人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子抗肿瘤作用研究进展

围绕人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子的结构、主要成员及其抗肿瘤作用做一综述。Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子在机体内发挥重要的生理作用,具有广泛的研究和应用价值。它们在各种肿瘤中有着或高或低的表达,与肿瘤发生、发展相关,可能成为肿瘤治疗的新标靶。

青虾(Macrobrachium nipponense)Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子基因全长cDNA的克隆及表达

采用RACE技术,首次从青虾精巢中克隆得到KSPI基因全长cDNA。青虾KSPI基因cDNA全长890bp,包括80bp的5′UTR,546bp的3′UTR和编码87个氨基酸残基的264bp开放阅读框。预测蛋白包含1个保守的Kazal型结构域(CⅠX5CⅡX(6)VCⅢX(5)TYXNXCⅣX6CⅤX12CⅥ),结构域中P1活性位点为苏氨酸残基。应用MEGA4.1软件对青虾与已报道的虾类共15种KSPI氨基酸序列进行系统进化分析,结果表明,青虾KSPI与同样来源于精巢的罗氏沼虾KSPI进化关系最近聚为一支,其它虾类来源于肝胰腺和血细胞的KSPI聚为另外两支。采用定量PCR技术分析其组织分布,结果显示,KSPI基因在精巢、心脏和卵巢中有较高表达,其中精巢表达水平极高,并与心脏和卵巢表达差异分别达到显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)水平,其它组织表达较弱。

产前强化饮食联合体力活动干预对妊娠期糖尿病孕妇脂代谢、血清内脂素和丝氨酸蛋白酶抑制因子水平及母婴结局的影响

目的探讨产前强化饮食联合体力活动干预对妊娠期糖尿病(GDM)孕妇脂代谢、血清内脂素(Visfatin)和丝氨酸蛋白酶抑制因子(Vaspin)水平及母婴结局的影响。方法选取2020年5月至2021年12月120例GDM孕妇,年龄20~35岁,孕周24~28周,简单随机分为联合组和对照组各60例。对照组孕妇进行常规健康教育,联合组孕妇在常规健康教育的基础上进行产前强化饮食联合体力活动干预。比较两组孕妇的血糖、血脂、血清Visfatin、Vaspin、母婴结局。结果干预后,联合组的空腹血糖、餐后2 h血糖低于对照组(P<0.05)。联合组的血浆TC、TG、LDL-C水平低于对照组,血浆HDL-C水平高于对照组(P<0.05)。联合组的血清Visfatin、Vaspin水平低于对照组(P<0.05)。联合组剖宫产、羊水过多、早产、胎儿宫内窘迫、巨大儿的比例低于对照组(P<0.05)。结论产前强化饮食联合体力活动干预有利于调节GDM孕妇的脂代谢,降低血清Visfatin、Vaspin水平,血糖控制效果良好,显著改善母婴结局。

超声内镜检查术联合血清丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型和分泌型磷蛋白1对食管癌的早期诊断价值

