大叶落地生根酵母cDNA文库的构建及KdSAHH基因自激活检测

大叶落地生根(Kalanchoe daigremontiana)主要以叶缘凹陷处产生不定芽的方式实现高效再生,是研究无性繁殖的模式植物。为筛选大叶落地生根不定芽发育过程中重要调控蛋白的互作因子,本研究提取大叶落地生根不同组织来源的植物RNA,利用RNA反转录5′末端交换机制(Switching mechanism at 5′end of RNA transcript,SMART)建库技术和双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease,DSN)均一化处理技术,构建大叶落地生根酵母cDNA杂交文库,同时构建诱饵载体pGBKT7-KdSAHH,并用营养缺陷法检测其自激活活性。对文库进行质量检测的结果显示:文库滴度为3.2×10^(6) CFU·mL^(-1),文库总容量为4.8×10^(7) CFU,插入片段长度在250~2000 bp范围内,重组率为91.7%。诱饵载体pGBKT7-KdSAHH构建成功且在酵母中无转录自激活活性。本研究为后续利用酵母杂交技术筛选大叶落地生根KdSAHH基因的互作蛋白提供基础。