恙虫病立克次体Karp株Sta56部分基因片段的扩增、克隆及鉴定

目的为了进一步完善恙虫病立克次体的株型鉴定技术，并且为临床提供诊断试剂。方法本文采用ＮＰＣＲ技术，参考并自行设计两对寡核苷酸引物（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４），从恙虫病立克次体Ｋａｒｐ株基因组ＤＮＡ中特异扩增出编码Ｓｔａ５６抗原的部分基因片段，经纯化后用ＢａｍＨⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切后，克隆到质粒ＰＵＣ１８中，转化大肠杆菌ＴＧ１，经ＰＣＲ和双酶切鉴定。结果与结论构建了重组质粒ＰＵＣ１８－ＲＫ，从而为该基因片段的表达奠定了基础。

恙虫病东方体Karp株56kD表膜蛋白基因的表达及免疫诊断应用研究

目的实现恙虫病东方体56kD表膜蛋白的原核表达并评价重组蛋白作为抗原的免疫诊断价值。方法亚克隆技术构建原核表达质粒载体pGEX-Sta56,转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-Sta56融合蛋白,亲和层析纯化融合蛋白,应用ELISA以评价其免疫诊断价值。结果pGEX-Sta56经测序鉴定Sta56基因以正确的表达框架连入载体,经过诱导表达得到正确大小的融合蛋白,应用纯化的GST-Sta56的ELISA检测结果与全细胞抗原有很高线性相关性,在小鼠血清检测中敏感性,特异性和准确性分别大于90%,70%和80%。结论成功表达重组的56kD表膜蛋白并可能替代传统的全细胞纯化蛋白,为建立快速、敏感和特异的免疫学诊断奠定了基础。

恙虫病东方体Karp株Sta56基因的克隆及序列比较的研究

目的扩增恙虫病东方体Karp株主要表膜抗原Sta56的开放读码框(ORF)全长,并进行序列比较研究。方法小鼠接种传代和体外细胞扩增分离恙虫病东方体Karp株,用PCR方法扩增恙虫病东方体Karp株Sta56基因,并采用TA克隆技术构建测序载体,对测序结果进行同源性分析比较。结果 扩增出Sta56的ORF全长,并TA克隆到测序载体pMD18-T vector,测序结果与Karp标准株的同源性为99.4％。结论 Sta56全长ORF克隆扩增成功,为进一步构建表达载体,进行Sta56蛋白表达研究提供基础。

恙虫病东方体Karp株56-kDa外膜抗原基因片段的原核表达及免疫原性研究

目的探讨恙虫病东方体56-kDa蛋白在大肠埃希菌中的表达及作为诊断性抗原的可行性。方法用PCR扩增恙虫病东方体Karp菌株编码56-kDa蛋白长约1 100bp的DNA,克隆至表达载体pET30a(+)。表达产物经SDS-PAGE、质谱分析及western blot鉴定分析。重组蛋白质纯化后作为包被抗原,用方阵实验确定最佳浓度包被,ELISA法检测其与立克次体目16种成员及10种致病菌阳性血清的反应性。用此重组蛋白质免疫小鼠后制备抗血清,分别用ELISA及间接免疫荧光法(IFA)检测抗血清的效价。结果重组质粒经PCR及测序分析证明,56-kDa外膜抗原的基因片段以正确的读码框连入到pET30a(+)质粒载体中,SDS-PAGE结果表明重组蛋白质在约46-kDa处有表达的目的条带,western blot分析显示该条带可与1∶1 600稀释的兔抗Karp血清反应,证实其具有免疫活性。质谱分析鉴定该蛋白质为恙虫病东方体56-kDa蛋白;方阵滴定确定选择抗原的最佳稀释度为1∶1 600,特异性分析结果表明,重组蛋白质除与查菲埃立克体、嗜吞噬细胞无形体及五日热巴尔通体存在弱交叉反应外,与其他细菌均无交叉反应。IFA及ELISA检测表明抗血清效价可达1∶1 600。结论构建的重组蛋白质可以作为恙虫病东方体快速诊断的抗原。