目的探讨超声内镜检查术(EUS)联合血清丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型(SPINK1)和分泌型磷蛋白1(SPP1)早期诊断食管癌的临床价值。方法选取2021年6月-2023年5月于该院就诊的276例患者作为研究对象。经手术病理诊断为食管癌92例,作为食管癌组,同期收治且经组织活检判定为食管良性病变89例,作为良性病变组,同期在该院体检且身体健康的95例正常人,作为健康对照组。以病理结果为金标准,验证EUS诊断食管癌的准确率;比较3组患者血清SPINK1和SPP1表达情况;探讨食管癌患者血清SPINK1和SPP1表达与病理特征的关系;采用受试者操作特征曲线(ROC curve)分析EUS联合血清SPINK1和SPP1水平检测对食管癌的早期诊断效能。结果EUS结果显示,81例被诊断为食管癌,79例被诊断为良性病变,11例漏诊,10例误诊,准确率为88.40%(160/181);与健康对照组和良性病变组比较,食管癌组血清SPINK1和SPP1表达水平明显升高,良性病变组血清SPINK1和SPP1表达水平明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);血清SPINK1表达与患者肿瘤直径>2 cm、淋巴结转移、淋巴结阳性和组织分级为Ⅲ级有关(P<0.05),血清SPP1表达水平与肿瘤直径>2 cm、淋巴结转移、淋巴结阳性和雌激素受体阳性有关(P<0.05);ROC curve显示,EUS、血清SPINK1、SPP1水平单独检测和三者联合检测,早期诊断食管癌的曲线下面积(AUC)分别为0.862,0.834,0.782和0.926,三者联合早期诊断食管癌的临床效能明显优于EUS、血清SPINK1和SPP1单独检测(Z=2.30、Z=3.70、Z=4.23,P=0.022、P=0.000、P=0.000)。结论食管癌患者血清SPINK1和SPP1表达均异常上调,EUS联合血清SPINK1和SPP1表达水平联合检测用于早期诊断食管癌,具有较高的临床应用价值。

乳腺癌患者血清丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型、着丝粒蛋白U水平及预后分析

目的 探讨乳腺癌患者血清丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型(SPINK1)、着丝粒结合蛋白(CENPU)表达水平及其与患者预后的关系。方法 选择2018年8月—2021年8月在本院确诊为乳腺癌的115例患者作为乳腺癌组,并根据2年预后将患者分为预后良好组(92例)与预后不良组(23例);另选择98名同期健康体检者作为对照组。采用ELISA检测血清中SPINK1水平,采用qRT-PCR法检测血清CENPU表达水平;ROC曲线分析血清SPINK1、CENPU水平对乳腺癌患者预后不良的预测价值;Cox回归模型分析乳腺癌患者2年预后的影响因素。结果 乳腺癌患者血清SPINK1、CENPU水平明显高于对照组(P<0.05)。有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期乳腺癌患者血清中SPINK1、CENPU水平明显高于无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期乳腺癌患者(P<0.05)。预后不良组患者血清SPINK1、CENPU水平高于预后良好组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,SPINK1、CENPU预测预后不良的曲线下面积(AUC)分别是0.844(95%CI=0.744~0.943)、0.877(95%CI=0.801~0.953),二者联合预测的AUC为0.946(95%CI=0.899~0.994)。SPINK1、CENPU、淋巴结转移、TNM分期是乳腺癌患者2年内预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论 SPINK1和CENPU水平在乳腺癌患者血清中高表达,是乳腺癌患者预后不良的危险因素,可能作为评估乳腺癌患者预后的标志物。

冠心病心绞痛患者血清内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂、不规则趋化因子、单核细胞趋化蛋白-1与心功能、心肌损伤指标相关性分析

目的:探讨冠心病(CHD)心绞痛患者血清内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、不规则趋化因子(Fractalkine)与心功能、心肌损伤指标的相关性。方法:选取150例CHD心绞痛患者作为观察组(不稳定型心绞痛患者64例为A组、稳定型心绞痛患者86例为B组),同期收治的164例非CHD患者为C组。比较三组血清Fractalkine、Vaspin、MCP-1水平、心功能指标及心肌损伤指标,相关性采用Pearson相关性分析。结果:A组血清Vaspin水平低于B组、C组,且与C组比较,B组更低;A组血清Fractalkine、MCP-1水平高于B组、C组,且与C组比较,B组更高(均P<0.05)。A组左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)低于B组、C组,且与C组比较,B组更低;A组左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)高于B组、C组,且与C组比较,B组更高(均P<0.05)。A组各心肌损伤指标水平均高于B组、C组,且与C组比较,B组更高(均P<0.05)。Pearson相关性分析:CHD心绞痛患者血清Vaspins水平与LVEF、FS成正比;血清Vaspins水平与LVEDD、LVESD、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)成反比;血清Fractalkine、MCP-1与LVEF、FS成反比;血清Fractalkine、MCP-1与LVEDD、LVESD、CK、CK-MB、cTnI、H-FABP成正比(均P<0.05)。结论:随着CHD心绞痛患者病情加重,患者心功能及心肌损伤越严重,且患者血清Vaspins、Fractalkine、MCP-1与患者心功能及心肌损伤具有密切联系,临床可根据其水平变化评估病情进展情况。

