硫酸软骨素纳米硒可抑制T-2毒素诱导的大骨节病软骨细胞凋亡

目的确定硫酸软骨素纳米硒对T-2毒素干预体外大骨节病软骨细胞生长的影响。方法合成并表征硫酸软骨素纳米硒粒子,依据《大骨节病临床诊断标准》(WS/T 207-2010),选择Ⅱ/Ⅲ度KBD患者6例关节软骨进行体外分离、培养。分别给予硫酸软骨素纳米硒联合T-2毒素进行干预,采用MTT、HE染色和流式细胞仪观察细胞生长和凋亡的变化。结果合成的硫酸软骨素纳米硒中硒的含量为10.1%,可在蒸馏水中自组装成粒径为30-200 nm纳米粒子,红外图谱提示纳米硒与硫酸软骨素可能以共价键的方式结合;硫酸软骨素纳米硒在浓度为50-200 ng/ml可有效抑制20 ng/ml T-2毒素诱导大骨节病软骨细胞的凋亡作用,降低T-2毒素诱导软骨细胞的早期凋亡率[(8.64±1.57)%,P<0.05]。结论硫酸软骨素纳米硒具有抗T-2毒素诱导软骨细胞凋亡的作用,可作为一种潜在的治疗大骨节病的药物制剂。

T－2毒素对雏鸡软骨肝脏蛋白质DNA合成的抑制

雏鸡出壳次日起按１００μｇ／日剂量经口投与Ｔ－２毒素，为期８周，发现，Ｔ－２毒素对雏鸡的软骨和肝脏组织蛋白质、ＤＮＡ合成有明显抑制作用。实验组与对照组相比，肝脏组织蛋白质含量比值为０．６０∶１．００，ＤＮＡ含量比值为０．４９∶１．００；软骨组织中，蛋白质含量比值为０．６４∶１．００，ＤＮＡ含量比值为０．３９∶１．００。经琼脂糖凝胶电泳观察，未见实验组软骨和肝脏组织ＤＮＡ有断裂现象发生。

T-2毒素致软骨细胞损伤临界值和硒保护实验研究

目的：主要探索Ｔ－２毒素对体外培养软骨细胞致损临界值以及硒保护作用。方法：应用单层培养传代软骨细胞，用生化方法检测软骨细胞ＤＮＡ量和蛋白量，透射电子显微镜观察软骨细胞超微结构。结果：（１）Ｔ－２毒素在０．００１～０．００５ｍｇ／Ｌ培养液中（以下相同）剂量范围内，随浓度增加，Ｔ－２毒素对软骨细胞ＤＮＡ合成和细胞分裂增殖影响逐渐增大，加硒后该影响有所减弱，但仍不能阻止损伤的发生；（２）Ｔ－２毒素在０．０００５ｍｇ／Ｌ时，对软骨细胞的影响甚微；Ｔ－２毒素在０．００１ｍｇ／Ｌ和０．００５ｍｇ／Ｌ时，细胞损伤明显，与对照组比较有显著差别（Ｐ＜０．００１）。

黑龙江省大骨节病病区非病区主食中T-2毒素检测报告

用ＥＬＩＳＡ法检查黑龙江省大骨节病病区富裕县３４号村住户当地产面粉１０份，Ｔ－２毒素均为阳性，全距为２１２．５～３５０．５ｎｇ／ｇ，均数２７８．４ｎｇ／ｇ；当地产玉米粉５份，均为阳性，全距３５．８～２３７．３ｎｇ／ｇ，均数１２２．０ｎｇ／ｇ。非病区双城幸福村住户当地产玉米粉５份，４份阳性，全距为５２．４～２２４．８ｎｇ／ｇ，均数１５．２ｎｇ／ｇ；采该村购自外地的面粉、大米各５份，均＜５０ｎｇ／ｇ。尚志县河东乡，当地产大米１０份，７份阳性，全距为３．９～８．５ｎｇ／ｇ，均数６．

T－2毒素对培养软骨细胞生长代谢的作用

报告了Ｔ－２毒素对培养软骨细胞生长代谢的作用。结果显示，在软骨细胞生长早期和旺盛时期，Ｔ－２毒素抑制细胞ＤＮＡ合成，影响软骨细胞的分裂增殖，同时也影响到细胞的代谢功能，其毒性作用随Ｔ－２浓度升高细胞损伤加重。对于较成熟的软骨细胞，其毒性作用不明显。

青海省兴海县大骨节病病户面粉中T-2毒素的检测报告

目的检测病户主食中Ｔ－２毒素含量。方法用气谱法检测。结果在兴海县上、下鹿圈村采集面粉１７份，其中检出Ｔ－２毒素阳性面粉１０份，含量全距为８０．０～５２０．０ｎｇ／ｇ，有９份含量大于１００ｎｇ／ｇ，３份大于３００ｎｇ／ｇ。结论在大骨节病病户主食中有较多Ｔ－２毒素检出，其阳性率、含量与病情相符合。

