC显著抑制K562/ADM细胞增殖,KSC诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学变化、DNA片段化和亚G1期细胞群等特征性改变。KSC下调K562/ADM细胞mdr1基因表达、抑制P-gp合成,并上调caspase-3基因表达、增强caspase-3活性。结论:KSC通过下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM多药耐药细胞的凋亡抑制。

硒化卡拉胶联合表阿霉素对肝癌HepG-2细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察硒化卡拉胶(KSC)和表阿霉素(EPI)联合应用对人肝癌HepG-2细胞生长及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT(噻唑蓝)比色法测定KSC和EPI对HepG-2细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50值及金式指数q判断两者联合作用效果;用倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A和Cdc25A、细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk2的表达水平。结果 KSC和EPI可明显抑制HepG-2细胞增殖,且有剂量依赖性。联合组的抑制效果更显著,且优于单一用药组。EPI单独用药48 h的IC50值为3.612 mg/L,与30mg/L KSC联合用药的IC50值降至0.807 mg/L,q值判断两药联合表现为相加作用。倒置显微镜观察给药后细胞形态发生变化,联合组细胞膜破裂呈坏死状。流式细胞术结果表明,两药均可导致S期周期阻滞。Western blot结果显示两药均可使Cyclin A、Cdc25A和Cdk2蛋白表达下调,联合给药组下降更明显。结论 KSC和表阿霉素可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,引起细胞周期S期阻滞,两药联合具有相加效应,这与其调节细胞周期相关蛋白的生成关系密切。

硒酸酯多糖增强荷瘤小鼠免疫功能和自身肿瘤杀伤活性的作用

本文研究了硒酸酯多糖(KSC)对荷S180肉瘤小鼠NK细胞活性、LAK细胞活性、IL-2分泌能力和自身肿瘤杀伤活性(ATK)的影响及抑癌效应.结果表明,KSC(40mg/kg·d×9d,ig)能增强荷瘤鼠NK细胞和LAK细胞活性,促进脾细胞产生IL-2,增强ATK活性;加强环磷酰胺(Cy,20mg/kg·d×9d,ip)的抑瘤作用,并能拮抗Cy对免疫活性细胞的抑制效应.体外用rIL-2激活荷瘤鼠脾淋巴细胞可诱生或增强ATK活性.本研究结果提示,KSC上调肿瘤宿主NK细胞和LAK细胞活性及IL-2的分泌水平,增强ATK活性,可作为生物反应调节剂(BRM)应用于肿瘤生物治疗.

P53介导的活性氧通路对硒酸酯多糖诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用

目的探讨P53介导的活性氧(ROS)通路在硒酸酯多糖诱导骨肉瘤细胞凋亡中的作用。方法采用不同质量浓度硒酸酯多糖处理OS-732细胞,分析各组细胞的增殖、凋亡情况、ROS水平及凋亡相关蛋白的表达水平。结果硒酸酯多糖处理后,OS-732细胞生长受到不同程度抑制,呈现出时间和浓度依赖性,60 g/L质量浓度处理48 h时OS-732细胞抑制率最高;20,40,60μg/m L质量浓度处理24 h后,ROS水平显著增加(P<0.05),OS-732细胞凋亡率显著升高,其中早期凋亡细胞及晚期凋亡细胞百分比与0μg/m L相比均有显著性差异(P<0.05);P53,Caspase-9及Bax表达随着药物质量浓度的增加而升高,而Bcl-2的表达显著降低(P<0.05)。结论硒酸酯多糖处理骨肉瘤细胞能显著抑制OS-732细胞的增殖活性,促进凋亡,细胞内高水平的ROS状态可能在此过程中有重要作用。

硒酸酯多糖和亚硒酸钠抗白血病效应的实验研究

应用ＭＴＴ比色分析法和细胞克隆形成法比较研究了有机硒化物－硒酸酯多糖和无机硒物－亚硒酸钠对白血病Ｋ５６２细胞的作用。结果表明：ＫＳＣ和Ｎａ２ＳｅＯ３体外在实验浓度范围内均对Ｋ５６２细胞的增殖具有显著的抑制作用，并有剂量反应；Ｋ５６２细胞具有我更新能力的细胞群体对硒的抑制作用更敏感；ＫＳＣ的抗白血病效应明显高于含同样硒量的Ｎａ２ＳｅＯ３，ＫＳＣ的作用约为Ｎａ２ＳｅＯ３的５倍。

硒卡拉胶减低顺铂肾毒性的临床研究

使用随机、开放、自身对比的方法，对４１例接受含顺铂方案化疗的癌症患者进行了硒减低顺铂毒性的临床研究。选择尿酶作为监测顺铂肾毒性的指标。结果表明：于化疗前４ｄ开始服用硒卡拉胶４０ｍｇ／ｄ（相当于纯硒４０００μｇ／ｄ），连续８ｄ，可使患者血硒含量显著升高，而未发现与硒相关的毒副反应。此剂量的硒可减轻含顺铂化疗方案引起的尿酶（ＮＡＧ，ＧＧＴ，ＡＡＰ，ＬＡＰ，ＡＬＰ）升高，从而在临床证明了硒可以减轻顺铂的肾毒性。

K-银环蛇毒素对小鼠被动学习和空间记忆的影响

以Ｋ－银环蛇毒素（Ｋ－ＢＧＴ，３．２５μｇ／ｋｇ）海马内注射可造成小鼠胆碱能神经Ｎ受体功能受损的学习记忆的障碍。水迷宫检测结果表明，Ｋ－ＢＧＴ组小鼠空间学习记忆明显下降，训练第４天，逃避潜伏期比第１天下降仅为１６．７％，而对照组逃避潜伏期比第１天下降达５８．３％。在第５天６轮共６０次训练中，对照组在规定时间内找到平台的百分数为８０．０％，而Ｋ－ＢＧＴ组仅为３３．３％。撤去平台后第１天，对照组穿越原平台所在部位的次数为（５．３±２．８）次，而Ｋ－ＢＧＴ仅为（１．９±１．２）次。此外搜寻平台方式构成方面也出现了明显变化。避暗测试结果表明，Ｋ－ＢＧＴ组比对照组潜伏期下降３８．３％，错误率比对照组增加了２．２５倍。卵磷脂４０ｍｇ／ｋｇ经胃灌服１４天对Ｋ－ＢＧＴ所致学习记快损伤具有一定的改善作用。

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。