乙型肝炎患者血清丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal1表达与病毒载量的相关性分析

目的:探究乙型肝炎患者血清丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal1(SPINK1)表达情况及其与病毒载量(HBV DNA)的关系。方法:选取在河北省沧州市传染病医院治疗的157例乙型肝炎患者为研究对象,选择126例健康者作为对照组,并收集血清,采用荧光实时定量PCR法(qRT-PCR)检测SPINK1 mRNA表达及HBV DNA载量,检测不同HBV DNA载量患者血清中HBsAg、抗HBs、HBeAg、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)水平,Logistic分析影响患者HBV DNA载量的影响因素;Pearson相关性分析患者血清SPINK1与血清抗原、肝功能指标的相关性。结果:与对照组比较,乙型肝炎组患者血清中SPINK1 mRNA表达明显升高(P<0.05)。与HBV DNA低载量组相比,高载量组患者血清中SPINK1 mRNA表达明显升高,血清HBsAg、HBeAg水平明显升高,HBcAb水平明显降低(P<0.05)。与HBV DNA低载量组相比,高载量组患者血清ALT水平明显升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示HBeAg、ALT、SPINK1是影响乙型肝炎患者HBV DNA载量的危险因素。Pearson相关性分析显示,SPINK1与HBV DNA载量、HBeAg、ALT呈显著正相关,差异均有统计学意义(r=0.426,r=0.408,r=0.395,均P<0.05)。结论:乙型肝炎患者血清SPINK1表达显著升高,与患者肝损伤、血清抗原水平及病毒载量有关,是影响病毒载量的危险因素。SPINK1有望成为乙型肝炎患者病情评估、诊治的生物学指标。

家蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因BmSPI3的克隆与表达特征分析

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),且P1活性位点为赖氨酸(K),因此将该基因命名为BmSPI3(Gen-Bank登录号:DN237641)。通过PCR扩增BmSPI3基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-BmSPI3,并转化到E.coliBL21(DE3)表达,经SDS-PAGE电泳检测在约36kD处有明显的蛋白表达条带。提取各发育时期蚕体和5龄幼虫各个组织的总RNA进行荧光定量PCR,检测结果表明:BmSPI3在5龄幼虫期表达量最高,卵期最低;在5龄幼虫表皮中的表达量最高,在马氏管的表达量最低。推测BmSPI3对胰蛋白酶和类胰蛋白酶具有抑制作用。

丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型在人肺腺癌组织表达上调并促进肺腺癌细胞的增殖

目的探讨肺腺癌组织丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型(SPINK1)表达与生存时间的关系及其对肺腺癌细胞生长的影响。方法用Real-time PCR法、免疫组织化学法检测285例肺腺癌组织和癌旁组织SPINK1的表达,并分析其表达水平与临床病理特征及预后的关系。利用SPINK1慢病毒表达载体及小干扰RNA(si RNA),处理人肺腺癌细胞系,光学显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,ELISA或Real-time PCR检测SPINK1表达水平,细胞计数和集落形成法检测肺腺癌细胞生长情况。结果肺腺癌组织SPINK1 mRNA和蛋白表达均上调(均P<0. 0001),SPINK1高表达组患者总生存时间短于低表达组(50. 0个月vs 64. 5个月,P<0. 001)。SPINK1过表达组,肺腺癌细胞上清液SPINK1蛋白高表达(P <0. 05),增殖与克隆形成能力均上调(P <0. 05);SPINK1敲减组,肺腺癌细胞SPINK1 mRNA表达下调,增殖能力下调(P<0. 05)。结论肺腺癌组织SPINK1高表达提示患者预后不良; SPINK1促进人肺腺癌细胞的增殖。