T-2毒素及其对关节软骨和心肌毒性研究进展

T-2毒素是A族单端孢霉烯族毒素中毒性最强的毒素,也是我国两种地方病,即大骨节病和克山病最可能的致病因素,主要对关节软骨及心肌有毒害作用。T-2毒素可以诱导细胞凋亡,引起家畜、家禽关节超微结构的改变和关节软骨细胞的损伤;还能影响心肌离子通道电活动,影响脂质过氧化物代谢,也能改变心肌超微结构;微量元素硒对T-2毒素致关节软骨和心肌损害有明显的保护作用。大骨节病和克山病的高发地区粮食中T-2毒素含量偏高20%左右,所以大骨节病和克山病可能和T-2毒素中毒有关。

T-2毒素对软骨细胞整合素表达的影响及硒的拮抗作用

目的研究T-2毒素和硒对软骨细胞整合素mRNA表达的影响,探讨T-2毒素和硒与大骨节病发病的关系。方法体外单层培养C-28/I2软骨细胞,用MTT法测定细胞在不同浓度T-2毒素和不同作用时间下的增殖活性,通过Real-time PCR法检测软骨细胞在加T-2毒素或补硒后整合素α1、α2、α3、β1、β3、β5等10种亚基的表达情况。结果 T-2毒素可抑制C-28/I2软骨细胞系的增殖活性,在T-2毒素作用下软骨细胞系中整合素的表达谱有显著变化,其中显著上调的整合素亚基有αv和β1,下调的亚基有α2、α5和β5,加硒可在一定程度上拮抗这种改变。结论 T-2毒素对软骨细胞增殖有明显的抑制作用,而硒能通过拮抗整合素的表达而发挥对软骨细胞的保护作用。

T-2毒素致小型猪关节软骨的毒性实验研究

本研究表明T-2毒素对软骨组织具有较强的毒性作用,能致小型猪关节软骨发生类似人类大骨节病样的深层坏死,并引起基质中蛋白聚糖代谢改变,硒能在一定程度上拮抗T-2毒素的作用。T-2毒素致小型猪关节软骨实验模型是与大骨节病极类似的动物模型。T-2毒素与大骨节病的病因关系需作进一步的临床流行病学和实验室的验证。

T-2毒素对雏鸡软骨及肝脏DNA、蛋白质合成的抑制及药物拮抗作用

实验分成四组,对照组为雏鸡出壳次日起按每日每公斤体重100μg剂量经口投与 T-2毒素,其余三组为实验组,均投与对照组相同剂量的 T-2毒素,同时第一组按每周每公斤体重0.07mg 剂量经口投与亚硒酸钠,第二组按每日每公斤体重5mg 剂量经口投与 VC,第三组按每日每公斤体重0.5mg 剂量经口投与 VE,均为期8周。发现 VC、Se、VE 对 T-2毒素抑制软骨组织 DNA 合成,均有一定程度的拮抗作用(F 检验,P 值均<0.01),其中以 VC 拮抗作用较优。

T—2毒素、MON和硒对中国小型猪罹患骨软骨病的影响

中国小型猪在低硒(35ng/kg)饲料喂养条件下投给T—2毒素(1.5mg/kg饲料)或串珠镰刀菌素(MON,lmg/kg体重)105天,观察了动物前、后肢软骨的病理变化,首次证实所用的纯系农大Ⅰ号小型猪可以发生与家猪相同的骨软骨病(OC),出现三种类型OC损害。其中第三型损害(关节软骨深层带状、片状坏死)与T—2毒素和MON的投给关系明显,与单纯的低硒饲养无关;给毒的同时补给亚硒酸钠(使饲料含硒200ng/kg),未能防止这种损害发生,但能使病变的严重程度减轻。第一、二型OC损害的发生与毒素和硒的投给之间无明显规律性。本实验小型猪的OC—Ⅲ型损害与人类大骨节病的关节软骨损害相似,但骺板软骨未检见人类大骨节病那样的带状、片状坏死。

T-2毒素和硒对小型猪肋软骨基质代谢的影响

采用低硒饲料、含Ｔ－２毒素的低硒饲料和含Ｔ－２毒素的补硒饲料喂养小型猪，通过测定小型猪软骨氨基多糖组分和胶原含量，观察低硒和Ｔ－２毒素对小型猪软骨氨基多糖和胶原代谢的影响。结果表明，在本实验条件下，Ｔ－２毒素可影响软骨氨基多糖的代谢，单纯低硒喂养与软骨氨基多糖代谢无明显关系，但补硒能一定程度的拮抗Ｔ－２毒素对软骨氨基多糖代谢的毒性影响。