恙虫病东方体Karp株47kDa蛋白成熟肽的克隆与表达

目的 :克隆表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot)Karp株 4 7kDa表面蛋白的成熟肽 ,探索其作为疫苗及诊断抗原的可能性。方法 :采用PCR方法 ,从 OtKarp株菌种基因组DNA中扩增出 4 7kDa成熟蛋白基因片段 ,将该片段克隆于原核表达载体pQE30 ,构建成重组质粒pQE30 4 7,转化大肠杆菌 (E coli) ,经IPTG诱导表达 ,SDS_PAGE和Western_blotting检测目的蛋白的表达。结果 :①获得长约 12 72bp的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因 ;②SDS_PAGE和免疫印迹显示该重组质粒转化的E coli有一相对分子量约为 4 3× 10 4 的独特蛋白带 ;③重组表达质粒序列分析结果显示pQE30 4 7中插入的基因片段的序列与已报告的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因序列基本一致 ,并与已知序列相同。结论 :获得了OtKarp 4 7kDa蛋白基因 ,并在E coli中实现了表达 。

关于Karp猜想的一种新研究方法

关于图性质的Karp猜想是计算复杂性理论中的一个著名的悬而未决的问题,以往的研究方法仅仅是对某一种图性质进行研究,针对这一缺陷,给出了图性质的本质复杂性的概念,提出了以本质复杂性为基础的一种新的研究方法,这种方法的研究对象是一组满足某一特定条件的图性质,证明了只要其中一种图性质为诡的,这一组图性质均为诡的.

求解大规模CVRP问题的快速贪婪算法

为求解大规模具有能力约束的车辆路径问题(Capacitated Vehicle Routing Problem,CVRP),提出了一种快速改进贪婪算法CVRP-IMGR。基于贪婪算法思想设计了求解CVRP问题的贪婪算法CVRP-GR,在此基础上进一步采用K-d tree法和Held Karp模型改进了CVRP-GR的求解速度和求解质量,从而得到CVRP-IMGR。CVRPIMGR的复杂度可以达到O(nlogn),能够快速求解大规模(顾客数量大于500)CVRP问题。为验证CVRP-IMGR的有效性,分别采用CVRP-GR、CVRP-IMGR和经典构建型算法Savings求解了当前24个最大规模的CVRP算例,结果表明:CVRP-IMGR的求解速度远快于复杂度为O(n2logn)的CVRP-GR和Savings;CVRP-IMGR对所有算例的求解质量优于CVRP-GR,并且对18个算例的求解质量优于Savings。

恙虫病东方体58kDa热休克蛋白与47kDa外膜蛋白的基因嵌合及58-47嵌合基因在大肠杆菌中的表达

采用PCR方法 ,从恙虫病东方体Karp株基因组DNA中扩增 5 8kDa热休克蛋白的基因 ,将该基因分别与原核表达载体pQE30及 4 7kDa外膜蛋白的基因重组质粒 (pQE30 4 7)连接 ,构建pQE30 5 8及pQE30 5 8 4 7重组质粒 ,用重组质粒转化大肠杆菌。SDS PAGE显示 ,pQE30 5 8和pQE30 5 8 4 7转化的大肠杆菌分别产生一 5 8kDa重组蛋白和一 90kDa的双抗原 (5 8- 4 7)融合蛋白。免疫印迹分析显示Karp株免疫血清能特异识别 5 8kDa重组蛋白和 90kDa融合蛋白 ,90kDa融合蛋白既与 4 7kDa重组蛋白也与 5 8kDa重组蛋白的免疫血清特异反应 ,5 8kDa与 4 7kDa重组蛋白也被 90kDa融合蛋白免疫血清所识别。研究结果证明 5 8 4 7融合蛋白具有恙虫病东方体Karp株 4 7kDa外膜蛋白和 5

群体计算中的偶图匹配算法

大数据依赖高性能计算和复杂智能推理技术等特点,引发人机协作中群体计算任务的复杂性,使得人群与任务的有效匹配成为亟待解决的问题。针对人群和机群如何协作完成大数据任务,提出群体计算中偶图匹配策略-Hopcroft-Karp算法。该算法增强和扩展了匈牙利算法,考虑自适应分割任务的领域、关联度以及人群的背景和能力评估,解决人群与分割后任务群的合理匹配问题。通过实验验证该匹配能够有效提高任务完成的准确率。