2型糖尿病患者新型脂肪因子血清内脏脂肪素和内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子的表达水平与左心室肥厚的关系

目的研究2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者新型脂肪因子血清内脏脂肪素(visfatin)、内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子(vaspin)的表达水平与左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)的关系。探讨影响T2DM患者发生LVH的相关因素。方法入选93例明确诊断为T2DM患者,行超声心动图检查评估心脏结构功能,并计算左室心肌质量指数(left ventricular mass index,LVMI)。根据LVMI将患者分为T2DM合并LVH组(病例组,n=45)与T2DM不合并LVH组(对照组,n=48),收集患者一般情况,检测生物化学指标、血清vaspin和visfatin等指标。分析vaspin和visfatin在T2DM中表达情况与LVH的相关性。结果相较于对照组,病例组的visfatin和vaspin浓度升高[(4.57±2.74)ng/mL vs(3.35±2.05)ng/mL,(417.40±230.71)pg/mL vs(328.07±218.99)pg/mL,P<0.05]。Logistic多因素回归分析显示,visfatin、冠状动脉粥样硬化性心脏病、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)是T2DM合并LVH的独立预测因素(P<0.05)。在对visfatin与糖脂代谢相关因素分析中发现,T2DM人群中visfatin浓度与HDL-C呈负相关(P<0.05)。结论在T2DM患者中,随着LVMI的增加,血清visfatin浓度增加。Visfatin可能参与了T2DM发生LVH的病理过程,并与糖脂代谢紊乱相关。Visfatin可能是T2DM患者发生LVH的预测因素。

青蛤Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及其在组织间的表达分析

利用构建的SMART-cDNA文库及高通量测序方法，获得了青蛤Kazal家族丝氨酸蛋白酶抑制剂基因（Serine Protease Inhibitor，SPI）的全长序列，采用荧光定量PCR方法分析了SPI在青蛤各组织的表达情况，并在鳗弧菌胁迫下分析了SPI在青蛤血液中的时序表达关系。结果表明，青蛤SPI基因全长587 bp，CDS为67-520 bp，编码151个氨基酸，具有19个氨基酸的信号肽序列；荧光定量PCR结果显示，该基因在血液、肝脏、外套膜、鳃和闭壳肌等组织中表达差异明显，其中血液中表达水平最高，在闭壳肌中表达水平较低，其他组织表达量极少；在鳗弧菌刺激后3 h和48 h青蛤血液中SPI的表达量出现明显上调的趋势且与对照组有极显著性差异（P〈0.01）,说明SPI基因在青蛤的免疫反应中具有重要的作用。

草鱼丝氨酸蛋白粗酶的提取、酶学特性及大豆胰蛋白酶抑制剂对其活性的影响

【目的】探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)粗酶的提取方法、酶学特性,以及大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对草鱼鱼糜凝胶品质的影响,为改善传统草鱼鱼糜制品品质提供理论基础。【方法】从草鱼背肌中提取MBSP粗酶液,探究提取过程中漂洗次数(1~5次)、热处理温度(35、40、45、50、55℃)、酸洗脱pH值(pH 4.0、pH 5.5)对提取液酶活性的影响,获得最佳提取条件;设置梯度实验探究所得酶的最适温度、pH、稳定性等酶学特性,最后探究大豆胰蛋白酶抑制剂对粗酶酶活性的影响及其对草鱼鱼糜凝胶性能的调控。【结果及结论】经3次漂洗、45℃热处理、pH 4.0酸洗脱后得到的草鱼MBSP粗酶液酶活性最高(P<0.05);所得MBSP最适pH值在9.0附近,最适温度为45℃,具有较好的温度稳定性(P<0.05),其活性可被Na^(+)在一定程度上抑制且被K+、Ca^(2+)激活(P<0.05);STI添加可以显著改善草鱼鱼糜质构,其对草鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶有可逆竞争性抑制作用,半抑制质量浓度为10.85μg/mL,抑制常数Ki=0.24μmol/L。