T-2毒素对软骨细胞CD44表达的影响

目的 研究T-2毒素对软骨细胞CD44表达的影响,为阐明T-2毒素损伤软骨组织的机制提供科学依据。方法 利用RT-PCR方法检测CD44 mRNA在软骨细胞中的转录情况;利用免疫组化方法检测软骨细胞表面CD44的表达情况。结果 在T-2毒素作用5 d后,毒素组、毒素加硒组CD44 mRNA表达水平均低于对照和对照加硒组。同时免疫组化结果显示,毒素组体外再建软骨组织CD44表达最低,其次为毒素加硒组,对照加硒组最高。结论 T-2毒素对于软骨细胞的CD44表达具有明显的抑制作用。

T-2毒素对大鼠骨矿化影响的实验研究

为了解Ｔ－２毒素对骨生长代谢的影响，我们应用骨形态计量学及硬组织切片法研究了Ｔ－２毒素对骨矿化的影响。结果发现，Ｔ－２毒素可影响大鼠骨矿化率及类骨质形成。结果提示：Ｔ－２毒素可抑制骨组织生长发育。

T-2毒素对体外培养兔软骨细胞增殖活性的影响

目的研究大骨节病的可疑致病因子T-2毒素对原代培养的兔软骨细胞增殖的影响,探讨大骨节病的发病机制。方法分别用含0,1,10,20,100μg/L T-2毒素的DMEM/F-12培养基体外培养兔软骨细胞5 d,采用四氮甲基唑蓝法每天检测软骨细胞的存活率。结果软骨细胞的生长抑制程度与T-2毒素呈浓度依赖和时间依赖关系;T-2毒素的抑制作用在第5天时接近饱和。结论 T-2毒素确能抑制软骨细胞的生长,可能是大骨节病的重要病因。

硒对T-2毒素致中国小型猪关节软骨损伤的作用

中国小型猪在低硒（35ng/kg）饲料喂养条件下，饲喂T－2毒素（1．5mg/kg饲料）和亚硒酸钠（200ng／kg饲料）105d，观察其前后肢软骨的病理变化及较合基质中胶原及蛋白聚糖组分的变化。结果表明T－2毒素能致中国小型猪关节软骨深层发生类似人类大骨节病的关节软骨损害，并能引起软骨基质中蛋白聚糖含量降低。而单纯低硒不能引起类似的损害。补硒对T－2毒素所致关节软骨的损伤具有一定的保护效应，使病变严重程度减轻，并能改善软骨基质的生化代谢。

THE EXPERIMENTAL STUDY ON THE EFFECTS OF SIX MYCOTOXINS ON THE CULTURAL CHONDROCYTES

The effects of deoxynlvalenol (DON), T--2 toxin, nivalenol (NIv), hutenolide (BuT).alternariol methyl ether(AME) and monlliformin (cON ) on rabbit articular chondrocytes were observed by using the method of chondrocyte monolayer culture. The amounts or DNA in chondrocytesand glucuronate in matrix were measured. And the chondrocytes were observed by inversion microscope and transmission electron microscope (TEM). The results showed that the cultured chondrocytes were damaged by all the six mycotoxinsl and the synthesis of DNA and the divided reproductionof chondrocytes were restrained; the damage errect was more evident, esl,ecially in the early stage ofculturel the higher concentration or toxin in the media was used, the lower density of the culturalckondrocytes was observed; the cells were even round damaged and dead, so long as the media contolued toxin. When the six mycotoxins arrected the cultural chondrocytes r.spectively, three dirfereut kinds or ultrastructural changes in ckondrocytes were seen by TEa. The relationship betweenmycotoxiu and KBD was preliminarily discussed, and some problems still need further investigation..

T-2毒素致大骨节病软骨损伤机制的研究进展

大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)是一种地方性、变形性骨关节病,可对发育过程中的四肢软骨内化骨造成损伤,病因至今尚未明确。近年来,国内外学者从免疫毒性与氧化应激、炎症反应、线粒体凋亡等方面研究了T-2毒素及其代谢物致大骨节病软骨损伤的机制,主要包括转化生长因子-β受体(TGF-βRs)信号通路、免疫调节因子、炎症因子白细胞介素(IL)-1β和凋亡酶激活因子(APAF1)等,它们通过诱导人体软骨细胞损伤、抑制基质合成和加速细胞分解代谢等方式促进KBD病程进展。本文从分子层面综述了T-2毒素的免疫毒性及其毒性作用与KBD软骨损伤关系的研究进展,以期为防治KBD提供科学依据。

