黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长作用研究

目的:探讨黄芪总苷液对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用。方法:以正常皮肤为对照,用免疫组化检测瘢痕疙瘩组织标本中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)及其转导因子(SMAD family member,Smad)的表达情况;不同浓度黄芪总苷液干预HFF-1人皮肤成纤维细胞后,MTT法检测其最适浓度;Real time-PCR测定成纤维细胞TGF-β的转导因子Smad2(SMAD family member 2),Smad3(SMAD family member 3),Smad4(SMAD family member 4),Smad7(SMAD family member 7)mRNA的表达;Western blot检测成纤维细胞TGF-βRⅡ,Smad2,Smad3,Smad4,Smad7的蛋白水平表达。结果:与正常皮肤组织相比,瘢痕疙瘩组织Smad蛋白表达水平明显提高(P<0.05),TGF-βRⅡ蛋白的表达水平在两组中没有明显差异(P>0.05)。MTT检测最适给药浓度为0.5μg·ml-1。两组细胞TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达量比较,给药组Smad2的表达水平明显提高,Smad3的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:黄芪总苷液可能通过过表达Smad2以及抑制Smad3的表达来影响TGF-β/Smad通路过程从而抑制成纤维细胞的形成。

载N-（4-羟基苯基）维甲酰胺脂质微泡联合超声对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

目的探讨载N-（4-羟基苯基）维甲酰胺（4HPR）及4HPR脂质体（4HPR-L）与4HPR脂质微泡（4HPR-LM）联合超声对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（Fb）增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法（1）采用水化超声法制备4HPR-L及4HPR-LM，采用高效液相色谱法、动态光散射法、透射电镜对4HPR-L外观形态、粒径分布、Zeta电势、载药浓度、包封率、载药量进行考察。（2）取人瘢痕疙瘩Fb，采用随机数字表法（分组方法下同）分为13组，每组6孔。对照组细胞不给予任何处理，0.5 W 30 s组、0.5 W 60 s组、0.5 W 120 s组、0.7 W 30 s组、0.7 W 60 s组、0.7 W 120 s组、1.0 W 30 s组、1.0 W 60 s组、1.0 W 120 s组、1.5 W 30 s组、1.5 W 60 s组、1.5 W 120 s组12个超声组细胞分别给予对应参数超声处理。常规培养24 h后，酶标仪测定细胞活力。另取人瘢痕疙瘩Fb，分为5组，每组6孔。对照组细胞不给予任何处理，1、10、20、50 μg/mL空白脂质微泡组细胞给予对应质量浓度的空白脂质微泡处理，常规培养24 h后同前测定细胞活力。另取人瘢痕疙瘩Fb，分为6组，每组12孔。对照组细胞不给予任何处理，1、10、20、50、100 μg/mL 4HPR-L组细胞分别加入含对应质量浓度4HPR的4HPR-L处理，常规培养24、48 h后每组各取6孔同前测定细胞活力。另取人瘢痕疙瘩Fb，分为4组，每组6孔。对照组细胞不给予任何处理，4HPR组、4HPR-L组和4HPR-LM＋超声组细胞分别加入4HPR、4HPR-L、4HPR-LM（4HPR质量浓度均为20 μg/mL）处理，4HPR-LM＋超声组细胞给药后立即给予0.5 W 60 s超声处理。常规培养24 h后同前测定细胞活力。（3）取人瘢痕疙瘩Fb，分为对照组、4HPR组、4HPR-L组和4HPR-LM＋超声组，每组3孔，各组细胞处理同前。常规培养24 h后流式细胞仪检测细胞凋亡情况。（4）取人瘢痕疙瘩Fb，同（3）分组及处理，常规培养24 h后流式细胞仪检测细胞周期分布情况。对数据行单因素方差分析和t检验。结果（1）4HPR-L颗粒呈大小均匀的球形或类球形结构，粒径为（100.1±1.3）nm，Zeta电势为（－34.3±2.3）mV。4HPR-L溶液中4HPR质量浓度在1 400 μg/mL左右，包封率为（95.8±1.2）%，载药量为（8.3±0.4）%。（2）12个超声组细胞活力均高于93.0%。1、10、20、50 μg/mL空白脂质微泡组细胞活力均高于95.0%。1 μg/mL 4HPR-L组细胞给药24、48 h细胞活力相近（t＝0.393，P〉0.05），给药24 h时10、20、50、100 μg/mL 4HPR-L组细胞活力明显高于给药48 h（t＝44.593、22.961、32.224、35.337，P〈0.01）。4HPR组、4HPR-L组与4HPR-LM＋超声组给药24 h细胞活力分别为（47.3±0.7）%、（42.3±1.7）%、（38.6±0.8）%。4HPR组细胞活力明显高于4HPR-L组和4HPR-LM＋超声组（t＝4.551、15.895，P〈0.05或P〈0.01），4HPR-L组细胞活力明显高于4HPR-LM＋超声组（t＝－3.360，P〈0.05）。（3）4HPR组、4HPR-L组与4HPR-LM＋超声组总凋亡细胞百分比分别为（32.8±2.4）%、（42.5±2.4）%、（58.5±6.3）%，明显高于对照组的（14.9±1.6）%（t＝8.748、13.637、9.500，P〈0.01）；4HPR-L组与4HPR-LM＋超声组总凋亡细胞百分比明显高于4HPR组（t＝4.049、5.393，P〈0.05或P〈0.01）；4HPR-LM＋超声组总凋亡细胞百分比明显高于4HPR-L组（t＝3.371，P〈0.01）。（4）4HPR组G2/M期细胞百分比高于对照组，但差异无统计学意义（t＝2.107，P〉0.05）；4HPR-L组G2/M期细胞百分比明显高于4HPR组和对照组（t＝18.169、30.026，P〈0.01）；4HPR-LM＋超声组G2/M期细胞百分比明显高于4HPR-L组、4HPR组和对照组（t＝4.932、25.854、66.231，P〈0.01）。结论4HPR可抑制人瘢痕疙瘩Fb增殖、诱导细胞凋亡及发生G2/M期阻滞，且4HPR-LM联合超声的作用效果优于4HPR-L和游离4HPR。