牙周基础治疗对2型糖尿病伴慢性牙周炎患者龈沟液丝氨酸蛋白酶抑制剂和肿瘤坏死因子-α水平的影响

目的观察牙周基础治疗对2型糖尿病伴发或不伴发慢性牙周炎患者龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法本研究包含60个研究对象,分为4组:15例2型糖尿病伴发慢性牙周炎患者为DM-CP组;15例慢性牙周炎不伴发2型糖尿病患者为CP组;15例牙周健康的2型糖尿病患者为DM组;15例牙周及全身系统均健康的个体为CTRL组。治疗前与牙周基础治疗8周后取样GCF并检测牙周临床指标。通过ELISA法检测GCF样本中vaspin和TNF-α的水平。结果治疗前慢性牙周炎组GCF中vaspin和TNF-α水平显著高于牙周健康组(P<0.05),治疗后慢性牙周炎组GCF中vaspin和TNF-α水平显著降低(P<0.05)。各组vaspin总量与TNF-α总量、糖化血红蛋白水平、牙龈指数以及探诊深度在统计学上存在正相关关系(P<0.05)。结论牙周基础治疗能明显降低慢性牙周炎患者GCF中vaspin和TNF-α的水平。提示GCF中vaspin和TNF-α可作为糖尿病、牙周炎诊断及其预后的炎性标志物。

血清丝氨酸蛋白酶抑制剂、内脂素、趋化素在2型糖尿病并发非酒精性脂肪性肝病中的表达及与胰岛素抵抗的关系

目的探讨血清丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、内脂素(Visfatin)、趋化素(Chemerin)在2型糖尿病(T2DM)并发非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)病人中的表达及其与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选取2018年1月至2019年8月南阳市中心医院收治的T2DM,并发NAFLD病人76例作为观察组,未并发NAFLD病人62例作为对照组。比较两组血清Vaspin、Visfatin、Chemerin水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析上述因子对T2DM并发NAFLD的诊断价值,并结合肝影像学诊断结果对比不同病情程度病人血清Vaspin、Visfatin、Chemerin水平、胰岛素参数[胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)],分析各血清因子与胰岛素参数关联性及T2DM并发NAFLD病情程度的影响或关联作用因素。结果观察组血清Vaspin[(82.03±12.46)ng/L比(70.81±11.22)ng/L]、Visfatin[(39.58±6.90)µg/mL比(33.27±5.73)µg/mL]、Chemerin[(53.37±8.61)ng/L比(45.39±8.02)ng/L]水平及HOMA-IR[(2.71±0.67)比(1.36±0.54)]高于对照组(P<0.05);Chemerin诊断T2DM并发NAFLD的AUC值最大,为0.758。随T2DM并发NAFLD病情加重血清Vaspin、Visfatin、Chemerin、HOMA-IR呈升高趋势,ISI呈降低趋势(P<0.05)。血清Vaspin、Visfatin、Chemerin与HOMA-IR呈正相关,与ISI呈负相关(P<0.05)。BMI、WHR、血清Vaspin、Visfatin、Chemerin、HOMAIR、ISI是T2DM并发NAFLD病情程度的独立影响或关联作用因素(P<0.05)。结论T2DM并发NAFLD病人存在血清Vaspin、Visfatin、Chemerin异常表达情况,且表达水平与IR关系密切,可能通过诱导IR间接参与T2DM并发NAFLD的发病发展过程。

中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal)的重组表达及活性分析

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂可以通过精确调控丝氨酸蛋白酶的活力,在生物体的防御应答等众多生物过程中发挥重要作用。以前期克隆的中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal,GenBank注册号为DQ318856)为基础,对其功能结构域进行序列比对和进化分析;组织表达分析结果表明,该基因在血细胞、鳃和淋巴器官等组织中高水平表达,而在眼柄、神经和肌肉中无表达;利用原核表达系统对该基因成熟肽区域成功进行了重组表达,纯化后的目的蛋白最终得率为0.4 g/L培养液;活性分析结果显示,复性后的rFc-Kazal对鳗弧菌、金黄色葡萄球菌、杀鲑气单胞菌、苏云金芽孢杆菌有明显的抑菌作用。