立克次氏体传染病

恙虫病东方体Karp株核酸疫苗的构建及其免疫功能初步研究，恙虫病的临床观察与护理，恙虫病并发多脏器损害45例分析，罗红霉素治疗小儿恙虫病疗效观察。

立克次氏体传染病

恙虫病东方体Karp株相对分子质量为47蛋白基因的克隆与表达;实验室保存的恙虫病东方体Karp株与福建省分离株的sta 56基因的序列分析；我国近十年斑疹伤寒疫情概况及分析。

佛山市南海区鼠类自然感染恙虫病东方体基因型分析

目的 调查佛山市南海区鼠类自然感染恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi, Ot)的情况,了解当地Ot基因型的分布及特点,为防控恙虫病提供科学依据。方法 2017年7月利用鼠夹和鼠笼,在佛山市南海区恙虫病高发镇街采集鼠类动物样本,应用巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction, nPCR)扩增技术检测Ot 56kDa型特异性抗原(type-specific antigen, TSA)基因核酸片段,通过核酸序列比对确定Ot基因分型。用MEGA 10.0.5、DNAStar 7.1、MegAlign等生物信息学软件进行同源性与遗传进化分析。结果 共捕获鼠类200只,褐家鼠检出56kDa TSA基因片段6份,黄胸鼠检出1份,阳性率为3.5%(7/200)。南海序列(L65、L68、L118、L119、L122、L150和L153)在核苷酸水平与Kawasaki、Gilliam、TA763、Kato、Kuroki、Karp基因型相似性为71.8%~100.0%,氨基酸水平相似性为54.9%~100.0%。同源性和系统进化分析表明,南海序列与Ot中的Karp型具有较高的同源性和较近的亲缘关系,与其他型同源性较低,亲缘关系较远。L65、L119、L150和L153与台湾TW45R株、云南TN16-28株的核苷酸同源性为100.0%。结论 佛山市南海区存在鼠类Ot自然感染,褐家鼠为其主要宿主,当地恙虫病病原体属于Karp型。

图性质的Karp猜想

所有非平凡、单调的图性质的判定树复杂性等于, 其中n是图的顶点数. 这就是关于图性质的Karp猜想. 综述关于Karp猜想的研究进展.

恙虫病东方体Karp株47kD蛋白基因的表达及DNA免疫初步研究

目的 观察恙虫病东方体Karp株相对分子质量 (Mr)为 47× 10 3 蛋白基因的DNA免疫效果。方法 将恙虫病东方体Karp株Mr 为 47× 10 3 的蛋白基因插入真核表达载体pcDNA3.1( +) ,构建重组质粒pcDNA3.1 47。在证明该重组质粒可在哺乳动物COS7细胞中表达的基础上 ,单独和将其与Mr 为 40× 10 3 重组蛋白联合免疫小鼠。在每次加强免疫之后 10d ,检测小鼠体液和细胞免疫反应。结果 质粒DNA和蛋白联合免疫组所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖反应均高于重组质粒DNA和蛋白单独免疫组 ,而第二次加强免疫后重组质粒诱导脾淋巴细胞的增殖情况则显著弱于其它免疫组 (P <0 .0 5 )。结论 重组质粒pcDNA3 .1 47和重组Mr 为 47× 10 3 蛋白在刺激小鼠免疫反应上具有相互加强作用。