T-2毒素和硒对人软骨蛋白聚糖酶的影响

目的 研究T-2毒素和硒对人软骨蛋白聚糖代谢的影响.方法 体外培养胎儿软骨细胞,根据施加的实验措施将其分为8组,对照组（T-2毒素：0 mg/L,硒：0 mg/L）、1、10、20μg/L T-2毒素组、加硒（0.1mg/L）组、1、10、20 μg/L T-2毒素加硒（0.1 mg/L）组,每组设3个平行样.在T-2毒素和（或）硒作用5d后,采用免疫蛋白印迹法检测软骨细胞蛋白聚糖的蛋白表达水平,用RT-PCR方法检测软骨细胞蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2的mRNA表达水平.结果 硒、T-2毒素对蛋白聚糖的蛋白表达量、蛋白聚糖酶-1 mRNA表达水平、蛋白聚糖酶-2的mRNA表达水平有影响（F=0.294、27.71,107.45、362.25,34.68、22.26,P均＜0.05）,硒与T-2毒素存在交互作用（F=79.99、230.76、388.33,P均＜0.05）,表现为拮抗作用.在硒水平为0 mg/L时,1、10、20 μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖的蛋白表达（0.278±0.015、0.235±0.029、0.195±0.028）均低于0 mg/L的T-2毒素组（0.472±0.0358,P均＜0.05）；在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20 μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖的蛋白表达（0.399±0.028、0.299±0.020、0.263±0.019）均高于0 mg/L的T-2毒素组（0.197±0.018,P均＜0.05）.在T-2毒素分别为1、10、20μg/L时,0.1 mg/L硒组的蛋白聚糖的蛋白表达均高于0 mg/L硒组（P均＜ 0.05）.在硒水平为0 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖酶-1 mRNA表达（0.535±0.033、1.071±0.043、1.454±0.058）均高于0 mg/L的T-2毒素组（0.481±0.023,P均＜0.05）；在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖酶-1 mRNA表达（1.057±0.048、0.555±0.036、0.902±0.045）均高于0 mg/L的T-2毒素组（0.346±0.020,P均＜0.05）.在硒水平为0 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖酶-2 mRNA表达（0.596±0.038、0.656±0.033、0.949±0.049）均高于0 mg/L的T-2毒素组（0.387±0.020,P均＜0.05）；在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖酶-2 mRNA表达（0.600±0.040、0.453±0.031、0.164±0.011）均低于0 mg/L的T-2毒素组（1.021±0.046,P均＜0.05）；在T-2毒素分别为10、20μg/L时,0.1 mg/L硒组的蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2 mRNA表达均低于0 mg/L硒组（P均＜ 0.05）.结论 T-2毒素通过上调蛋白聚糖的主要代谢酶蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2达到降解蛋白聚糖的作用,微量元素硒对T-2毒索引起的软骨细胞蛋白聚糖降解有一定保护作用.

低硒对T-2毒素致大鼠关节软骨细胞死亡形式的影响

目的探讨低硒条件下T-2毒素中毒大鼠关节软骨细胞死亡形式。方法选择32只雄性健康SD大鼠，按体质量采用随机数字表法分为2组，每组16只，分别给予硒含量为101．5、1．1μg／蚝的常规和低硒饮食。30d后，将常规饲料组分为对照组和T-2组，低硒饲料组分为低硒组和低硒＋T-2毒素组，每组8只大鼠。T-2毒素组和低硒＋T-2毒素组每日给予T-2毒素（100μg／kg）灌胃饲养。30d后处死大鼠，取左侧膝关节，HE和番红0固绿染色，光镜下观察大鼠膝关节软骨病理学改变；原位缺口末端（TUNEL）法检测软骨细胞凋亡，计算凋亡指数；免疫组织化学法检测大鼠关节软骨细胞活化caspase-3和RIP3的表达。结果光镜下，低硒＋T-2毒索组关节软骨深层可见片状坏死，软骨细胞死亡变为“红色影子”细胞或红染的无结构区域。TUNEL染色，低硒＋T-2组与对照组、低硒组、T．2毒素组比较，表、中层关节软骨细胞凋亡指数差异有统计学意义[（7．474-0_34）％比（4．68±0．54）％、（2．67±O．64）％、（2．56±O．54）％；（72．06±6．15）％比（16．10±3．00）％、（19．57±3.49）％、（19．33±5．19）％，P均〈0．05]；表、中层活化caspase．3阳性率差异有统计学意义[（4．75±0．67）％比（1．24±0．25）％、（0．00±0．00）％、（0．00±O．00）％；（51．13±4．18）％比（10．97±3．01）％、（15．36±4．37）％、（15．23±3．13）％，P均〈0．05]；中层RIP3阳性率差异有统计学意义[（25．91±13．39）％比（1．59±1．14）％、（4．32±2．91）％、（7．50±5．00）％，P均〈0．05]。4组大鼠关节软骨深层细胞凋亡指数及活化caspase-3、RIP3表达水平比较，差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论低硒条件下T-2毒素中毒大鼠关节软骨中层软骨细胞的死亡形式为坏死性凋亡与凋亡共同存在。