腺苷脱氨酶、C型凝集素及丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达

目的了解腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)基因、C型凝集素(C-lectin)基因和丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin)基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达情况。方法分别制备未吸血雌蚊唾液腺(SG组)和吸血雌蚊唾液腺(BSG组)、雌蚊躯体(无头无唾液腺,C组)和雄蚊组织(无头含唾液腺,M组)的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR技术,以β肌动蛋白(β-actin)基因作为内参,根据GenBank公布的ADA、C-lectin和Serpin基因序列设计特异性引物进行RT-PCR,分析以上基因在不同组织中的表达情况。结果与雌蚊躯体和雄蚊组织中相对表达量相比,ADA基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了545倍和123倍(P<0.01);C-lectin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了3929倍和4973倍(P<0.01);Serpin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了1911倍和2978倍(P<0.01)。吸血前后雌蚊唾液腺中ADA、C-lectin和Serpin等3个基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ADA在蚊虫组织中均有表达,在雌蚊唾液腺中高表达;C-lectin和serpin基因在雌蚊唾液腺中特异高表达。

冠心病患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂与炎性因子的相关性

目的探讨冠心病(CHD)患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)与炎性因子的关系。方法选择CHD患者139例,健康对照者52例,依据相关诊断标准将CHD患者分为稳定性心绞痛(SAP)组54例、不稳定性心绞痛(UAP)组48例、急性心肌梗死(AMI)组37例,同时根据冠状动脉病变支数将CHD患者分为1支病变组60例、2支病变组46例、≥3支病变组33例。采用ELISA法测定血清中vaspin、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10、1,25二羟维生素D3〔1,25(OH)_2D_3〕,并做统计学处理。结果 CHD组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于健康对照组,TNF-α、IL-6、IL-10高于健康对照组(P<0.05)。按临床类型分组:AMI组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于SAP组、UAP组,TNF-α、IL-6、IL-10高于SAP组、UAP组(P<0.05);UAP组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于SAP组,TNF-α、IL-10高于SAP组,(P<0.05)。将CHD患者按照血管病变的情况分组:≥3支病变组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于1支病变组和2支病变组,TNF-α、IL-6、IL-10、Gensini积分高于1支病变和2支病变组(P<0.05)。2支病变组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于1支病变组,(TNF)-α、(IL)-10、Gensini积分高于1支病变组,(P<0.05)。Spearman相关分析显示,在CHD组血清vaspin与BMI、1,25(OH)_2D_3呈正相关(r值分别为0.462、0.214,P<0.05),与TNF-α、IL-6、IL-10呈负相关(r值分别为-0.320、-0.238、-0.321,P<0.05)。根据血管病变支数分组:Gensini积分与vaspin、1,25(OH)_2D_3呈负相关(r值分别为-0.538、-0.242,P<0.05),与TNF-α、IL-6、IL-10呈正相关(r值分别为0.385、0.265、0.341,P<0.05)。结论 CHD患者具有较低浓度的vaspin,vaspin含量与炎性因子相关,与CHD的血管病变严重程度有关。