恙虫病东方体Karp株主要外膜蛋白基因的克隆与表达

目的 :表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi)Karp株 5 6 0 0 0表面蛋白 ,探索其作为诊断抗原的可能性。方法 :采用PCR方法 ,从Ot.Karp株菌种基因组DNA中扩增出 5 6 0 0 0成熟蛋白基因片段 ,将该片段克隆于原核表达载体pQE30 ,构建重组质粒pQE30 / 5 6 ,转化大肠杆菌 ,经IPTG诱导表达、SDS_PAGE电泳和免疫印迹检测目的蛋白的表达。结果 :(1)获得长约 15 0 0bp的Ot.Karp株 5 6 0 0 0外膜蛋白基因 ;(2 )SDS_PAGE电泳和免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子质量约为 5 6 0 0 0的独特蛋白带 ;(3)表达后菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要以包涵体形式存在 ;(4)重组表达质粒序列分析结果显示 ,pQE30 / 5 6中插入的基因片段的序列与已报道的Ot.Karp株5 6 0 0 0外膜蛋白基因序列基本一致。结论 :获得了Ot.Karp 5 6 0 0 0蛋白基因 ,并在大肠杆菌中实现了表达 ,表达的重组蛋白具有免疫反应性。

恙虫病东方体56 kDa抗原基因片段在不同载体的表达

目的 构建恙虫病东方体56kDa表面抗原基因(sta56)片段在不同载体的重组表达质粒,在E.coli中表达sta56重组抗原并比较不同表达系统对sta56的表达效果。方法 从含有恙虫病东方体Karp株sta56基因的重组克隆,扩增出不同长度的截短的sta56片段,定向插入pPROEX HTb及pET30a载体,转化大肠埃希菌DH5a或BL21(DE3),IPTG诱导表达,应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白表达情况,应用蛋白印迹(WB)方法分析重组抗原的活性。结果 成功构建含sta56不同长度片段的重组表达质粒pHTbOt957、pHTbOt498、pHTbOt342和pETOt957、pETOt498、pETOt342,各重组子均可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,SDS-PAGE显示各表达重组子表达不同分子量的重组蛋白,WB证实各重组蛋白均能被恙虫病患者阳性血清所识别。结论 恙虫病东方体Karp株sta56基因可在大肠埃希菌获得高效表达,pET30a对sta56的表达效果优于pPROEX HTb;重组蛋白具有免疫反应性,纯化后可用作免疫诊断抗原。

新疆部分地区人群及动物感染恙虫病东方体调查

目的调查新疆部分地区人群及动物感染恙虫病东方体(Ot)情况,并对媒介昆虫进行调查。方法采用多种方法捕获可能感染Ot动物取脾,当地牧民静脉取血,从野鼠体表捕获恙螨,用试剂盒提取DNA,应用巢式PCR(nPCR)检测Ot-Sta56基因;接种昆明小白鼠进行Ot病原传代分离。结果共采取人群血液2430份,在6份血液中检测并分离到Ot;捕获动物13种5783个(只),从5种啮齿动物(小家鼠、灰仓鼠、大砂土鼠、草原兔尾鼠、灰旱獭)、2种鸟类(麻雀、灰腹鹡鸰)的脾中检测并分离到Ot,从绵羊血液中检测到Ot。其他动物体内未检测到Ot。从野鼠体表分离恙螨5种,从博乐纤恙螨体内检测分离到Ot。基因序列分析表明,新疆地区存在恙虫病东方体的基因型以Karp型为主,可能存在Saitama型。结论新疆地区存在人群及动物感染Ot,其基因型以Karp为主,可能存在Saitama型。

WSN中基于SDMA的移动高能效数据采集

利用空分多址(SDMA)技术的低时延特性,提出了一种低时延、高能效的移动Sink数据采集算法.首先利用SDMA技术的兼容节点对,按最小能耗最多配对准则,找出最佳的数据汇聚点;然后以兼容节点对的位置特征作为权值来源,使用加权最大配对算法(Hopcroft-Karp算法),得出各汇聚节点对应的最优配对节点对集合;最后找出具有最多配对数目和最大覆盖集的数据汇聚点集合P′,访问集合P′的近似最短路径即是移动节点的最终路径.仿真结果表明,该算法在保持SDMA技术低时延优势的同时,延长了网络平均生存期,具有更好的能量均衡特点.

基于多关键字匹配算法的巡检视频评价系统的研究

针对当前巡检视频评价系统的缺陷,本文提出了基于多关键字匹配算法的巡检视频评价系统。将多关键字匹配算法应用到评论自动摘抄中,实现了对与视频相关评论的自动选择。同时结合本系统中存在多组关键字和视频标签长度无法限定等特点,对算法进行了改善与优化。