神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂在大鼠小胶质细胞缺氧／复氧模型上的作用

目的探讨神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(neuroserpin,NSP)是否可以改变组织型纤溶酶原激活物(tissueplasminogen activator,tPA)对于小胶质细胞(microglia,MG)活化的影响。方法体外原代培养的大鼠皮层MG并鉴定。建立缺氧-复氧模型并鉴定。首先,使用ELISA试剂盒测定MG在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)状态下自身释放tPA的含量,细胞被分为正常组、PBS对照组和OGD3h复氧不同时间组(1、3、5、7、24 h)。其次,研究NSP在MG缺氧/复氧时的作用,本部分实验分3组,分别为缺氧/复氧干预组、tPA干预组及tPA+NSP干预组。以上各组均设3个复孔,实验重复3次。采用倒置相差显微镜直接观察盖玻片上细胞形态学变化,CCK-8法检测各组间细胞增殖率,ELISA试剂盒测定IL-1β和NO含量。结果 MG在H/R时合成tPA,OGD3h复氧3h时释放量最多。H/R时MG激活,炎性因子IL-1β和NO的释放增多。tPA干预MG后,细胞活化并增殖、IL-1β和NO的释放增多。各NSP预处理组细胞活化、增殖和炎性因子的释放增多均没有tPA或H/R干预组明显。结论 MG在H/R时合成tPA。H/R早期即诱发了MG的活化。tPA可以进一步诱发MG的增殖和活化。H/R和tPA的干预均引起IL-1β和NO的释放。NSP可减轻H/R和tPA干预引起的MG活化和增殖,减少MG中IL-1β和NO的释放。

初诊2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病患者利拉鲁肽治疗后血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂水平的变化

目的探讨初诊2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)变化及胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽对血浆Vaspin水平的影响。方法将92例新诊断2型糖尿患者,按有无脂肪肝分为单纯糖尿病组52例(DM组),合并NAFLD组40例(DM+NAFLD组),另选健康对照组50例(NGT组)。测定血清Vaspin、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、血脂、糖化血红蛋白(HbA1c)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT),采用稳态模型(HOMA-IR)评估胰岛素抵抗。分析Vaspin与脂肪肝的关系,观察利拉鲁肽治疗前后T2DM合并NAFLD患者血浆Vaspin水平变化。结果 DM+NAFLD组血清Vaspin水平高于NGT组与DM组,差异有显著性(P<0.01),DM组高于NGT组,差异有显著性(P<0.01),DM组与DM+NAFLD组比较,差异无显著性(P>0.05)。经利拉鲁肽治疗后,Vaspin水平较治疗前明显降低,差异有显著性(P<0.01),体重、FBG、HbA1c、InHOMAIR较治疗前降低,差异有显著性(P<0.01)。Vaspin与性别、TG、HbA1c、InFINS、InHOMA-IR成正相关(r值分别为0.561,0.279,0.481,0.251,0.181;P<0.05)。Logistic回归分析显示InFINS、HbA1c和TG为影响Vaspin水平的独立相关因素,Vaspin、HbA1c、InHOMA-IR和TG是初诊T2DM合并NAFLD危险因素。结论血清Vaspin水平的变化可能在初诊T2DM合并NAFLD的发生发展中起一定作用,利拉鲁肽能有效改善初诊T2DM合并NAFLD患者的糖脂代谢和胰岛素敏感性,同时降低血浆Vaspin水平。

2型糖尿病患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂与糖脂代谢的相关性研究

目的探讨2型糖尿病患者血清中脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)与糖脂代谢的关系。方法用ELISA法测定80例2型糖尿病,69例空腹糖耐量受损患者,73例健康对照者血清中vaspin的水平,同时测定空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HBA1C)、超敏CRP(hsCRP),并做统计学处理。结果 2型糖尿病组vaspin水平显著高于健康对照组和空腹糖耐量受损组(P<0.05),空腹糖耐量受损组vaspin水平高于健康对照组(P<0.05)。同组患者中肥胖亚组vaspin水平高于非肥胖亚组(P<0.05),2型糖尿病组中血清vaspin与体质指数(body mas index,BMI)、FBG、FINS、HOMA-IR、TG、hsCRP呈正相关(r值分别为0.472、0.464、0.302、0.347、0.268、0.311,P<0.05)。结论 Vaspin是联系2型糖尿病糖脂代谢的重要脂肪因子,与BMI、FBG、FINS、HOMA-IR、TG、hsCRP呈正相关,可为2型糖尿病治疗提供新思路。